先區(qū)分幾個小概念

保留時間(T)：

從進樣開始到某個組分的色譜頂點的時間間隔稱為該組分的保留時間。即從進樣到柱后某組分出現濃度極大時的時間間隔。

死時間(t)：

分配系數為0的組分的保留時間稱為死時間。通常將空氣或者甲烷視為此種組分，用來測定死時間。

調整保留時間（t）：

某組分由于溶解（或者吸附）于固定相，比不溶解（或者不吸附）的組分在柱中多停留的時間稱為調整保留時間；

調整保留時間=保留時間—死時間；（Vd）。

※在實驗室條件下（溫度，固定相等）一定時，調整保留時間僅決定于組分的性質，因此調整保留時間是定性的基本參數。

液相色譜中保留時間的波動

與哪些因素有關

一般而言，與如下因素有關：
1 操作因素；
2 色譜柱的質量；
3 儀器系統，尤其是輸液泵的性能。

氣相色譜儀保留時間不重復故障排除方法

引起保留時間不重復的最可能原因只有兩個:

柱溫不穩(wěn)定；

流速有變化。

※檢測器的故障不會造成保留時間不重復,造成保留時間不重復的其它原因有進樣技術不佳，進樣量過大及柱損傷等。

排除保留時間不重復故障的步驟如下：

（1）重復進樣檢查：

為了進一步證實保留時間不重復故障，應首先檢查進樣的重復性。在重復進樣時最好由一人獨立操作，這樣能較好地解決進樣時間的重復性問題；如果重復進樣后保留時間仍然不能重復，則應轉入下一步。

（2）溫控精度及程序升溫重復性檢查：

恒溫分析時應首先檢查柱室溫度是否穩(wěn)定在原分析操作所要求的設定值上。

必要時要檢查柱室溫度的穩(wěn)定性，如,設定值及實際柱溫與原分析條件有偏差，應以原分析條件為準；

如果柱室溫度在運行中有突然跳動，應進行溫度控制故障檢查與排除。

在應用程序升溫的場合下，要檢查程序升溫過程起始、終止柱溫及升溫速率與原分析條件是否一致。

在檢查時應注意，每次重新升溫時，是否有足夠的時間使起始溫度保持一致，特別是起始溫度很接近室溫時，更應如此。

程序升溫的升溫速率可以通過先測定升溫中始、終兩點間所需時間值，然后用終溫與始溫之差除以該時間值而加以驗證。

程序升溫中還有一種情況不易為操作者所發(fā)現：那就是在升溫過程中溫度的變化很不均勻，忽快忽慢，但總的升溫速率卻看不出變化。

對此現象可采取記錄程序升溫曲線而加以比較。

如無自動記錄方式可用手工法逐段加以記錄，程序升溫結束時再逐段加以對照，即可。

（3）載氣流速檢查：

載氣流速的改變是引起保留時間不重復的另一個重要原因。

可用皂膜流量計測定柱后或檢測器之后的實際流速加以證實。

對于恒溫分析來說，主要檢測實測值與預定值之間的偏差，必要時重新調整設定值使流速達到預定值要求。

對于程序升溫來說，必須檢查溫度處于始、終兩點時載氣流速是否有較大的變化。如果在始、終兩點間流速之差超過2mL/s（當柱內徑為4mm時）即認為穩(wěn)流特性不好，這時需進一步檢查系統是否漏氣，穩(wěn)流閥、穩(wěn)壓閥工作壓力是否合乎要求。

系統漏氣不論對程序升溫色譜，還是恒溫色譜說來都是產生保留值不重復的一個不應忽略的原因。

在系統漏氣中進樣口隔墊的漏氣是經常產生的，在高溫操作下頻繁進樣時要注意及時更換。

（4）色譜柱檢查：

如果在氣密性及載氣流速方面均無異常，就應懷疑是色譜柱本身出了問題，對色譜柱進行檢查。

首先注意色譜峰形有否拖尾，如拖尾則應減少進樣量或稀釋樣品濃度，以免色譜柱過載。

如減少進樣量后保留值重復性提高，則說明原柱固定相有少量流失或充填欠佳；此時原色譜柱還仍能使用。

如果上述方法也無效，則說明色譜柱已發(fā)生損壞，必須更換新柱子。

怎樣解決液相色譜保留時間的漂移？

為什么會漂移？

保留時間飄移可能的原因有：
1 柱子沒有達到平衡；
解決：

平衡更長的時間來解決。

2 實驗環(huán)境溫度發(fā)生變化；保留時間和溫度有很大的關系，一般溫度高，出峰快。
解決：

這里的溫度不僅指柱溫，其實還包括流動相溫度。柱溫一般都有規(guī)定，用柱溫箱就可以平衡了，但是流動相溫度沒有規(guī)定，很多人不知道也要保持不變。在空調房里做，保持住室溫不變，一般會好很多。

3 流動相比例發(fā)生變化；
解決：

配置時盡量混合均勻；配置時盡量保證比例沒有偏離；使用時盡量保證導管接口處不揮發(fā)泄漏；長時間不用的要密封，最好廢棄不用。

4 長期使用后柱子損耗；
解決：

重新，再生柱子，或更換新的。

你要如何鎖定保留時間？

所謂保留時間鎖定，就是使特定化合物的保留時間在不同儀器、不同色譜柱（但標稱固定相和相比相同）之間保持不變。為了討論這一技術的基本原理，要從影響保留時間重現性的因素說起！

決定保留時間的因素都有啥？

化合物的性質、固定液的性質和操作條件；

如果前兩個因素不變（對于特定的化合物和GC儀器系統，這當然是成立的）；

只有操作條件會變，即，載氣流速、柱溫、毛細管柱規(guī)格和檢測器類型等。

載氣控制：

對于同種載氣來說，壓力和流速是影響保留時間的參數；

不同廠家的壓力表和流量計的制造精度有所不同，故當不同儀器的壓力和流量顯示完全一致時，柱內流量也不盡相同；

現在有了EPC，這一問題基本得到了解決；

雖然同一廠家制造的EPC不可能每項都嚴格一致，但差異微小，通過壓力的自動調節(jié)完全可以補償這一差異。

溫度控制：

保留時間對溫度極為敏感，過去采用水銀溫度計測量柱溫時，重現性顯然有問題。現在都用熱敏元件與電子線路來控制溫度，精度大為提高。不同儀器間溫度重現性令人滿意。即使有0.5℃的溫度差異，我們仍能通過調節(jié)柱前壓的辦法來使保留時間達到重現。

色譜柱規(guī)格：

一、不同廠商的色譜柱，盡管標稱規(guī)格一致，但難免有內徑的不均勻、固定液膜厚的變化、以及柱長的不精確，這些都會造成保留時間的波動。

二、同一根色譜柱在使用過程中會發(fā)生變化，比如，重新安裝或因柱污染而截去1～2cm后，若其他操作條件不變，保留時間就不能重現了。

目前，同一廠商的色譜柱制造重現性已相當高，而不同廠家的色譜柱尚不能完全重現，尤其是極性柱。但我們如果采用同一廠家的色譜柱，就可基本解決這一問題。至于色譜柱長度的變化，可以通過調節(jié)柱前壓來補償。

檢測器類型：

常規(guī)檢測器：

常壓下工作；

MS：

高真空下工作；

AED：

高于大氣壓（如，10kPa）下工作。這樣，當比較常規(guī)檢測器和MS或AED所得結果時，即使柱前壓嚴格一致，柱壓降也不同，保留時間就不能重現。采用EPC時，就很容易通過調節(jié)壓力使柱壓降保持相同。
通過上述分析我們可以得出結論，只要儀器的載氣和溫度控制精度足夠高，只要色譜柱標稱規(guī)格一致，就可以通過調節(jié)柱前壓的方法來補償操作參數的微小變化，從而實現保留時間的重現，這就是RTL的基礎。

小結

保持保留時間的重復性是重中之重！同時，也要盡可能避免保留時間的漂移！關注保留時間的穩(wěn)定性也能反映流動相、檢測器等的正常情況！