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高壓蒸汽滅菌是將待滅菌的物品放在一個密閉的加壓滅菌鍋內，通過加熱，使滅菌鍋隔套間的水沸騰而產生蒸汽。待水蒸汽急劇地將鍋內的冷空氣從排氣閥中驅盡，然后關閉排氣閥，繼續加熱，此時由于蒸汽不能溢出，而增加了滅菌器內的壓力，從而使沸點增高，得到高于100℃的溫度。導致菌體蛋白質凝固變性而達到滅菌的目的。
1、加水： 先將排水閥關閉，調整總閥至“全排”。然后，開啟進水閥，放蒸餾水至蒸汽發生器內，待水進至距水表頂端大約1～2cm處時，關閉進水閥，并將總閥調至“關閉”。
2、裝鍋：
將待滅菌物品裝入鍋內，注意不要塞得過緊過滿，盛有培養基的三角瓶和試管應立放或適度傾斜．以免滅菌過程中培養基污染棉塞。
3、關門：
按順時針方向轉動緊鎖手柄，使撐擋進入門圈內。然后旋動八角轉盤，使門和墊圈密合，以滅菌時不漏氣為度，不宜太緊，以免損壞墊圈。
4、通電加溫：
待電源控制開關的旋鈕旋至“開”處，電源指示燈亮，表示已通電，然后再按滅菌物品所需滅菌汽壓將旋切旋至0.07MPa、0.1mPa或0.14MPs處。此時電熱指示燈亮，表示已通電加熱。
5、保溫保壓：
當蒸汽套層內的蒸汽隨加熱達到自動控制壓力時，電熱指示燈會自動熄滅，表示停止加熱。隨著熱力散發壓力降低，電熱指示燈在亮，表示繼續加熱，這表明壓力控制器工作正常。當套層內的蒸汽加熱到所選擇的控制壓力時，即可將套層內的蒸汽導入消毒室進行滅菌。此時應先將汽液分離器前的冷凝閥開放少許，然后將總閥調至“消毒”，套層內的蒸汽即通過總閥進入消毒室進行消毒，冷凝水則通過汽液分離器自動排出。這時蒸汽套層內蒸汽壓力迅速下降，而消毒室內的蒸汽壓力逐漸上升，消毒室內的溫度表也隨著物品被蒸汽加熱而上升。當表的溫度升到所需消毒溫度(一般為121℃)時，開始計算滅菌時間，維持溫度至滅菌完畢。
6、出鍋：
滅菌完畢后，立即切斷電源，按滅菌物品性質和要求，決定消毒室內的蒸汽是自然冷卻還是采取“慢排”例如，器械、器皿、固體曲料、土壤、草炭等不致因壓力驟然下降而受影響的物品，可直接將總閥調至“慢排”使消毒室內蒸汽迅速排出。當消毒室內壓力下降至“0”時，方可緩慢轉動鍋門轉盤并撥動緊鎖手柄將門開啟5～10cm。20～30min后將滅菌物品取出，此時滅菌物品即較干燥。溶液及培養基等物品滅菌完畢時，只能將總閥調至“慢排”，使消毒室內蒸汽慢慢排出，以免突然降低壓力導致培養基劇烈沸騰。也可在滅菌完畢后，關閉總閥，讓滅菌物品自然冷卻。消毒寶壓力表降至“0”時、再將總閥調至“慢排”數分鐘取出滅菌物品。
7、連續操作：
如滅菌物品較多需連續操作時，應先檢查水位。有足夠水量時，可連續使用。如需加水、應把總閥調至“全排”，打開進水閥加水后繼續操作。
8、保養：
每次滅菌完畢后，關閉電源，停止加熱，隨后將總閥調至“全排”，排出套層內的蒸汽。開啟鉑門少許，散發剩余蒸汽，使消毒室內壁經常保持干燥，同時排除蒸汽發生器內的余水。
高壓蒸汽滅菌鍋操作步驟
2、裝鍋：
將待滅菌物品裝入鍋內，注意不要塞得過緊過滿，盛有培養基的三角瓶和試管應立放或適度傾斜．以免滅菌過程中培養基污染棉塞。
3、關門：
按順時針方向轉動緊鎖手柄，使撐擋進入門圈內。然后旋動八角轉盤，使門和墊圈密合，以滅菌時不漏氣為度，不宜太緊，以免損壞墊圈。
4、通電加溫：
待電源控制開關的旋鈕旋至“開”處，電源指示燈亮，表示已通電，然后再按滅菌物品所需滅菌汽壓將旋切旋至0.07MPa、0.1mPa或0.14MPs處。此時電熱指示燈亮，表示已通電加熱。
5、保溫保壓：
當蒸汽套層內的蒸汽隨加熱達到自動控制壓力時，電熱指示燈會自動熄滅，表示停止加熱。隨著熱力散發壓力降低，電熱指示燈在亮，表示繼續加熱，這表明壓力控制器工作正常。當套層內的蒸汽加熱到所選擇的控制壓力時，即可將套層內的蒸汽導入消毒室進行滅菌。此時應先將汽液分離器前的冷凝閥開放少許，然后將總閥調至“消毒”，套層內的蒸汽即通過總閥進入消毒室進行消毒，冷凝水則通過汽液分離器自動排出。這時蒸汽套層內蒸汽壓力迅速下降，而消毒室內的蒸汽壓力逐漸上升，消毒室內的溫度表也隨著物品被蒸汽加熱而上升。當表的溫度升到所需消毒溫度(一般為121℃)時，開始計算滅菌時間，維持溫度至滅菌完畢。
6、出鍋：
滅菌完畢后，立即切斷電源，按滅菌物品性質和要求，決定消毒室內的蒸汽是自然冷卻還是采取“慢排”例如，器械、器皿、固體曲料、土壤、草炭等不致因壓力驟然下降而受影響的物品，可直接將總閥調至“慢排”使消毒室內蒸汽迅速排出。當消毒室內壓力下降至“0”時，方可緩慢轉動鍋門轉盤并撥動緊鎖手柄將門開啟5～10cm。20～30min后將滅菌物品取出，此時滅菌物品即較干燥。溶液及培養基等物品滅菌完畢時，只能將總閥調至“慢排”，使消毒室內蒸汽慢慢排出，以免突然降低壓力導致培養基劇烈沸騰。也可在滅菌完畢后，關閉總閥，讓滅菌物品自然冷卻。消毒寶壓力表降至“0”時、再將總閥調至“慢排”數分鐘取出滅菌物品。
7、連續操作：
如滅菌物品較多需連續操作時，應先檢查水位。有足夠水量時，可連續使用。如需加水、應把總閥調至“全排”，打開進水閥加水后繼續操作。
8、保養：
每次滅菌完畢后，關閉電源，停止加熱，隨后將總閥調至“全排”，排出套層內的蒸汽。開啟鉑門少許，散發剩余蒸汽，使消毒室內壁經常保持干燥，同時排除蒸汽發生器內的余水。
