最近不少用戶問我們關(guān)于熒光顯微鏡的使用方法,這里摘錄幾篇關(guān)于熒光顯微鏡的文章:
熒光顯微鏡的應(yīng)用與注意(體視)
使用
一、將材料片放在顯微鏡的載物臺上。
二、打開熒光顯微鏡穩(wěn)壓器,然后啟動紫外燈,紫外燈15min內(nèi)不得關(guān)閉,關(guān)閉后3min內(nèi)不得再啟動。
三、將激發(fā)濾光片轉(zhuǎn)至v,分色片調(diào)到v,選用495或475nm阻擋濾光片。
四、選用uvFL40、uvFL100熒光接物鏡鏡檢。
五、在玻片上加無熒光油,先用40 x,再用100 x調(diào)焦鏡檢.呈現(xiàn)熒光。
六、因熒光物質(zhì)受紫外光照射時隨時間的增長熒光逐漸變?nèi),因此鏡檢時應(yīng)經(jīng)常變換視野。
七、亦可用uvFL10或uvFL20低倍鏡鏡檢材料(用低倍鏡時不加無熒光油)。
熒光圖像的記錄方法:
熒光顯微鏡所看到的熒光圖像,一是具有形態(tài)學(xué)特征,二是具有熒光的顏色和亮度,在判斷結(jié)果時,必須將二者結(jié)合起來綜合判斷。結(jié)果記錄根據(jù)主觀指標(biāo),即憑工作者目力觀察。作為一般定性觀察,基本上可靠的。隨著技術(shù)科學(xué)的發(fā)展,在不同程度上采用客觀指標(biāo)記錄判斷結(jié)果,如用細(xì)胞分光光度計,圖像分析儀等儀器。但這些儀器記錄的結(jié)果,也必須結(jié)合主觀的判斷。
熒光顯微鏡攝影技術(shù)對于記錄熒光圖像十分必要,由于熒光很易褪色減弱,要即時攝影記錄結(jié)果。方法與普通顯微攝影技術(shù)基本相同。只是需要采用高速感光膠片如ASA200以上或24。以上。因紫外光對熒光猝滅作用大,如FITC的標(biāo)記物,在紫外光下照射30s,熒光亮度降低50%。所以,曝光速度太慢,就不能將熒光圖像拍攝下來。一般研究型熒光顯微鏡都有半自動或全自動顯微攝影系統(tǒng)裝置。
注意事項:
(1)嚴(yán)格按照熒光顯微鏡出廠說明書要求進(jìn)行操作,不要隨意改變程序。
(2)應(yīng)在暗室中進(jìn)行檢查。進(jìn)入暗室后,接上電源,點燃超高壓汞燈5~15min,待光源發(fā)出強(qiáng)光穩(wěn)定后,眼睛完全適應(yīng)暗室,再開始觀察標(biāo)本。
(3)防止紫外線對眼睛的損害,在調(diào)整光源時應(yīng)戴上防護(hù)眼鏡。
(4)檢查時間每次以1~2h為宜,超過90min,超高壓汞燈發(fā)光強(qiáng)度逐漸下降,熒光減弱;標(biāo)本受紫外線照射3~5min后,熒光也明顯減弱;所以,最多不得超過2~3h。
(5)熒光顯微鏡光源壽命有限,標(biāo)本應(yīng)集中檢查,以節(jié) 省時間,保護(hù)光源。天熱時,應(yīng)加電扇散熱降溫,新?lián)Q燈泡應(yīng)從開始就記錄使用時間。燈熄滅后欲再用時,須待燈泡充分冷卻后才能點燃。一天中應(yīng)避免數(shù)次點燃光源。
(6)標(biāo)本染色后立即觀察,因時間久了熒光會逐漸減弱。若將標(biāo)本放在聚乙烯塑料袋中4℃保存,可延緩熒光減弱時間,防止封裱劑蒸發(fā)。
(7)熒光亮度的判斷標(biāo)準(zhǔn):一般分為四級,即“一”—無或可見微弱熒光。“+”—僅能見明確可見的熒光。“++”—可見有明亮。