1.1

三區平板劃線

三區劃線中第一區所占的區域大約是平板面積的五分之一到四分之一。第二區搭過第一區的面積使微生物數量得到“稀釋”，第三區搭過第二區的面積使微生物數量進一步“稀釋”，第三區不可與第一區有重疊的劃線。一般適用于可疑菌落的分離，或可疑菌落的二次平板分離。通常劃完三區后就可以出現單菌落。三區劃線如下圖。

1.2

四區平板劃線

四區平板劃線與上面的三區劃線類似，只是每一區的劃線面積相應減小，同樣第三區不可與第一區相重疊，第四區不可與第二區和第一區相重疊，四區劃線比三區劃線多稀釋一次，這樣通過增加劃線區域，有可能會分離到更多更純的單菌落。

1.3

單次連續“之”字平板劃線

其實在微生物劃線接種中，無論是試管斜面劃線接種還是平板劃線接種，都會用到“之”字劃線。“之”字劃線的要領是：往復不間斷劃線，但是又不與劃過的路線重復或重疊。如果菌量比較大，就可以劃得更為密集或者增加一塊平板繼續“之”字劃線（即連續劃兩塊板）。“之”字劃線一般適用于分離本身在此培養基上單一且黏性較大的菌類或可疑菌落的純培養。操作如下圖所示。

1.4

網狀平板劃線

網狀平板花線，其實就是兩次方向垂直的“之”字劃線重疊在一起，一般用于純培養，目的是通過增加更多的劃線路徑來獲得更多的純培養物，特別是針對一些生長較慢或菌落非常細小的菌類。

三區劃線法的具體步驟

在以上的這些平板劃線的方式中，三區平板劃線最常用的是分區劃線法，詳細步驟如下：

① 將接種環放在火焰上灼燒，直到接種還環燒紅。

② 在火焰旁冷卻接種換環，打開試管塞。

③ 將試管口通過火焰，旋轉試管口并小幅度來回移動試管，切不可長時間讓試管口停滯于火焰上加熱。

④ 將已冷卻的接種環伸入菌液中，挑取一環菌液。

⑤ 將試管口通過火焰幾次后，塞上試管塞。將試管放回試管架。

⑥ 左手拿起培養皿，將培養皿蓋打開一條縫隙，右手將沾有菌液的接種環迅速深入平皿內。從平皿邊緣開始“之”字劃線（基準線也稱第一區域），大約劃過平皿的五分之一到四分之一左右的面積。關閉培養皿蓋，將培養皿調轉大約120°。再次灼燒接種環，將接種環在空氣中或靠在培養皿蓋內側冷卻后從第一區域末端開始往第二區內劃線。兩個區域劃線的交角大約是120°。重復以上動作，完成第三區（甚至第四區）劃線操作。注意：當前操作的劃線只能與相鄰前一區域相交，絕不能與其他區域的劃線有重疊。

一般三區劃線就能分離出單菌落，第一區和第二區前部的細菌生長成“直線”，第二區后部的細菌生長呈“虛線”。第三區呈“虛線”和離散的“小點”（即單菌落）。