在ELISA的研發制備中尤為重要的就是它的指控流程，包括抗原設計及制備篩選，抗體制備，標準品的定量，檢測液的優化，試劑盒的組裝，以及各種性能的驗證。對于科研工作者來說，要制備一個好的ELISA kit，需要具備敏感性高，特異性強，重復性好，并且其試劑穩定、易保存，操作簡便等。下面來看一下ELISA的質控控制。

1. 抗原抗體選擇

ELISA檢測原理基于抗原抗體反應，其質量影響了試劑盒的性能。對于大分子蛋白抗原，多采用雙抗體夾心法，使用優的抗體對，且至少有一種為單抗，配對篩選最佳信噪比的包被和檢測抗體。對于抗原為多肽和小分子（或者偶聯物），多采用競爭抑制法，抗體的是經過驗證的單克隆抗體或者多克隆抗體。

2. 標準品

對于標準品定量的準確性，每個公司對于定量標準和方法可能會有不同，這是企業標準。試劑盒使用的標準品多為重組蛋白或者單價的小分子， 定量可參考國際標準品，國家標準物質信息網或者一些大公司，如R&D， Abcam等。標準品的定量直接會決定試劑盒最后樣本的檢測結果。

3. 天然樣本驗證分析

我們在選擇樣本時，避免使用有外源性污染的樣本，避免血樣本出現溶血、細菌污染，最好使用較新鮮樣本，避免反復凍融。
血清是最為常見的檢測樣本，但是大約40%的血清標本中含有非特異性干擾物質，可以不同程度影響檢測結果；常見的干擾物質有：類風濕因子RF、補體、交叉反應物質和異嗜性抗體等其他物質等。避免其發生的方法有：

①標本用聯有熱變性IgG的固相吸附劑處理。

②用2-C₂H₆OS加入到標本稀釋液中使RF降解。

③56℃ 30 min加熱血清使補體滅活。

在樣本檢測中，稀釋對于實驗的成功也至關重要，稀釋過度以及稀釋不足均有可能導致樣本的測值低。Elisa 實驗較為常見的一個現象就是鉤狀效應，即抗原與抗體比例不合適而導致假陰性的現象，抗原過量稱為后帶效應。當樣本中目標物含量很高，而沒有進行正確的稀釋，就有可能會導致假陰性反應。