一、三先三后原則

①觀察圖像時(shí)，需要先使用低倍鏡后使用高倍鏡，兩者不可以顛倒；②使用低倍鏡前要移動(dòng)鏡筒到合適位置，在移動(dòng)的過程中先注視物鏡，當(dāng)其與裝片距離約為0.5cm時(shí)，再注視物鏡；③低倍鏡調(diào)焦時(shí)，先使用粗準(zhǔn)焦螺旋，再使用細(xì)準(zhǔn)焦螺旋，但在高倍鏡調(diào)焦時(shí)，嚴(yán)禁使用粗準(zhǔn)焦螺旋，只可以使用細(xì)準(zhǔn)焦螺旋

二、放大倍數(shù)與視野亮度的關(guān)系

低倍鏡時(shí)，視野相對(duì)比較明亮，轉(zhuǎn)用高倍鏡時(shí)，視野的亮度會(huì)降低，所以要適當(dāng)調(diào)大光圈或者將反光鏡換為凹面鏡，對(duì)于觀察顏色比較深的細(xì)胞，視野的亮度要求也比較高，這樣才能觀察清晰，但是對(duì)于細(xì)胞本身顏色比較淺或者傾向于無色時(shí)，要在視野亮度比較低的情況下觀察。

三、玻片的移動(dòng)和物象的移動(dòng)

由于顯微鏡成像是經(jīng)過物鏡和目鏡兩次放大后形成的倒立虛像，物象在視野中的移動(dòng)方向和裝片的移動(dòng)方向是相反的，據(jù)此，如果所要觀察的細(xì)胞不在視野中央，則偏向哪個(gè)方向，應(yīng)該向哪個(gè)方向移動(dòng)，比如所要觀察的細(xì)胞在實(shí)視野的左上角，則應(yīng)該將裝片朝著左上角移動(dòng)，才可以將細(xì)胞移動(dòng)到視野中央，即在哪個(gè)方向朝哪個(gè)方向移動(dòng)。不過對(duì)于細(xì)胞質(zhì)中某細(xì)胞器的順時(shí)針或者逆時(shí)針流動(dòng)，則和真實(shí)情況一樣，觀察為順時(shí)針，則真實(shí)為順時(shí)針。

四、視野中污點(diǎn)的判斷

在顯微鏡觀察中，如果發(fā)現(xiàn)有污點(diǎn)，需要判斷污點(diǎn)是在目鏡、物鏡或者是在裝片上，一般的操作是先移動(dòng)目鏡，觀察污點(diǎn)是否移動(dòng)，如果移動(dòng)，則是在目鏡上，如果不移動(dòng)，再嘗試轉(zhuǎn)動(dòng)物鏡，看下是否移動(dòng)，如果仍然沒有結(jié)果則移動(dòng)裝片進(jìn)行確認(rèn)，確認(rèn)的順序是目鏡→物鏡→裝片，一般不要輕易先移動(dòng)裝片，不然要重新調(diào)整觀察。

五、關(guān)于顯微鏡的放大倍數(shù)

顯微鏡的放大倍數(shù)等于目鏡的放大倍數(shù)乘以物鏡的放大倍數(shù)，而這個(gè)總的放大倍數(shù)指的是被觀察樣品的長(zhǎng)度和寬度，并不是面積，面積則是長(zhǎng)和寬相乘，對(duì)此需要理解視野中一行相連的細(xì)胞如果共有64個(gè)，當(dāng)放大倍數(shù)增加4倍時(shí)，視野中應(yīng)該還可以觀察到16個(gè)細(xì)胞，但是如果視野中64個(gè)細(xì)胞為充滿整個(gè)視野的分布，此時(shí)總的放大倍數(shù)提升4倍，最后可以觀察到應(yīng)該是4個(gè)，因?yàn)橐恍邢噙B只需考慮一個(gè)維度的增加，而充滿視野則需要思考64個(gè)細(xì)胞組成的面積會(huì)因?yàn)榉糯蟊稊?shù)的增加而變小。

六、高倍鏡的使用

遵照先低倍后高倍的原則，需要先在低倍鏡下觀察清楚以后，再換用高倍鏡，另外換用高倍鏡前，需要將所要觀察的物象移動(dòng)到視野中央，以防止換用高倍鏡后物象移出視野而觀察不到；換用高倍鏡時(shí)可以直接轉(zhuǎn)動(dòng)轉(zhuǎn)換器，無需提升鏡筒，雖然高倍鏡會(huì)因?yàn)殓R頭較長(zhǎng)距離裝片更近，但正確的操作不用擔(dān)心會(huì)觸碰裝片。換用高倍鏡后，如果視野不夠清晰，則只需要調(diào)節(jié)細(xì)準(zhǔn)焦螺旋，通常來說換用高倍鏡后視野會(huì)變暗，此時(shí)可以通過光圈或者反光鏡的調(diào)整來增加亮度。

七、關(guān)于目鏡和物鏡

兩個(gè)都是凸透鏡，目鏡的放大倍數(shù)和長(zhǎng)度成反比，而物鏡的放大倍數(shù)和長(zhǎng)度成正比，如果想要獲得最大的放大倍數(shù)，需要使用最短的目鏡和最長(zhǎng)的物鏡組合，另外兩者構(gòu)造上也有外觀的差異性，目鏡沒有螺紋，可以直接放進(jìn)鏡筒，而物鏡有螺紋，需要擰在轉(zhuǎn)換器上以固定使用。