在使用ELISA試劑盒進行實驗的時候，需要注意很多問題，比如溫育、顯色、包被等問題。其中，包被是要特別注意的一個問題，直接關系到實驗的效果。

一、 包被的方式

將抗原或抗體固定在過程稱為包被(coating)。蛋白質與聚苯 烯固相載體是通過物理吸附結合的，靠的是蛋白質分子結構上的疏水基團與固相載體表面的疏水基團間的作用。這種物理吸附是非特異性的，受蛋白質的分子量、等電點、濃度等的影響。

大分子蛋白質較小分子蛋白質通常含有更多的疏水基團，故更易吸附到固相載體表面。不易吸附的非蛋白質抗原可用間接包被的抗原經固相抗體的親和層析作用，包被在固相上的抗原純度大大提高，因此含雜質較多的抗原也可采用捕獲包被法。

親和素生物素即用親和素先包被載體，加入生物素化的DNA，ELISA試劑盒這種包被方法均勻、牢固，已擴大應用于各種抗原物質的定量測定。脂類物質無法與固相載體結合，可將其在有機溶劑（例如乙醇）中溶解后加入ELISA板孔中，開蓋置冰箱或冷風吹干，待酒精揮發后，讓脂質自然干固在固相表面。

優點：試驗的特異性、敏感性均由此得以改善，重復性亦佳。抗原用量少，僅為直接包被的1/10乃至于/100。