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3M高靈敏度大腸菌群測(cè)試片操作以及判讀 |
| 一、高靈敏度大腸菌群測(cè)試片 操作方法 | |
 1. 未開封時(shí)，冷藏于≤8℃（≤46℉），并在保存期內(nèi)用完，高溫度時(shí)，凝固水可以排除，包裝物最好于室溫啟開。 |
 2. 已開封的，將封口以膠帶封緊。 |
 3. 已啟開的包裝袋不要冷藏并于一個(gè)月內(nèi)使用完。 |
 4. 制備食物樣品稀釋液，稱取或吸取食物樣品，置入適宜的無菌容器內(nèi)，如均質(zhì)袋、稀釋瓶、WhirlPak bag或者其他滅菌容器內(nèi) |
 5. 加入適量的無菌稀釋液,包括Buffered peptone Buffer(IDF phopsphate buffer ,用0.0425g/L的KH2PO4調(diào)PH7.2) 、0.1%的旦白膠水(ISO方法6887) 、緩沖旦白膠水(ISO方法6579) 、鹽溶液(0.85-0.90%)、bisulfite-free letheen broth或蒸餾水.但不可用含有枸櫞酸鹽、bisulfite or thiosulfate的緩沖液. 因?yàn)樗芤种咕L(zhǎng)。 |
樣品的稀釋液調(diào)PH6.6-7.2對(duì)酸性樣用IN NaOH、堿性樣用INHCI調(diào)PH。 |
 7、將測(cè)試片置于平坦表面處，揭開上層膜。 |
 8、使用吸管將1ml樣液垂直滴加在測(cè)試片的中央處。 |
 9、細(xì)心將上層膜緩慢蓋下，避免有氣光泡產(chǎn)生，切勿使上層膜直接落下。 |
 10、使用壓板（平面底朝下）放置在上層膜中央處。 |
 11、輕輕的壓下，使樣液均勻覆蓋于圓形的培養(yǎng)面積上，切勿扭轉(zhuǎn)壓板。 |
 12、拿起壓板，靜置至少1分鐘以使培養(yǎng)基凝固。 |
 14、可目視及用標(biāo)準(zhǔn)菌落計(jì)數(shù)器或其它的照明放大鏡計(jì)數(shù)，并可參考判讀卡計(jì)算菌落數(shù)。 |
 15、可以分離菌落作進(jìn)一步鑒定，即掀起上層膜，由培養(yǎng)膠上挑取單個(gè)菌落。 |
 13、測(cè)試片的透明面朝上，可堆疊至20片。培養(yǎng)時(shí)間和溫度因方法而有不同，最通用的認(rèn)可方法是：總大腸菌群 ● AOAC官方方法986.33和989.10（乳/生乳和其它乳制品） 大腸菌群：32℃±1℃培養(yǎng)24±2h ● AOAC官方方法991.14（食品類） 大腸菌群：35℃±1℃培養(yǎng)24±2h ● NMKL方法（147.1993） 大腸菌群：37℃±1℃培養(yǎng)24±2h ● AFNOR認(rèn)可方法3M 01/2-09/89A和B（除水生貝殼類動(dòng)物外的所有食品） 大腸菌群：30℃±1℃培養(yǎng)24±2h 耐熱的（糞）大腸菌群 ● AFNOR認(rèn)可方法，3M 01/2-09/89C（所有食品） 44℃±1℃培養(yǎng)24±2h。當(dāng)提高培養(yǎng)溫度時(shí)，培養(yǎng)箱應(yīng)有一定的濕度是需要的。 |
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| 二、高靈敏度大腸菌群計(jì)數(shù)測(cè)試片 判讀方法 | |
 Coliform count = 4? |
 Coliform count = 13 |
| 在PetrifilmTM 高靈敏度檢驗(yàn)測(cè)試片上菌落計(jì)數(shù)相當(dāng)容易。測(cè)試片中的指示劑使革蘭氏陰性菌染成紅色，上層膜能截留大腸菌群產(chǎn)生的氣泡，當(dāng)大腸菌群大量產(chǎn)酸時(shí)，菌落周圍會(huì)產(chǎn)生粉紅色的菌暈。所以，計(jì)數(shù)紅色帶有氣泡的菌落為大腸菌群，菌落周圍的粉紅色菌暈使計(jì)數(shù)更加方便。 | |
 Coliform count = 30圓圈1, 2和3中的氣泡形狀有所不同。圓圈1中的氣泡和菌落相鄰；圓圈2中的氣泡撐破了菌落，使菌落看似氣泡的“輪廓”；圓圈3中的菌落被3個(gè)小氣泡圍住。細(xì)菌學(xué)手冊(cè)上規(guī)定，紅色不帶有氣泡的菌落不計(jì)作大腸菌群。 |
 Coliform count = 0注意圖4至圖9中培養(yǎng)基顏色的變化。隨著大腸菌群數(shù)和產(chǎn)酸的增加，培養(yǎng)基的顏色由淡桔黃色(圖4)逐漸向明顯的粉紅色(圖9)轉(zhuǎn)變。同時(shí)做陰性對(duì)照有助于區(qū)分培養(yǎng)基的顏色。 |
 Coliform count = 90 |
 Estimated coliform count = 320圓形的生長(zhǎng)面積約為60 cm2。當(dāng)菌落數(shù)大于150個(gè)時(shí)，可選擇1個(gè)或多個(gè)代表性方格來估算菌落數(shù)。計(jì)算每個(gè)方格的平均菌落數(shù)后乘以60，即為估算的大腸菌群數(shù)。 |
 Estimated coliform count = 840在接種區(qū)邊緣的菌落和氣泡可能較小，且邊緣培養(yǎng)基外觀略有差異，但不會(huì)影響菌落的計(jì)數(shù)。見圖7。 |
 Coliform count = TNTC在PetrifilmTM高靈敏度檢驗(yàn)測(cè)試片上，當(dāng)菌落數(shù)過多時(shí)難以計(jì)數(shù)，該現(xiàn)象稱為TNTC (Too Numerous To Count) 現(xiàn)象。該現(xiàn)象伴有以下特征：許多小型菌落和氣泡，有時(shí)培養(yǎng)基顏色會(huì)加深。見圖8。 |
 Coliform count = TNTC圖9中，測(cè)試片上有許多小型菌落，培養(yǎng)基顏色變深，為TNTC現(xiàn)象。 |
 Coliform count = 2食品顆粒通常呈不規(guī)則形狀，且不帶有氣泡。見圓圈1。在測(cè)試片上，人為的氣泡可能由于接種不當(dāng)引起，其形狀不規(guī)則，且不帶有紅色菌落。見圓圈2 。 |
6、攪拌或均質(zhì)樣品. 
