一、用途

軍團(tuán)菌乳膠凝集檢測試劑用于快速確證鑒定從選擇性平板上分離出的可疑嗜肺軍團(tuán)菌和常規(guī)分離的軍團(tuán)菌。試劑盒適用于檢測由疑似嗜肺軍團(tuán)菌引起的肺炎病人的樣品或環(huán)境樣品。試劑盒可分別檢測嗜肺軍團(tuán)菌血清1群和2-15群和常規(guī)分離的軍團(tuán)菌。(根據(jù)臨床微生物檢測手冊提及嗜肺軍團(tuán)菌血清16群，血清16群與血清6型交叉反應(yīng)，因此理論上2-15群乳膠試劑也與血清16群凝集)。該試劑盒僅供專業(yè)人員使用。

二、原理

測試試劑1，乳膠顆粒表面包被與嗜肺軍團(tuán)菌血清1群具有特異性的兔多克隆抗體。測試2-15群試劑的乳膠顆粒表面包被與嗜肺軍團(tuán)菌血清2-15群特異性的多克隆兔抗體。軍團(tuán)菌菌種測試試劑，乳膠顆粒表面包被與10種常規(guī)分離的軍團(tuán)菌血清具有特異性的兔多克隆抗體。（參見以下表格）當(dāng)乳膠顆粒與含軍團(tuán)菌或者從相關(guān)的軍團(tuán)菌加熱滅活的抗原的懸液混合后，發(fā)生免疫化學(xué)反應(yīng)，使乳膠顆粒迅速凝集。血清1群抗體包被的乳膠顆粒只在遇到血清1群的抗原時才會發(fā)生凝集，同樣，血清2-15群抗體包被的乳膠顆粒只有在遇到血清2-15群中的任何一種抗原時，才會發(fā)生凝集。軍團(tuán)菌抗體包被的乳膠顆粒與10種相關(guān)的軍團(tuán)菌會發(fā)生凝集。（參見以下表格）

血清1群乳膠試劑與血清1群抗原的反應(yīng)比血清2-15群乳膠試劑與血清2-15群抗原的反應(yīng)較快較強(qiáng)。其原因?yàn)樵谏�產(chǎn)過程中2-15群抗體的混合彼此有一定的稀釋作用。軍團(tuán)菌乳膠與嗜肺軍團(tuán)菌血清1乳膠試劑的作用方法相同。

三、試劑盒組成成分

REAG TEST 1  1群測試試劑　HM45a 軍團(tuán)菌血清1群乳膠試劑　2.5mL

乳膠顆粒包被與嗜肺軍團(tuán)菌血清1群特異性的兔多克隆抗體和鼠單克隆抗體。含0.099%的疊氮化鈉。（藍(lán)色瓶蓋）

REAG TEST 2-15  2-15群測試試劑　HM45b 軍團(tuán)菌血清2-15群乳膠試劑　2.5mL

乳膠顆粒包被與嗜肺軍團(tuán)菌血清2-15群特異性的兔多克隆抗體。含0.099%的疊氮化鈉防腐劑。（黃色瓶蓋）

CONTROL +  陽性對照試劑　HM45c　陽性對照　1.0mL

可與測試試劑1和2-15反應(yīng)的不具活性的軍團(tuán)菌的抗原，含0.099%的疊氮化鈉防腐劑。（黑色瓶蓋）

REAG TEST SPECIES   軍團(tuán)菌菌種測試試劑 HM45d 軍團(tuán)菌血清特殊乳膠試劑 2.5mL

乳膠顆粒表面包被與10種常規(guī)分離的軍團(tuán)菌血清具有特異性的兔多克隆抗體。（參見以下表格）

含0.099%的疊氮化鈉防腐劑。（紅色瓶蓋）

NaCl 0.85%   0.85%鹽水　HM40　0.85%生理鹽水　5.0mL

含0.099%的疊氮化鈉防腐劑。（白色瓶蓋）

使用說明書

檢測板

攪拌棒

需要的其它材料

l  接種環(huán)

l  軍團(tuán)菌選擇性分離培養(yǎng)基

l  用于煮沸處理的玻璃試管

l  0.85%生理鹽水

四、警告和注意事項(xiàng)

安全：

1、試劑僅供體外診斷使用。

2、試劑盒作防腐劑使用的疊氮化鈉可與鉛或銅制品反應(yīng)形成易爆的金屬疊氮化物。可用大量水沖洗以避免疊氮化物的堆積。

3、在處理或檢測可疑致病菌時應(yīng)采取適當(dāng)?shù)念A(yù)防措施。被污染的物品可用3%的次氯酸鈉消毒處理30分鐘。含酸的廢液應(yīng)作中和處理。

4、陽性對照液在生產(chǎn)中已作惰性處理。但在使用中，依然應(yīng)遵循潛在傳染性產(chǎn)品的處理程序。

檢測過程：

1、試劑盒應(yīng)按說明書使用。

2、所有試劑在使用前應(yīng)達(dá)到室溫。

3、不要稀釋試劑盒內(nèi)的任何試劑。

4、不要混合不同批次試劑盒的試劑。

5、不要冷凍試劑盒內(nèi)的試劑。

6、不要使檢測乳膠試劑的滴管接觸到陽性對照試劑或細(xì)菌樣品。

7、注意凝集狀態(tài)，呈凝乳狀或纖維狀可能為非真實(shí)凝集。

8、使用前應(yīng)確保檢測板清潔干燥。

五、貯存及保質(zhì)期

檢測試劑盒不使用時應(yīng)貯存在2～8℃，并應(yīng)在包裝盒標(biāo)簽上的有效期內(nèi)使用檢測試劑。

六、樣本

檢測選擇性分離平板上分離的可疑軍團(tuán)菌菌落。

七、檢測過程

質(zhì)量控制：

在每次使用檢測試劑盒前應(yīng)作下列質(zhì)量控制檢測，以確證試劑的有效性。

1、檢測試劑的控制：輕輕搖勻測試試劑(HHM45a，HM45b，HM45d)，將兩種測試試劑分別滴1滴于檢測板的二個反應(yīng)環(huán)內(nèi)，接著在兩個反應(yīng)環(huán)內(nèi)各滴1滴生理鹽水(HM40)，用2支攪拌棒分別在整個區(qū)域內(nèi)混勻測試液和生理鹽水，輕搖檢測板2分鐘并觀察是否會出現(xiàn)凝集。如果出現(xiàn)凝集反應(yīng)，表明檢測試劑或生理鹽水受到污染，應(yīng)廢棄處理。

2、陽性對照的控制：滴1滴陽性對照試劑(HM45c)于1個反應(yīng)環(huán)內(nèi)，接著在該反應(yīng)環(huán)內(nèi)滴1滴混勻的測試試劑1(HM45a)，不要使檢測乳膠試劑的滴管接觸到陽性對照試劑。用攪拌棒在整個區(qū)域內(nèi)混勻液體，輕搖檢測板2分鐘,應(yīng)觀察到凝集現(xiàn)象。重復(fù)上述步驟，做測試試劑2-15（HM45b）和軍團(tuán)菌菌種測試試劑（HM45d）的檢測，并應(yīng)觀察到凝集現(xiàn)象。如果其中一種測試試劑未出現(xiàn)凝集反應(yīng)，應(yīng)采用新鮮的檢測試劑盒。

測試程序：

1、各滴1滴生理鹽水(HM40)于檢測板的3個反應(yīng)環(huán)內(nèi)。

2、用接種環(huán)從選擇性分離平板上挑取3～4個可疑軍團(tuán)菌菌落，分別在2個反應(yīng)環(huán)內(nèi)的生理鹽水旁作涂片操作。

3、用攪拌棒在整個反應(yīng)環(huán)內(nèi)混勻生理鹽水和菌落，形成均勻的較濃菌懸液。

4、如果菌懸液保持均勻狀態(tài)，繼續(xù)第7步。如果菌懸液出現(xiàn)纖維狀或粒狀物（培養(yǎng)物較老或呈黏液狀時，易出現(xiàn)此種現(xiàn)象），按下述步驟操作。

5、往玻璃試管中加入0.5mL的生理鹽水，從選擇性平板中挑取可疑菌落制成均勻的菌懸液。

6、煮沸菌懸液5分鐘，冷卻至室溫后，分別取30μL滴加在檢測板上2個反應(yīng)環(huán)內(nèi)。

7、輕輕的搖勻測試乳膠試劑（HM45a,HM45b），形成均勻的懸液。

8、滴1滴測試試劑1于一個反應(yīng)環(huán)內(nèi)的菌懸液上，滴1滴測試試劑2-15于另一個反應(yīng)環(huán)內(nèi)的菌懸液上。不要使檢測乳膠試劑的滴管接觸到菌懸液。

9、各用1支干凈的攪拌棒在整個反應(yīng)環(huán)內(nèi)混勻菌懸液和測試試劑。

10、輕搖檢測板2分鐘，并觀察凝集結(jié)果。

11、記錄結(jié)果后，將攪拌棒和檢測板進(jìn)行適當(dāng)?shù)南�毒處理�?/span>

八、結(jié)果說明

觀察凝集結(jié)果，按下表進(jìn)行判斷

*非特異性凝集不排除存在軍團(tuán)菌的可能性，只是結(jié)果不確定。

九、使用的局限性

1、結(jié)果應(yīng)依據(jù)所有的臨床和實(shí)驗(yàn)室信息進(jìn)行判斷。

2、纖維狀凝集可能為假陽性結(jié)果，需進(jìn)一步實(shí)驗(yàn)確證。

3、培養(yǎng)時間過長或黏稠培養(yǎng)物在生理鹽水中不易形成均勻的菌懸液而出現(xiàn)非典型的凝集。因此要按上述的方法對培養(yǎng)物進(jìn)行前處理。

4、HKM^®軍團(tuán)菌乳膠試劑盒用于檢測選擇性平板上分離出的可疑1-15群嗜肺軍團(tuán)菌。陽性結(jié)果的菌株應(yīng)利用其在不含半胱氨酸的軍團(tuán)菌選擇性平板上不生長的特性確證其為軍團(tuán)菌屬。

十、檢測效果對比

HKM^®軍團(tuán)菌乳膠試劑盒與一種已廣泛使用的商業(yè)化的乳膠試劑盒檢測效果對比，用二種商品檢測分離出的嗜肺軍團(tuán)菌、非嗜肺軍團(tuán)菌和易存在潛在交叉反應(yīng)的菌株，共128株。

靈敏度　50/50＝100%

特異性　478/78＝100%

一致性　128/128＝100%

同時用HKM^® 軍團(tuán)菌乳膠試劑盒和對比試劑盒檢測分離出的嗜肺軍團(tuán)菌和其它軍團(tuán)菌，共70株，以辨別嗜肺軍團(tuán)菌血清1群和血清2-15群。

＊           這組50株分離的菌株中，12株在兩種檢測試劑中均存在交叉反應(yīng)。它們分別是金黃色葡萄球菌(4)、差異檸檬酸桿菌(1)、鮑氏不動桿菌(2)、斯氏普羅威登斯菌(1)、蠟樣芽孢桿菌(2)、肺炎克雷伯氏菌(1)、鏈球菌屬(1)。但所有這些菌株接種在軍團(tuán)菌選擇性平板上培養(yǎng)時，均不生長或生長的菌落特征非常不典型。同時蠟樣芽孢桿菌呈現(xiàn)非典型凝集(呈纖維狀)。

＊            

所有分離出的嗜肺軍團(tuán)菌血清1群菌株與測試試劑2-15均無交叉反應(yīng)，同樣地，所有嗜肺軍團(tuán)菌血清2-15群菌株與測試試劑1均無交叉反應(yīng)。所有分離的非嗜肺軍團(tuán)菌與HKM^®軍團(tuán)菌乳膠試劑盒中的兩種測試試劑均無交叉反應(yīng)。

軍團(tuán)菌菌種乳膠試劑與所有測試檢查的嗜肺軍團(tuán)菌血清群都沒有交叉反應(yīng)。軍團(tuán)菌特殊乳膠試劑能檢測以下10種軍團(tuán)菌：

軍團(tuán)菌菌種乳膠試劑的特異性實(shí)驗(yàn)顯示legionella sainthelensi spp1,hacklaie spp1和 tucsonensis也能產(chǎn)生陽性結(jié)果。

十一、重復(fù)性

批內(nèi)重復(fù)性：通過以系列稀釋度的參照抗原和試劑盒對照抗原及一組47種細(xì)菌樣品盤對同1批產(chǎn)品的靈敏度和特異性進(jìn)行檢測。由不同的操作者隨機(jī)測試3次，最終效價(jià)由參照/對照抗原測定，并且3次定性分析結(jié)果完全一致。