培養(yǎng)的細(xì)胞可能會污染支原體,支原體是一種常見的細(xì)菌,它可以在實(shí)驗(yàn)室環(huán)境中生長和繁殖。如果實(shí)驗(yàn)操作不當(dāng),可能會導(dǎo)致支原體污染細(xì)胞培養(yǎng)物。此外,一些細(xì)胞系可能已經(jīng)被感染了支原體,一些培養(yǎng)用的試劑也可能帶有支原體。由于支原體體積很小,可以穿過0.22um的無菌過濾膜,且通過常規(guī)顯微鏡觀察很難發(fā)現(xiàn),因此常在不知不覺中傳播。為了避免支原體污染,實(shí)驗(yàn)室應(yīng)該采取嚴(yán)格的操作規(guī)范和消毒措施,并且對所用的細(xì)胞和各種試劑進(jìn)行檢測,以確保細(xì)胞培養(yǎng)物的純度和質(zhì)量。以下是一些檢測細(xì)胞污染支原體的方法:
一、體外培養(yǎng)法:培養(yǎng)法檢測支原體污染是經(jīng)典的檢測方法,通過將待檢測樣品先接種到支原體液體培養(yǎng)基中大量繁殖,然后再轉(zhuǎn)接種到支原體固體培養(yǎng)基中,培養(yǎng)一段時(shí)間后(幾天至近一個(gè)月),如果固體培養(yǎng)中出現(xiàn)典型的支原體菌落,則說明待測樣品有支原體污染。其優(yōu)缺點(diǎn)如下:
A.優(yōu)點(diǎn):
a. 可以直接檢測細(xì)胞內(nèi)的支原體,具有較高的特異性和靈敏度。
b. 可以對不同類型的支原體進(jìn)行鑒定和分類。
c. 可以對支原體進(jìn)行藥物敏感性測試。
B.缺點(diǎn):
a. 體外培養(yǎng)需要一定的時(shí)間,通常需要3-7天才能得到結(jié)果,少數(shù)生長慢的種類可能需要長達(dá)28天時(shí)間,因此該方法不能滿足緊急情況下的快速檢測需求。
b. 體外培養(yǎng)需要較高的技術(shù)水平和操作技巧,對實(shí)驗(yàn)人員的要求較高。
c. 培養(yǎng)法對支原體的檢測效率受到多種因素的影響,如細(xì)胞的狀態(tài)、培養(yǎng)條件等,容易出現(xiàn)假陰性或假陽性結(jié)果。
d. 培養(yǎng)法不能檢測支原體的DNA或RNA,不能用于分子生物學(xué)研究。