一、凍存管的選擇
1、材質:凍存管一般是由無細胞毒性的塑料材質制成,常見的材質包括PP(聚丙烯)、PE(聚乙烯)和PETE(聚偏氟乙烯)。其中,PP材質因其出色的耐化學性和溫度穩定性,特別是能在液氮環境下(-196℃)保持穩定,成為實驗室的首選。
2、規格:凍存管一般有0.5ml、1.0ml、2.0ml、5.0ml等規格,具體選擇要根據凍存樣品量的大小來確定。一般來說,2.0ml凍存管被廣泛使用,但建議留出20%的空間以適應體積變化,避免過滿或過空。
3、構成:凍存管一般由管蓋加管體構成,有內旋蓋和外旋蓋之分。內旋蓋一般用于液氮凍存生物樣本,其管口的硅膠墊增強了凍存管的密封性,可以有效地防止液氮滲入;外旋蓋則用于冰箱中凍存樣本,便于標記和降低處理樣品時的污染概率。
二、凍存管的使用
1、樣本處理:從細菌純培養物中挑取新鮮培養物配成適當的菌懸液,接種于菌種凍存管中。注意擰緊凍存管,來回顛倒幾次使細菌乳化,但不能旋搖。
2、儲存條件:使用凍存管儲存樣本時,應把凍存管放入液氮的氣相層或冰箱中保存。避免將凍存管直接放到液相之中保存,因為液氮有一定幾率會滲入凍存管內部,復蘇時液氮氣化導致管內外壓力不平衡,這樣極易造成凍存管的炸裂,并具有生物危害性。
3、操作安全:操作凍存管復蘇時,應全程使用安全防護設備,建議穿實驗服、戴棉質手套且在安全的實驗臺上進行操作。條件允許情況下,請佩戴護目鏡或防護面罩。
三、注意事項
1、檢查凍存管:在使用前,首先要檢查凍存管是否潔凈且沒有任何破損,如有問題,應報廢該凍存管。
2、樣本量控制:凍存的樣本量不要超過凍存管要求的最大工作體積,建議容量是最大工作體積的80%。例如2mL凍存管中液體體積應低于1.6mL。
3、檢查密封性:在將凍存管放入液氮罐之前,請務必確認蓋子已擰到位,感受有明顯阻力即可,請勿施力過度。選用質量好且密閉性好的內旋凍存管,可以有效防止液氮滲入。
4、溫度均勻:凍存管的冷凍溫度須均勻。不均勻的受凍將會導致冰塞的產生,冰塞會抑制兩側的液體溫度傳遞進而產生危險的高壓力并導致凍存管受損。
5、取出方式:從液氮罐取出后需盡快將凍存管水平放置或倒置于桌面數十秒,等液氮流出后再開啟凍存管,以防止液氮迅速汽化膨脹導致壓力升高而爆管。