在做樣品分析過(guò)程中,經(jīng)常會(huì)出現(xiàn)色譜峰圖異常的現(xiàn)象,比如前沿或者拖尾,這給我們的分析檢測(cè)造成了很大的困擾。
1超載
2前延:(拖尾因子Tf<0.95)
3拖尾:(拖尾因子Tf>1.05)
導(dǎo)致峰形異常的原因有很多,接下來(lái)帶大家了解一下常見的影響因素:
當(dāng)供試品進(jìn)樣量和進(jìn)樣體積在安全的范圍內(nèi),改變進(jìn)樣量和體積會(huì)相應(yīng)地影響到峰高和峰面積,而保留時(shí)間、峰寬和分離度的影響并不大,但當(dāng)進(jìn)樣體積或者質(zhì)量很大的時(shí)候,就會(huì)造成超載現(xiàn)象,伴隨著峰寬增加、峰型變差和分離度降低。
柱長(zhǎng)在50~250mm,內(nèi)徑4~5mm的色譜柱,單個(gè)樣品的進(jìn)樣質(zhì)量應(yīng)該在50μg以內(nèi),進(jìn)樣體積小于25 μL。超載分為體積超載和質(zhì)量超載兩種,下面將分別對(duì)這兩個(gè)超載對(duì)分離的影響做介紹。
(1)體積超載
(2)質(zhì)量超載
超載會(huì)影響到色譜峰形,當(dāng)進(jìn)樣體積和質(zhì)量在合適的范圍內(nèi),是獲得良好峰形的保證,而又有哪些因素可以導(dǎo)致前延和拖尾呢,下面我們接著說(shuō)。
1. 溶劑效應(yīng)的影響
(1)用流動(dòng)相溶解樣品:
a.用純甲醇溶解樣品
b.用流動(dòng)相溶解樣品
(2)先強(qiáng)溶劑溶解樣品,然后用流動(dòng)相稀釋
a.純甲醇溶解
b.用流動(dòng)相溶解樣品
2、緩沖作用不合適:
3、儀器系統(tǒng)不合適:
1. 降低pH,抑制硅羥基的電離
a. 流動(dòng)相:甲醇:磷酸鹽緩沖溶液=70:30(混合好后,測(cè)得pH為4.07)
b.流動(dòng)相:甲醇:磷酸鹽緩沖溶液=70:30(甲醇和磷酸鹽緩沖溶液混合好后用磷酸調(diào)節(jié)pH至2.49)
2、增加緩沖鹽,加大緩沖作用
a. 流動(dòng)相:甲醇:水=75:25
b. 流動(dòng)相:甲醇:50mmol/L磷酸二氫鈉溶液=75:25 (混合好后,用三乙胺調(diào)節(jié)pH至8.40, 即200ml混合好的溶液中加入75ul三乙胺)
3、因?yàn)槊糠N緩沖鹽的緩沖能力不一樣,可以通過(guò)更換緩沖鹽來(lái)調(diào)整:
a. 流動(dòng)相:5mmol/L磷酸鹽緩沖液(用磷酸調(diào)節(jié)pH值為4.4)-甲醇-乙腈(40:20:10)
b. 流動(dòng)相:5mmol/L醋酸鹽緩沖液(用醋酸調(diào)節(jié)pH值為4.4)-甲醇-乙腈(40:20:10)
4、屏蔽硅羥基的影響(如加入三乙胺)
a.流動(dòng)相:磷酸鹽緩沖溶液:甲醇=80:20b.流動(dòng)相:磷酸鹽緩沖溶液:甲醇:三乙胺=80:20: