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1.所選用的流動相溶劑要有一定的化學穩定性，不與固定相和樣品組分起反應，其純度和化學特性必須滿足色譜過程的穩定性和重復性的要求。
2.溶劑應當不干擾檢測器的工作，溶劑應與檢測器匹配，選擇不影響檢測器正常工作應選擇在測定波長范圍內無吸收的流動相。
3.在制備分離中, 溶劑應當易于除去, 不干擾對分離組分的回收。
4.溶劑的粘度要小，保證合適的柱壓降。
5.從實用角度考慮，溶劑應當價格低廉，容易購得，使用安全，純度要高。
秘訣1由強到弱：
一般先用90%的乙腈(或甲醇)/水(或緩沖溶液)進行試驗，這樣可以很快地得到分離結果，然后根據出峰情況調整有機溶劑(乙腈或甲醇)的比例。
秘訣2三倍規則：
每減少10%的有機溶劑(甲醇或乙腈)的量，保留因子約增加3倍，此為三倍規則。這是一個聰明而又省力的辦法。調整的過程中，注意觀察各個峰的分離情況。
秘訣3粗調轉微調：
當分離達到一定程度，應將有機溶劑10%的改變量調整為5%，并據此規則逐漸降低調整率，直至各組分的分離情況不再改變。
流動相的配制要點要記得
1.配制不含水的有機溶劑類流動相所用量筒應區分開，必須是干燥的，不得有水。
2.流動相的抽濾。含水流動相和不含水流動相的抽濾裝置應區分開。抽濾不含水的有機溶劑類流動相所用裝置必須是干燥的，不得有水。
3.超聲波震蕩，除氣泡。
4.使用0.04%的疊氮鈉溶液以防止流動相長菌。
將適量抽濾好的流動相倒入流動相專用儲液瓶，潤洗一次后倒入廢液瓶，再將剩余流動相全部倒入專用儲液瓶；填寫《流動相標簽》，并將標簽貼在儲液瓶上。更換流動相時應及時更新《流動相標簽》。
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流動相類別 |
效期 |
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純甲醇 |
3個月 |
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純乙腈 |
1個月 |
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5%的甲醇/乙腈水溶液 |
15天 |
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緩沖鹽溶液 |
3天 |
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純化水 |
1天 |
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甲醇與緩沖鹽混合溶液 |
7天 |
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乙腈與緩沖鹽混合溶液 |
7天 |
例如：純甲醇使用日期是2015年06月11日，有效期至2015年09月10日；甲醇與緩沖鹽混合溶液配制日期是2015年03月10日，有效期至2015年03月16日。
加鹽流動相做完實驗沖洗步驟：
先用50%純水和50%有機相沖洗，然后逐漸將有機相將低到10%甚至5%，最后用100%有機相沖洗封柱，整個過程1h以上。若是沖洗一晚上，則用5%甲醇以0.1ml/min以下的低流速沖洗。
10%異丙醇在線沖洗密封墊：
10%異丙醇需定期更換，流動相不加鹽時，周期可以設置1min，沖洗0.2min；流動相加鹽時，周期設置1min，沖洗0.5min，最大為0.7min（長期處于最大值會導致蠕動泵磨損）。
流動相更換：
流動相瓶必須清洗干凈，含水流動相需定期更換避免長菌，純水2天換一次，進樣前和實驗過程中需不定時觀察流動相有無沉淀。
流動相瓶清洗：
先用酸液浸泡，然后用大量的自來水沖洗，接著用蒸餾水涮3次以上，最后一次用哇哈哈水潤洗。
溶劑中的雜質會導致出現“鬼峰”，特別是梯度解吸時。
溶劑混合產生的問題：
樣品的溶解：
流動相過濾頭產生的問題
緩沖液的使用：
使用前必須過濾;
使用后一定要進行清洗 ，以免造成腐蝕、磨損、阻塞:用純水沖洗30-60min（1ml/min），再用甲醇沖洗30min;
易受到細菌和霉菌的影響。
注意：不能直接用有機溶劑沖洗。
更換互溶流動相時注意清洗吸濾頭；
更換不互溶流動相時必須用中間過渡液清洗系統，例如異丙醇；
更換緩沖液時，應用純水過渡；
更換流動相后應使用PURGE鍵快速排液。排去殘液或氣泡。
注意緩沖液的pH值與使用的色譜柱匹配
緩沖液必須過濾膜；
使用緩沖液期間，用注射器推純水，清洗柱塞桿，延長泵密封墊壽命；
分析完后用純水清洗系統。
自動進樣器清洗液
如選擇不當重現性不好；
常用1：1的甲醇水或不含鹽的流動相；
清洗液必須過濾，經常更換；
清洗液需對樣品有一定的溶解度；
不可用乙腈作為自動進樣器的清洗液。
1、如果不是做梯度洗脫，必須將有機相和水相分別配置的話。盡可能用混合好的流動相，而不是用靠儀器混合。尤其是水相為磷酸鹽溶液的時候，磷酸鹽溶液可是細菌的“培養基”哦，在夏天基本上1個晚上過來，里面就有肉眼可見菌團了。
2、如果非得用純的水相作為流動相（通常是做梯度的時候），那么注意務：必每天做完實驗后將水相的管路用純水沖洗干凈，用有機相保存（如果水相不含鹽，直接用有機溶劑替換即可）。
3、如果有可能，請用煮沸過的水制備水相。
4、即使是混合好的流動相，如果水相含鹽，有機相比例不高，那么也需要定期檢查，尤其是在夏天的時候。
文章（文字）來源：化學掌中寶。
