一、用途

沙門氏菌乳膠凝集檢測試劑用于確證鑒定選擇性平板上分離出的可疑菌落。該試劑盒僅供專業(yè)人員使用。

二、原理

乳膠顆粒表面包被與沙門氏菌特異性抗原具有特異性的多價(jià)抗血清。與沙門氏菌菌懸液混合后，乳膠顆粒可迅速凝集。HKM^®沙門氏菌乳膠凝集試劑盒可檢測99%以上的有動(dòng)力的沙門氏菌和特定的無動(dòng)力沙門氏菌。

三、試劑盒組成成分

REAG TEST  測試試劑　HM42a 沙門氏菌乳膠試劑　2.5mL

乳膠顆粒包被沙門氏菌抗原相應(yīng)的兔抗血清。含0.099%的疊氮化鈉防腐劑。（藍(lán)色瓶蓋）

CONTROL +  陽性對(duì)照試劑　HM42b　陽性對(duì)照　　0.5mL

無活性的沙門氏菌抗原，含0.099%的疊氮化鈉防腐劑。（黑色瓶蓋）

NaCl 0.85%   0.85%鹽水　HM40　0.85%生理鹽水　5.0mL

含0.099%的疊氮化鈉防腐劑。（白色瓶蓋）

使用說明書

檢測板

攪拌棒

需要的其它材料

l      接種環(huán)

l      移液器

四、警告和注意事項(xiàng)

安全：

1、試劑僅供體外診斷使用。

2、試劑盒作防腐劑使用的疊氮化鈉可與鉛或銅制品反應(yīng)形成易爆的金屬疊氮化物。可用大量水沖洗以避免疊氮化物的堆積。

3、在處理或檢測可疑致病菌時(shí)應(yīng)采取適當(dāng)?shù)念A(yù)防措施。被污染的物品可用3%的次氯酸鈉消毒處理30分鐘。含酸的廢液應(yīng)作中和處理。

4、陽性對(duì)照液在生產(chǎn)中已作惰性處理，但在使用中依然應(yīng)小心處理。

檢測過程：

1、試劑盒應(yīng)按說明書使用。

2、所有試劑在使用前應(yīng)達(dá)到室溫。

3、不要稀釋試劑盒內(nèi)的任何試劑

4、不要混合不同批次試劑盒的試劑。

5、不要冷凍試劑盒內(nèi)的試劑。

6、不要使檢測乳膠試劑的滴管接觸到陽性對(duì)照試劑或細(xì)菌樣品。

7、注意凝集狀態(tài)，呈凝乳狀或纖維狀可能為非真實(shí)凝集。

8、使用前應(yīng)確保檢測板清潔干燥。

五、貯存及保質(zhì)期

檢測試劑盒不使用時(shí)應(yīng)貯存在2～8℃，并應(yīng)在包裝盒標(biāo)簽上的有效期內(nèi)使用檢測試劑。

六、樣本

可檢測選擇性分離平板上的沙門氏菌可疑菌落。

七、檢測過程

質(zhì)量控制：

在每次使用檢測試劑盒前應(yīng)作下列質(zhì)量控制檢測，以確證試劑的有效性。

1、檢測試劑的控制：滴1滴測試試劑(HM42a)和1滴生理鹽水(HM40)于同一個(gè)測試反應(yīng)環(huán)內(nèi)，用攪拌棒在整個(gè)區(qū)域內(nèi)混勻液體，輕搖檢測板2分鐘并觀察是否會(huì)出現(xiàn)凝集。如果出現(xiàn)凝集反應(yīng)，表明檢測試劑或生理鹽水受到污染，應(yīng)廢棄處理。

2、陽性對(duì)照的控制：滴1滴陽性對(duì)照試劑(HM42a)和1滴測試試劑(HM42a)于同一個(gè)測試反應(yīng)環(huán)內(nèi)，不要使檢測乳膠試劑的滴管接觸到陽性對(duì)照試劑。用攪拌棒在整個(gè)區(qū)域內(nèi)混勻液體，輕搖檢測板2分鐘，應(yīng)觀察到凝集反應(yīng)。如果未出現(xiàn)凝集反應(yīng)，應(yīng)采用新鮮的檢測試劑盒。

測試程序：

1、滴1滴生理鹽水(HM40)于檢測板的一個(gè)反應(yīng)環(huán)內(nèi)。

2、用接種環(huán)從選擇性分離平板上挑取可疑菌落，與反應(yīng)環(huán)內(nèi)的生理鹽水混合，形成均勻的混濁的菌懸液。

3、輕搖檢測板2分鐘，觀察是否會(huì)出現(xiàn)自動(dòng)凝集現(xiàn)象。如果菌懸液保持均勻狀態(tài)，繼續(xù)第4步。

4、搖勻乳膠測試試劑后，滴1滴于已滴加菌懸液的反應(yīng)環(huán)內(nèi)，不要使檢測乳膠試劑的滴管接觸到菌懸液。

5、用1支干凈的攪拌棒混勻菌懸液和測試試劑，輕搖檢測板2到3次，在2分鐘內(nèi)觀察凝集結(jié)果。

6、記錄結(jié)果后，將攪拌棒和檢測板進(jìn)行適當(dāng)?shù)南�毒處理�?/span>

八、結(jié)果說明

在2分鐘內(nèi)出現(xiàn)凝集，表明樣品中有沙門氏菌，如不出現(xiàn)凝集，表明測試菌落中無沙門氏菌。

九、使用的局限性

1、結(jié)果應(yīng)依據(jù)所有的臨床或?qū)嶒?yàn)室信息進(jìn)行判斷。

2、沙門氏菌的粗糙菌株可在生理鹽水中形成非特異性自動(dòng)凝集，因此不可用乳膠試劑盒檢測。

3、不能檢測部分無動(dòng)力沙門氏菌。

4、有些氧化酶陽性菌株可能引起假陽性凝集結(jié)果。

5、保存較長時(shí)間的腸桿菌科的營養(yǎng)瓊脂斜面培養(yǎng)物可引起非特異性凝集，而保存時(shí)間過長的沙門氏菌可能出現(xiàn)假陰性結(jié)果。因此檢測菌株應(yīng)為新鮮培養(yǎng)物。

6、乳膠凝集檢測為初步鑒定結(jié)果，所有的陽性結(jié)果的純培養(yǎng)物應(yīng)作進(jìn)一步的鑒定分析和血清分型。

十、檢測效果對(duì)比

HKM^® 沙門氏菌乳膠試劑盒與一種已廣泛使用的商業(yè)化的乳膠試劑盒檢測效果對(duì)比，用二種產(chǎn)品檢測126株沙門氏菌和58株潛在交叉反應(yīng)的菌株。

靈敏度　135/136＝99.3%

特異性　48/48＝100%

一致性　183/184＝99.5%

1^＊一個(gè)樣品在HKM^®檢測試劑中呈陰性結(jié)果，在對(duì)比檢測試劑中呈可凝結(jié)果。樣品最終鑒定為bergen沙門氏菌

^＊＊135株分離菌株中，11株在2種試劑盒均存在交叉反應(yīng)。它們分別為：差異檸檬酸桿菌1株、鮑氏不動(dòng)桿菌2株、斯氏普羅威登氏菌1株、蠟樣芽孢桿菌2株、金黃色葡萄球菌4株、鏈球菌1株。以上所有交叉反應(yīng)的菌株中，均不會(huì)在沙門氏菌選擇性分離平板上生長或生長時(shí)菌落呈現(xiàn)非典型的沙門氏菌菌落形態(tài)。蠟樣芽孢桿菌凝集時(shí)為非典型凝集，（呈纖維狀。）

^＊＊＊1株都伯林沙門氏菌在二種試劑盒均重復(fù)性的出現(xiàn)陰性結(jié)果。

十一、重復(fù)性

批內(nèi)重復(fù)性：通過以系列稀釋度的參照抗原和試劑盒對(duì)照抗原及一組34個(gè)細(xì)菌樣品盤對(duì)同1批產(chǎn)品的靈敏度和特異性進(jìn)行檢測。由不同的操作者隨機(jī)測試3次，最終效價(jià)由參照/對(duì)照抗原測定，并且3次定性分析結(jié)果完全一致。