長期保持引物和探針的穩(wěn)定性關(guān)鍵有四點(diǎn):
(1)低壓凍干的引物在儲(chǔ)存時(shí)間和溫度方面具有更好的靈活性。引物一旦重新溶解,即應(yīng)置于 -20°C 保存,且若保存時(shí)間超過一年則應(yīng)對(duì)其進(jìn)行監(jiān)測,看它是否出現(xiàn)功能下降。
(2)對(duì)于標(biāo)記的引物和探針,則應(yīng)采取措施避免標(biāo)記物暴光 (例如使用不透明管及置于暗處保存),以延長它們的使用壽命。
(3)引物濃度也可影響其穩(wěn)定性。建議引物的儲(chǔ)存濃度不低于10 μM;實(shí)際上,在大多數(shù)情況下,100 μM 的引物濃度操作更簡單。引物和探針還應(yīng)分裝保存,以減少凍融次數(shù),特別是標(biāo)記的引物和探針。
(4)最后,TE 緩沖液可形成比水更為穩(wěn)定的環(huán)境。此外,含有 0.1 mM EDTA的 TE 緩沖液 (標(biāo)準(zhǔn) TE 中含有 1 mM EDTA) 是一種理想的溶液,這是由于一些 PCR 反應(yīng)對(duì) EDTA 的靈敏度可能有一些殘存。