固相萃取柱回收率低？一文幫你解決固相萃取過程中的所有問題！
發(fā)布日期：2022-06-17
核心提示：近年來(lái)，固相萃取小柱應(yīng)用得到快速發(fā)展，已廣泛應(yīng)用于食品、環(huán)境、制藥等行業(yè)，成為樣品前處理凈化的有效手段之一。可是，用戶在使用固相萃取小柱過程中也會(huì)遇到各種各樣的問題。
根據(jù)多年的實(shí)驗(yàn)應(yīng)用經(jīng)驗(yàn)，現(xiàn)將使用過程中常見問題及解決辦法整理在一起，方便大家輕松應(yīng)對(duì)固相萃取常見問題。
固相萃取小柱是一種用途廣泛而且越來(lái)越受歡迎的樣品前處理技術(shù)。大多數(shù)用來(lái)處理液體樣品。萃取、濃縮和凈化其中的半揮發(fā)性和不揮發(fā)性化合物；也可用于固體樣品，但必須先把固體樣品處理成液體。
固相萃取柱的種類很多，具體實(shí)驗(yàn)工作中，需根據(jù)分析對(duì)象、檢測(cè)手段及實(shí)驗(yàn)室條件合理選擇合適填料、合理規(guī)格的固相萃取柱。要考慮固相萃取柱對(duì)分析對(duì)象的萃取能力、樣品溶液的體積、洗脫后溶液的最終體積、及樣品溶液中被測(cè)物及干擾物的總量。
一般被柱中吸附劑吸附的被測(cè)物及干擾物的總質(zhì)量不應(yīng)超過吸附物總質(zhì)量的5%。洗脫劑的體積一般應(yīng)是萃取柱柱床體積的2-5倍。
固相萃取小柱使用過程可以簡(jiǎn)要為4步：
首先，我們要知道一個(gè)樣品包括目標(biāo)物和干擾物，樣品通過吸附劑，將目標(biāo)物與干擾物分離，留下需要的干擾物，棄掉不要的干擾物，這就完成一次簡(jiǎn)單的固相萃取過程。第一步：利用洗脫劑潤(rùn)洗固相萃取柱，洗掉柱子中原有的雜志組分；
第二步：將樣品加到萃取柱上，吸附劑選擇性的保留分離物和一些干擾物，其他干擾物通過吸附劑；
第三步：用適當(dāng)?shù)娜軇┝芟次絼瓜惹氨Ａ舻母蓴_物選擇性的淋洗掉，分離物保留在吸附劑床上。
第四步：將目標(biāo)物淋洗下來(lái)，進(jìn)來(lái)純化、濃縮。
在一次完整的SPE操作中，目標(biāo)化合物可能會(huì)存在于樣品溶液流出液、淋洗液、洗脫液或吸附劑中，當(dāng)“目標(biāo)物沒有回收或回收率低” 現(xiàn)象發(fā)生時(shí)，可向樣品溶液加入標(biāo)液，然后進(jìn)行完整的SPE操作并將樣品流出液、淋洗液和洗脫液分別收集并分析。首先確定目標(biāo)化合物存在于哪一部分，進(jìn)而確定問題來(lái)自下列哪一環(huán)節(jié)：目標(biāo)化合物在吸附劑上保留不足；目標(biāo)化合物未被完全洗脫；其他環(huán)節(jié)。
當(dāng)超過5%的目標(biāo)化合物出現(xiàn)在樣品流出液或淋洗液時(shí)即可斷定“目標(biāo)化合物在吸附劑上的保留不足”。
2、目標(biāo)化合物未被完全洗脫
當(dāng)目標(biāo)化合物在樣品溶液流出液和淋洗液中未出現(xiàn)而洗脫液中僅有少量或未出現(xiàn)時(shí)，可判斷“目標(biāo)物未被完全洗脫”。
如果目標(biāo)化合物在洗脫液中正常出現(xiàn)，那么回收率不足的問題應(yīng)該來(lái)自樣品前處理的其他環(huán)節(jié)。
在使用固相萃取小柱進(jìn)行樣品前處理時(shí)，若出現(xiàn)萃取效果重現(xiàn)性差
三、凈化效果不理想
通常而言采用保留目標(biāo)化合物的模式比保留雜質(zhì)的模式凈化效果好，如果正在分析的項(xiàng)目為某一種或某一類化合物分析，最好是采用保留目標(biāo)化合物的凈化模式；舉一個(gè)簡(jiǎn)單的例子，同樣是分析蔬菜中的多菌靈和噻菌靈(一類堿性農(nóng)藥)，使用陽(yáng)離子交換柱可以專一性地保留這些農(nóng)藥，使它們基本與干擾物完全分離，而使用正相吸附劑或石墨化炭黑進(jìn)行保留干擾物的操作僅能把主要的干擾物除去，仍有較多干擾物存留。
另外，如果不止一種SPE柱可用于目標(biāo)化合物的凈化時(shí)，應(yīng)挑選選擇性好的吸附劑；選擇性方面，離子交換＞正相＞反相。
對(duì)于反相模式和正相模式，應(yīng)在不影響回收率的前提下，增大淋洗液洗脫的強(qiáng)度并降低洗脫液的洗脫強(qiáng)度。
對(duì)于反相模式，可將目標(biāo)化合物的水溶液上樣，然后依次用5%、10%、20%、30%、40%、50%、60%、70%、80%、90%、100%的甲醇水溶液洗脫，分別收集洗脫液分析，建立淋洗曲線，找出目標(biāo)化合物被洗脫時(shí)的溶劑體系，淋洗液中甲醇的含量應(yīng)稍低于目標(biāo)化合物恰好被洗脫時(shí)的溶劑體系，而洗脫液中甲醇的含量應(yīng)稍高于目標(biāo)化合物恰好被完全洗脫時(shí)的溶劑體系；當(dāng)純甲醇不能洗脫目標(biāo)化合物時(shí)，應(yīng)試驗(yàn)甲醇-甲基叔丁基醚混合溶液的洗脫曲線；對(duì)于某些既不溶于水也不溶于甲醇的離子型化合物，可以在溶劑體系中加入酸或堿。
對(duì)于正相體系，可將目標(biāo)化合物的正己烷溶液上樣，然后依次用5%、10%、20%、30%、40%、50%、60%、70%、80%、90%、100%的正己烷甲基叔丁基醚溶液洗脫，分別收集洗脫液分析，建立淋洗曲線，找出目標(biāo)化合物被洗脫時(shí)的溶劑體系，淋洗液中甲基叔丁基醚的含量應(yīng)稍低于目標(biāo)化合物恰好被洗脫時(shí)的溶劑體系，而洗脫液中甲基叔丁基醚的含量應(yīng)稍高于目標(biāo)化合物恰好被完全洗脫時(shí)的溶劑體系。
SPE柱中的吸附劑可能存在少量干擾物，有效地活化可以避免這些干擾物進(jìn)入洗脫液，活化溶液應(yīng)選擇整個(gè)操作中洗脫強(qiáng)度最強(qiáng)的溶劑體系；在反相模式中，從樣品溶液到洗脫液主要涉及0%-100%甲醇水溶液，所以活化溶液應(yīng)選純甲醇，當(dāng)目標(biāo)化合物需要用甲醇-甲基叔丁基醚混合液洗脫時(shí)，活化溶液應(yīng)選甲基叔丁基醚；在正相模式中，從樣品溶液到洗脫液主要涉及0%-100%正己烷-甲基叔丁基醚溶液，所以活化溶液應(yīng)選純甲基叔丁基醚。
編輯：songjiajie2010
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