色譜分析的重要作用之一是對樣品進行定量，而色譜法定量的依據(jù)是組分的重量或在載氣中的濃度與檢測器的響應信號成正比。常見定量分析方法有面積歸一化法、內(nèi)標法、外標法、標準曲線法。大家容易傻傻分不清楚的莫過于內(nèi)標法和外標法了，下面我們從定義、特點等方面剖析一下它們的異同和優(yōu)點。

內(nèi)標法：

1.定義：

內(nèi)標法是一種間接或相對的校準方法。在分析測定樣品中某組分含量時，選一與欲測組分相近但能完全分離的組分做內(nèi)標物（內(nèi)標物是樣品中沒有的組分），然后配制欲測組分和內(nèi)標物的混合標準溶液，進樣得相對校正因子。再將內(nèi)標物加入欲測組分的樣品中，進樣后測得欲測組分和內(nèi)標物的定量參數(shù)。

2.內(nèi)標物：

內(nèi)標法在氣相色譜定量分析中是一種重要的技術(shù)。使用內(nèi)標法時，在樣品中加入一定量的標準物質(zhì)，它可被色譜柱所分離，又不受試樣中其它組分峰的干擾，只要測定內(nèi)標物和待測組分的峰面積與相對響應值，即可求出待測組分在樣品中的百分含量。采用內(nèi)標法定量時，內(nèi)標物的選擇是一項十分重要的工作。理想地說，內(nèi)標物應當是一個能得到純樣的己知化合物，這樣它能以準確、已知的量加到樣品中去，它應當和被分析的樣品組分有基本相同或盡可能一致的物理化學性質(zhì)（如化學結(jié)構(gòu)、極性、揮發(fā)度及在溶劑中的溶解度等）、色譜行為和響應特征，最好是被分析物質(zhì)的一個同系物。當然，在色譜分析條什下，內(nèi)標物必須能與樣品中各組分充分分離。

3.選擇內(nèi)標物的四個要求

（1）內(nèi)標物應是該試樣中不存在的純物質(zhì)；

（2）它必須完全溶于試樣中，并與試樣中各組分的色譜峰能完全分離；

（3）加入內(nèi)標物的量應接近于被測組分；

（4）色譜峰的位置應與被測組分的色譜峰的位置相近，或在幾個被測組分色譜峰中間。

4.影響因素

在使用內(nèi)標法定量時，影響內(nèi)標和被測組分峰高或峰面積比值的因素主要有化學方面的、色譜方面的和儀器方面的三類。由化學方面的原因產(chǎn)生的面積比的變化常常在分析重復樣品時出現(xiàn)。

化學方面的因素

（1）內(nèi)標物在樣品里混合不好；

（2）內(nèi)標物和樣品組分之間發(fā)生反應；

（3）內(nèi)標物純度可變等。

對于一個比較成熟的方法來說，色譜方面的問題發(fā)生的可能性更大一些，色譜上常見的一些問題（如滲漏）對絕對面積的影響比較大，對面積比的影響則要小一些。

但如果絕對面積的變化已大到足以使面積比發(fā)生顯著變化的程度，那么一定有某個重要的色譜問題存在，比如進樣量改變太大，樣品組分濃度和內(nèi)標濃度之間有很大的差別，檢測器非線性等。進樣量應足夠小并保持不變，這樣才不致于造成檢測器和積分裝置飽和。

如果認為方法比較可靠，而色譜圖看來也是正常的話，應著重檢查積分裝置和設置、斜率和峰寬定位。對積分裝置發(fā)生懷疑的最有力的證據(jù)是：面積比可變，而峰高比保持相對恒定。

5.優(yōu)點

內(nèi)標法是結(jié)合了峰面積歸一法和外標法的優(yōu)點的一種方法，它在加入內(nèi)標物后，按峰面積歸一法的分析方法進行分析，這就避免了由于進樣的一致性及樣品基質(zhì)效應導致的偶然誤差。因而，它的分析精密度也是比較高的，是一種比較理想的定量分析方法。進樣量的變化、色譜操作條件的微小變化對定量結(jié)果的影響不大，特別是在樣品前處理（如濃縮、萃取、衍生化等）前加入內(nèi)標物，可部分補償欲測組分在樣品前處理時的損失。若要獲得很高的精密度的結(jié)果時，可以加入樹種內(nèi)標物，以提高定量分析的精度。缺點：每次測定都需要用分析天平準確稱取內(nèi)標物和樣品的質(zhì)量，故費時麻煩。同時必須要有合適的標樣及內(nèi)標物才能進行內(nèi)標法定量分析。

外標法：

1.定義

與內(nèi)標法相比，外標法不是把標準物質(zhì)加入到被測樣品中，而是在與被測樣品相同的色譜條件下單獨測定，把得到的色譜峰面積與被測組分的色譜峰面積進行比較求得被測組分的含量。外標物與被測組分同為一種物質(zhì)但要求它有一定的純度，分析時外標物的濃度應與被測物濃度相接近，以利于定量分析的準確性。

2.種類

外標法分為工作曲線法、外標一點法。工作曲線法是用對照物質(zhì)配制一系列濃度的對照品溶液確定工作曲線，求出斜率、截距。在完全相同的條件下，準確進樣與對照品溶液相同體積的樣品溶液，根據(jù)待測組分的信號，從標準曲線上查出其濃度，或用回歸方程計算。

3.適用范圍

外標法適用于常規(guī)分析，它用于衡量組分的分析也能得到滿意的結(jié)果。這個方法的精確度，在很大程度上取決于操作條件的控制。樣品分析的操作條件，必須嚴格控制于繪制校正曲線時的條件。當峰高對操作條件的敏感性以及對拖尾峰、柱子超負荷和檢測器有大的響應時，給出非線性的校正曲線，此時峰面積計算常常可以得到更好的結(jié)果。不過，對重疊峰，難以準確的測量峰面積，必須提高分離度才能達到預期的效果。

4.特點

外標法誤差的來源，除了分離條件的變化之外，就是進樣的重復性。使用注射器進樣，外標法的誤差大約在0.5%以內(nèi)。但是，使用定量進樣閥可獲得1%的精密度；若同時小心控制分離參數(shù)，分析精密度可達±0.25%。

 

外標要求儀器重復性很嚴格，適于大量的分析樣品，因為儀器隨著使用會有所變化，因此需要定期進行曲線校正。此法的特點是操作簡單，計算方便，不需測量校正因子，適于自動分析。但儀器的重現(xiàn)性和操作條件的穩(wěn)定性必須保證，否則，會影響實驗結(jié)果。

內(nèi)標法的優(yōu)點是測定的結(jié)果較為準確，由于通過測量內(nèi)標物及被測組分的峰面積的相對值來進行計算的，因而在一定程度上消除了操作條件等的變化所引起的誤差。內(nèi)標法的缺點是操作程序較為麻煩，每次分析時內(nèi)標物和試樣都要準確稱量，有時尋找合適的內(nèi)標物也有困難。

外標法就是用標準品的峰面積或峰高與其對應的濃度做一條標準曲線，測出樣品的峰面積或峰高，在標準曲線上查出其對應的濃度，這是最常用的一種定量方法，外標法簡便，但進樣量要求十分準確，要嚴格控制在與標準物相同的操作條件下進行，否則造成分析誤差，得不到準確的測量結(jié)果。

內(nèi)標法是對應外表法說的，外標法需要用樣品和標準品對比，但是有時我們很難保證樣品和標準品進的體積是一樣的，畢竟要有誤差，這時候就用內(nèi)標法，就是在外標法的基礎上，在樣品和標準品里在加入一種物質(zhì)，通過加入物質(zhì)的峰面積或峰高的變化，就可以看出我們標準品和樣品進樣體積的差別，但同時會引進加入物質(zhì)的秤量誤差.所以一般用外標法來定量，如果進樣體積很難掌握，就用內(nèi)標法，可以消除進樣體積的誤差。

小結(jié)

內(nèi)標與外標都是定量的一種方法而已，至于哪一種方法好與不好不能一概而論，做不同的分析，面對著不同的要求，再加上分析成本分析效率等等問題，簡單而有效進行定量分析來滿足要求才是最重要的。

應用外標法能夠滿足要求，首選還是外標法了，畢竟簡單而省事。對于精密度要求比較高、結(jié)果準確度會產(chǎn)生重大影響、實驗室條件不是很理想的等等條件下，用內(nèi)標法還是必要的。無論應用那種方法，方法的驗證和確認都是很重要的，只要是按照程序經(jīng)過驗證和確認的方法，都有其應用的空間的。