細胞培養(yǎng)是指將細胞從動物或植物體內(nèi)取出，然后在適宜的人工環(huán)境中生長的過程。細胞可以在培養(yǎng)前直接從組織中取出并通過酶或機械方法進行解離，也可以來源于已建立的細胞系或細胞株。細胞常規(guī)培養(yǎng)是在細胞房中進行，在超凈工作臺或生物安全柜中，把細胞處理好，根據(jù)需要加入細胞培養(yǎng)基，放入細胞培養(yǎng)瓶/皿或細胞培養(yǎng)板中，再放到帶有5% CO₂ 的37℃恒溫培養(yǎng)箱中培養(yǎng)。

細胞培養(yǎng)過程中如果操作不當(dāng)或者條件控制不合適容易受到化學(xué)或者生物因素的污染。凡混入細胞培養(yǎng)環(huán)境中對細胞生存有害的成分和造成細胞不純的異物都應(yīng)視為污染，細胞污染不能全被消除，但能減少其發(fā)生的頻率和后果的嚴重性。細胞污染根據(jù)污染源主要可以分為化學(xué)性，物理性和生物性污染。

  微生物污染

由于體外培養(yǎng)的細胞自身沒有抵抗污染的能力，而在培養(yǎng)基中加抗生素的抗污染能力也是有限的，因而細胞微生物污染一旦發(fā)生往往是無法挽救的。一般在細胞受到污染早期或污染較輕時，能及時處理并除去污染物，部分細胞還有可能得到挽救。

不同的微生物污染物對細胞的影響也有差別，微生物中支原體和病毒對細胞形態(tài)和技能的影響是長期的，緩慢的和潛在的。而霉菌和細菌增殖迅速，能在很短的時間內(nèi)抑制細胞生長或產(chǎn)生有毒物質(zhì)殺滅細胞。

1、霉菌污染

種類很多，污染的多是曲霉菌，白色念珠菌，酵母菌，黑霉菌，孢子菌等。霉菌污染后多數(shù)在培養(yǎng)液中形成淡黃色或是白色的漂浮物，一般肉眼可見，較易被發(fā)現(xiàn)，短期內(nèi)培養(yǎng)液多不變混濁。倒置顯微鏡下可以看見細胞之間有縱橫交錯穿行的絲狀，樹枝狀或管狀菌絲，并漂浮在培養(yǎng)液中。很多菌絲在高倍鏡下可以看見鏈狀排列的菌株。念珠菌及酵母菌菌株呈卵圓形，散在細胞上及細胞周邊生長。

處理：確認是霉菌污染，如果細胞種類不是特別珍貴，直接放棄，并將實驗環(huán)節(jié)消毒。

2、細菌污染

細菌污染較常見的有大腸桿菌，白色葡萄球菌，假單孢菌等。加用抗菌素的培養(yǎng)液可預(yù)防和排除個別一般少量細菌的污染。一旦發(fā)生細菌污染很容易發(fā)現(xiàn)，多數(shù)情況下培養(yǎng)液短時間內(nèi)變黃，表明有大量酸性物質(zhì)產(chǎn)生，出現(xiàn)明顯渾濁現(xiàn)象；有時靜置的培養(yǎng)液起初不混，但稍加震蕩，就有許多混濁物漂起。倒置顯微鏡下觀察，可見培養(yǎng)液中有大量圓球狀顆粒物漂浮，有時在細胞表面及周圍有大量細菌存在，細胞停止生長并有中毒表現(xiàn)。必要時可取少量培養(yǎng)液涂片染色檢查以明確細菌種類；有的培養(yǎng)液改變不明顯而有疑似污染，亦可向肉湯培養(yǎng)基內(nèi)陸入少量培養(yǎng)液，37℃培養(yǎng)以檢測。

處理：一般用抗生素的常用量的5~10倍作沖擊療法，用藥24~48小時后再換常規(guī)培養(yǎng)液，有時在早期污染時此法有效。細胞培養(yǎng)中用抗生素多為預(yù)防細菌污染，一半多聯(lián)合應(yīng)用。一旦發(fā)生污染后再使用抗生素常常難以除掉，有的抗生素只有抑菌作用而無殺菌效應(yīng)。

3、支原體污染

支原體是一種大小介于細菌和病毒之間(最小直徑0.2um)并獨立生活的微生物.約有1%可通過濾菌器。支原體無細胞壁形態(tài)呈高度多形性.可為圓形、絲狀或梨形。

支原體形態(tài)多變，在光境下不易看清內(nèi)部結(jié)構(gòu)。多數(shù)支原體適合于偏堿條件下生存(PH7.6-8.0)，對酸耐受性差。對熱比較敏感，對一般抗生素不敏感。

支原體污染細胞后.培養(yǎng)液可不發(fā)生混濁.多數(shù)情況下細胞病理變化輕微或不顯著，細微變化也可由于傳代、換液而緩解.因此易被忽視。但個別嚴重者，可致細胞增殖緩慢.甚至從培養(yǎng)器皿脫落。為確定有無支原體污染可做如下檢測：

a:相差顯微境檢測；b:熒光染色法；c:電鏡檢查；d:DNA分子條文檢查或支原體培養(yǎng)等方法。處理：市場上有多種支原體清除試劑盒，效果比較好。

4、酵母污染

酵母到處存在，并能在合適的環(huán)境中快速生長。酵母污染很容易觀察到，培養(yǎng)物變渾濁，尤其在后期。一般PH值變化很小，嚴重時，PH值升高。顯微鏡下呈卵圓形或球形顆粒，有些會芽生較小顆粒。

5、病毒污染

組織細胞培養(yǎng)過程中，如果沒有除去潛在的病毒，就會產(chǎn)生病毒污染。目前，從原代猴腎細胞的培養(yǎng)中已發(fā)現(xiàn)不少于20種血清性病毒。

盡管病毒污染的細胞不影響原代培養(yǎng)，但生產(chǎn)疫苗是不安全的。因此，潛在病毒是細胞大量生產(chǎn)和疫苗、干擾素等生物制品制作中的難題。

6、細胞交叉污染

細胞污染和細菌污染不同，細胞污染是由于在培養(yǎng)過程中各種細胞同時進行，而所用器具或液體混雜使用所致。這種污染沒有微生物存在，但使培養(yǎng)細胞不同種類之間發(fā)生混亂，細胞生長特性，形態(tài)發(fā)生變化。有些變化輕微，不易察覺，有些則可能由于污染的細胞具有生長優(yōu)勢而最終壓過原來細胞而導(dǎo)致細胞生長的抑制，最終死亡。污染過的細胞由于種類不純，無法進行實驗研究。