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【微生物】預制平皿培養基的質量控制關鍵點概述

放大字體  縮小字體 發布日期:2024-08-22
核心提示:預制平板培養基即開即用,省去了配制的等繁瑣的流程,節省了人力物力,本期和大家簡要介紹一下預制平板培養基的質量保證和控制流
預制平板培養基即開即用,省去了配制的等繁瑣的流程,節省了人力物力,本期和大家簡要介紹一下預制平板培養基的質量保證和控制流程。決定預制平板培養基的質量主要有以下因素:原材料(干粉培養基、配制用水等)、制備過程的控制、滅菌、性能測試及包裝。

1.原材料
a.培養基原料:用于制備預制平皿的干粉培養基,對于輻照后微生物促生長能力和凝膠強度具有特殊的要求。所以需要對每一批用于預制平皿生產的原料都需要進行篩選,選擇品質優良且性狀相近的原料,以確保終產品批間差異。
b.培養基制備用水需符合純化水的要求。

2.培養基制備
對于即用型培養基而言,無菌水平代表了產品的質量狀況,是培養基質量控制的關鍵性指標。無菌水平需要綜合的過程控制,不單單依賴最終的輻照滅菌。
培養基的制備和滅菌一般采用培養基制備器一體化操作,pH調節是一個很關鍵步驟,需綜合考慮滅菌和輻照pH的變化量。滅菌條件一般為121℃ 15min,一般在此滅菌條件下微生物繁殖體及芽胞能夠被完全殺滅。已配制好的培養基應在盡可能短的時間內滅菌,避免微生物生長繁殖,導致微生物負載偏高,影響滅菌效果;而且微生物生長繁殖會消耗養分,同時代謝會產生物質可能導致培養基pH值變化。因此,培養基滅菌溫度和時間必須嚴格控制,且不可重復滅菌。

3.分裝
滅菌后的培養基待到分裝溫度時,通過灌裝系統分裝到無菌平皿中,整個過程需要關注平皿接觸環境的為生物負載,一般在局部A級環境下進行。在這個過程中,風速和履帶速度需要格外關注,這個環節可能影響瓊脂凝固速度和表面干燥程度。
工作人員應工裝整齊、潔凈、個人衛生符合要求,要有很強的無菌意識。對于挑揀平皿包裝的崗位,定時關注手套手指、衣物關鍵區域的微生物情況是很關鍵的,這個環節交叉污染可能性增大,所以崗位操作流程及注意事項需要定期培訓,手部、環境消殺及監控程序需重點關注。

4.輻照滅菌
輻照滅菌主要通過電磁輻射產生的能量波或粒子束來破壞微生物的遺傳分子(DNA)或生物活性分子,同時通過電離輻射產生自由基,使生物活性分子變性失活產生殺菌作用。但是輻照滅菌同時會產生大量的自由基,很容易使培養基的酸堿度發生變化,對含有酸堿指示劑、還原性組分(如維生素C)的培養基通常不能進行輻照滅菌。
以TSA/SDA為例,分包好的預制平板需要經過終端輻照滅菌(鈷60),以確保最終的微生物負載符合要求。輻照滅菌一般在輻照中心進行,平板生產企業對于輻照中心的輻照劑量控制顯得非常重要,需要自己定期進行監測,以確保實際輻照劑量達到工藝設計要求且均一性符合要求,這樣才能確保既能有效殺滅殘存的微生物,又要保證培養基中的營養組分含量保持穩定。

5. 包裝
預制平皿的包裝應嚴格密封,且不易破損,以避免產品在運輸過程中被環境微生物所污染。醫藥行業環境監測用預制平皿一般采用三層包裝:
外層包裝:強韌的包裝材質避免運輸過程中的包裝破損,外層包裝無滲透性;
中層包裝:在指定位置剝除并拋棄,將裝有內層包裝的平板轉移到潔凈區域;
內層包裝:在潔凈區域剝除并拋棄內層包裝,就可以直接使用。
同時內置轉移袋,便于實驗后轉移。

6. 質量控制
理化指標
(1)感官性狀:培養基應透明無雜質;
(2)pH值:除特殊說明外,pH 應在標準 pH ± 0.2 范圍內。
(3)凝膠強度:凝膠的穩定性、粘稠度和濕度適宜,一般以劃線接種時培養基不被劃破為宜。

微生物指標
(1)無菌性檢查
從每批制備好的培養基中抽取部分培養基進行預培養:將培養基于合適條件下培養一定時間,觀察有無菌落生長。若發現微生物污染,則該批培養基不符合要求且進行偏差調查。
(2)適用性
使用標準菌株按照規程和標準的要求對培養基進行適用性檢查,確保培養基符合藥典或者相關標準要求。 
編輯:songjiajie2010

 
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關鍵詞: 質量控制
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