產(chǎn)品簡(jiǎn)介及操作步驟：

一、概要
黃曲霉毒素是一類(lèi)真菌（如黃曲霉和寄生曲霉）的有毒的代謝產(chǎn)物，它們具有很強(qiáng)的致癌性，主要存在于谷物、堅(jiān)果、棉籽以及一些和人類(lèi)血液，動(dòng)物飼料相關(guān)的產(chǎn)品中。黃曲霉毒素M1是黃曲霉毒素B1的羥基化代謝產(chǎn)物，也是一種強(qiáng)致癌物質(zhì)。牛乳及其制品是易受到黃曲霉毒素M1污染的食品之一。Aflatoxin M1的檢測(cè)方法有高效液相色譜法(HPLC)，薄層層析法(TLC)等。而使用黃曲霉毒素M1 ELISA試劑盒則能夠快速而準(zhǔn)確的分析樣品中黃曲霉毒素M1殘留。
本試劑盒是應(yīng)用ELISA技術(shù)研發(fā)的新一代真菌毒素檢測(cè)產(chǎn)品，操作時(shí)間短于60min，能最大限度地減少操作誤差和工作強(qiáng)度。

二、試驗(yàn)原理
黃曲霉毒素M1檢測(cè)試劑盒采用間接競(jìng)爭(zhēng)ELISA方法，在酶標(biāo)板微孔條上預(yù)包被黃曲霉毒素M1抗原，樣本中黃曲霉毒素M1和此抗原競(jìng)爭(zhēng)黃曲霉毒素M1抗體，同時(shí)黃曲霉毒素M1抗體與酶標(biāo)二抗相結(jié)合，經(jīng)TMB底物顯色，樣本吸光值與其含有的黃曲霉毒素M1成負(fù)相關(guān)，與標(biāo)準(zhǔn)曲線比較再乘以其對(duì)應(yīng)的稀釋倍數(shù)，即可得出樣品中黃曲霉毒素M1的含量。

三、黃曲霉毒素M1檢測(cè)試劑盒適用范圍:可定性、定量檢測(cè)牛乳及其他乳制品等樣本中的黃曲霉毒素M1。

四、使用單位需自備的設(shè)備及試劑
設(shè)備：
┅┅微孔板酶標(biāo)儀450nm/630nm
┅┅振蕩器
┅┅離心機(jī)
┅┅天平：感量0.01g
┅┅微量移液器：?jiǎn)蔚?20l～200l、200l～1000l、多道 250l
┅┅刻度移液管：25ml
┅┅洗耳球
┅┅三角瓶：100ml
┅┅聚苯乙烯離心管：10ml/50ml
試劑：
----去離子水

五、提供的材料與試劑
組份名稱(chēng)、酶標(biāo)板、高濃度標(biāo)準(zhǔn)品（810ppb）、AFM1酶標(biāo)物、AFM1抗試劑、底物液A液、底物液B液、終止液、濃縮洗滌液（10×）、AFM1濃縮樣品/標(biāo)品稀釋液（4×） 注：試劑盒檢測(cè)范圍0.05ppb~4.05ppb

六、溶液的配制
配液1: 樣品/標(biāo)品稀釋液
配液2: 洗滌工作液
配液3：6個(gè)不同濃度的標(biāo)準(zhǔn)液

七、樣本前處理步驟
（一）牛奶
┅┅將含脂牛奶降溫至10℃以下，于3500轉(zhuǎn)/ min下離心10min；
┅┅用吸管棄去上層脂肪層，下層牛奶液即為待測(cè)液。（脫脂牛奶直接測(cè)定）
（二）奶粉
┅┅取5g奶粉于100ml三角瓶中，加入25ml蒸鎦水；
┅┅振蕩5min，使其完全溶解；
┅┅之后樣品處理同牛奶樣品處理方法。

八、檢測(cè)步驟
測(cè)定前應(yīng)須知：
1、使用之前將所有試劑和需用板條的溫度回升至室溫（20～25℃）。
2、使用之后立即將所有試劑放回2～8℃。
3、在ELISA分析中的再現(xiàn)性，很大程度上取決于洗板的一致性，正確的洗板操作是ELISA測(cè)定程序中的要點(diǎn)。
4、在所有恒溫孵育過(guò)程中，避免光線照射，用蓋板膜封住微孔板。
5、黃曲霉毒素M1可致癌，應(yīng)戴手套操作。
操作步驟：
1、將所需試劑從冷藏環(huán)境中取出，置于室溫平衡30min以上，注意每種液體試劑使用前均須搖勻。
2、取出需要數(shù)量的微孔板，將不用的微孔板放進(jìn)原錫箔袋中并且與提供的干燥劑一起重新密封，保存于2～8℃。不要冷凍。
3、洗滌工作液在使用前也需回溫。
4、編號(hào)：將樣本和標(biāo)準(zhǔn)品對(duì)應(yīng)微孔按序編號(hào)，每個(gè)樣本和標(biāo)準(zhǔn)品做2孔平行，并記錄標(biāo)準(zhǔn)孔和樣本孔所在的位置。
5、加標(biāo)準(zhǔn)品/樣本：加標(biāo)準(zhǔn)品/樣本50l到對(duì)應(yīng)的微孔中，加入AFM1酶標(biāo)物50l/孔，再加入AFM1抗試劑50l/孔，輕輕振蕩混勻，用蓋板膜蓋板后置室溫避光環(huán)境中反應(yīng)。
6、洗板：小心揭開(kāi)蓋板膜，將孔內(nèi)液體甩干，用洗滌工作液300l/孔，充分洗滌5次，每次間隔30s，用吸水紙拍干（拍干后未被清除的氣泡可用未使用過(guò)的槍頭戳破）。
7、顯色：加入底物液A液50l/孔，再加底物液B液50l/孔，輕輕振蕩混勻，用蓋板膜蓋板后置室溫避光環(huán)境反應(yīng)15～20min。
8、測(cè)定：加入終止液50l/孔，輕輕振蕩混勻，設(shè)定酶標(biāo)儀于450nm處（建議用雙波長(zhǎng)450/630nm檢測(cè)，請(qǐng)?jiān)?min內(nèi)讀完數(shù)據(jù)），測(cè)定每孔OD值。(若無(wú)酶標(biāo)儀，則不加終止液用目測(cè)法可進(jìn)行判定)。

九、檢測(cè)方法靈敏度、準(zhǔn)確度、精密度
試劑盒檢測(cè)下限：0.05ppb
回收率：牛奶：90±15%
奶粉：85±15%
精密度：試劑盒的變異系數(shù)均小于10%

十、注意事項(xiàng)
1、室溫低于20℃或試劑及樣本沒(méi)有回到室溫（20～25℃）會(huì)導(dǎo)致所有標(biāo)準(zhǔn)的OD值偏低。
2、在洗板過(guò)程中如果出現(xiàn)板孔干燥的情況，則會(huì)出現(xiàn)標(biāo)準(zhǔn)曲線不成線性，重復(fù)性不好的現(xiàn)象。所以洗板拍干后應(yīng)立即進(jìn)行下一步操作。
3、每加一種試劑前需將其搖勻。
4、反應(yīng)終止液為2M硫酸，避免接觸皮膚。
5、不要使用過(guò)了有效日期的試劑盒；也不要使用過(guò)了有效期的試劑盒中的任何試劑，摻雜使用過(guò)了有效期的試劑盒會(huì)引起靈敏度的降低；不要交換使用不同批號(hào)試劑盒中的試劑。
6、儲(chǔ)存條件：保存試劑盒于2～8℃，不要冷凍，將不用的酶標(biāo)板微孔板放進(jìn)自封袋重新密封。標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)和無(wú)色的發(fā)色劑對(duì)光敏感，因此要避免直接暴露在光線下。
7、試劑變質(zhì)的跡象發(fā)色試劑有任何顏色表明發(fā)色劑變質(zhì)，應(yīng)當(dāng)棄之。0標(biāo)準(zhǔn)的吸光度（450/630nm）值小于0.5（A450nm<0.5）時(shí)，表示試劑可能變質(zhì)。
8、在加入底物液A液和底物液B液后，一般顯色時(shí)間為15～20min即可。若顏色較淺，可延長(zhǎng)反應(yīng)時(shí)間到30min（或更長(zhǎng)）。反之，則減短反應(yīng)時(shí)間。
9、濃縮洗滌液如有結(jié)晶屬正常現(xiàn)象，請(qǐng)加熱溶解后使用。
10、該試劑盒最佳反應(yīng)溫度為25℃，溫度過(guò)高或過(guò)低將導(dǎo)致檢測(cè)吸光度值和靈敏度發(fā)生變化。

十一、貯藏條件及保存期
貯藏條件：保存試劑盒于2～8℃。
保存期：該產(chǎn)品有效期為12個(gè)月。