溶菌酶(1ysozyme;EC3.2.1.17)是一種專門作用于微生物細胞壁的水解酶,又稱細胞壁溶解酶。人們對溶菌酶的研究始于本世紀初,英國細菌學家弗萊明發現人的唾液、眼淚中存在有溶解細菌細胞壁的酶,并將其命名為溶菌酶。此后,人們在動物、植物和微生物中都發現了溶菌酶的存在。 隨著研究的不斷深入,人們發現溶菌酶不僅對細菌細胞壁有作用,還可作用于真菌細胞壁。根據來源不同,溶菌酶可以分為以下三類:
1)動物溶菌酶 雞蛋白中約含有3.5%的溶菌酶,可分解革蘭氏陽性菌,對革蘭氏陰性菌不起作用,其分子量為14000。此外,從其他鳥類蛋白、哺乳動物乳汁及體液中也分離到了溶菌酶。
2)植物溶菌酶 研究人員對116科410種植物進行普查,發現168種植物中含有溶菌酶。其中木瓜、無花果,大麥等植物中均可分離出溶菌酶,其分子量較大,約為24000-29000,其對溶壁小球菌的溶菌活性不超過雞蛋白溶菌酶的1/3。
3)微生物溶菌酶 人們從上世紀60年代發現微生物也產生溶菌酶,按其作用對象可分為兩大類,即細菌溶菌酶和真菌溶菌酶。
溶菌酶的種類
1)細菌溶菌酶 細菌溶菌酶通常可分為三大類:N-乙酰氨基己糖苷酶,它催化水解肽聚糖中糖骨架中的β(1→4)糖苷鍵;N-乙酰胞壁酰-丙氨酸酰胺酶,它催化裂解肽聚糖中糖基與肽基;內肽酶,它催化裂解肽聚糖肽橋中的肽鍵。研究發現,溶菌酶的抗菌活性不僅表現在其分解細菌細胞壁方面,當酶受到不可逆抑制后,它仍然顯示出抗菌效應,這可能與溶菌酶呈堿性有關。不同來源的溶菌酶有不同的抗菌范圍,并對不同類型的肽聚糖有特異性,特別是它們對O-乙酰化肽聚糖的分解能力不同。由于革蘭氏陽性菌無外膜,所以溶菌酶對它們作用較強。溶菌酶與EDTA并用,可加強對革蘭氏陰性菌的抑制作用。用紫蘇醛處理溶菌酶,或將溶菌酶連接到半乳甘露聚糖上,可加強該酶穿過外膜進入靶細胞,從而增強其對革蘭氏陰性菌的作用。此外,溶菌酶與其他抗微生物酶(葡萄糖氧化酶、乳過氧化物酶)或與傳統的防腐措施(如山梨酸鹽、乙醇、溫度和低PH)聯用,可以提高食品微生物安全性。
2)真菌溶菌酶
真菌溶菌酶主要包括幾丁質酶和-β葡聚糖酶。
(1)幾丁質酶
雖然一些外幾丁質酶(exochitinases;EC3.2.1.30)也表現出抗真菌的特性,但抗真菌的幾丁質酶主要是內幾丁質酶(endochitinases;EC3.2.1.14)。人們已經研究了許多來自于植物和微生物的幾丁質酶,并對有些幾丁質酶抑制真菌生長/裂解真菌細胞的作用進行了研究。科學家們首先在植物中發現了幾丁質酶的抗真菌作用,這類幾丁質酶可以對抗侵入植物體的真菌病原體。微生物幾丁質酶主要是由鏈霉菌屬、桿菌和大多數真菌產生的。細菌分泌幾丁質酶主要用于真菌細胞壁的降解和重組,但在大多數產幾丁質酶的真菌中,此酶主要用于真菌細胞壁的成型過程。只有在一些特定的寄生霉菌中,如 Trichoderma harzianum、APhanocladium album和Gliocladium vixens中,胞外幾丁質酶和β-葡聚糖酶用來附著和降解目的菌絲。這些抗真菌的幾丁質酶與植物幾丁質酶相似,多為內幾丁質酶。由于肽聚糖和甲殼質的糖骨架具有相似的結構,因此,一些幾丁質酶也具有溶菌酶活性。
(2)β-葡聚糖酶
β-葡聚糖酶(β-glucanases;EC 3.2.1.39)具有抗真菌作用主要是因為它能水解β(1→3)糖苷鍵。研究表明:β(1→3)葡聚糖酶對幾丁質降解真菌細胞壁具有顯著的協同作用。如將純化的幾丁質酶和β-葡聚糖酶合用,抗灰色葡萄孢(Botrytis cinera)的作用提高了10倍。內葡聚糖酶與外葡聚糖酶、不同內葡聚糖酶間也具有協同抗真菌作用。因為許多植物性食品中含有β-葡聚糖成分,它對維持產品的組織性、黏度和外觀都有重要作用,將β-葡聚糖酶加入這類食品,可能會引起不良影響。真菌的細胞壁主要組分為幾丁質和β-葡聚糖,但一些真菌和大多數酵母細胞壁含有其他類型的多糖(甘露聚糖、α-葡聚糖和纖維素),因此,甘露聚糖酶、α-葡聚糖酶也可作為抗真菌的酶類應用于食品工業。
溶菌酶在食品工業中的應用
1)溶菌酶在乳制品中的應用
人乳中含有大量的溶菌酶,而牛乳中則很少,將溶菌酶添加到牛乳及其制品中,可使牛乳人乳化;研究還表明,溶菌酶是雙歧桿菌增長因子,有防止腸炎和變態反應的作用,對嬰、幼兒的腸道菌群有平衡作用;在干酪生產中添加溶菌酶可代替硝酸鹽等抑制丁酸菌的污染,防止干酪產氣,并對干酪的感官質量有明顯改善作用。
2)溶菌酶在新鮮海產品、肉類制品中的應用
研究表明,溶菌酶、氯化鈉和亞硝酸鹽聯合應用到肉制品中可延長肉制品的保質期,其防腐效果比單獨使用時效果更好。對于-些新鮮的海產品和水產品經溶菌酶處理后均可延長儲存期。
3)溶菌酶在低度酒類和飲料中的應用
在低度酒中添加20mg/kg的溶菌酶不僅對酒的風味無任何不良影響,還可防止產酸菌的生長,同時受酒類澄清劑的影響很小,是低度酒類較好的防腐劑,如日本就把溶菌酶用于清酒的防腐。此外,溶菌酶還可用于pH 6.0-7.5的飲料和果汁的防腐。
4)溶菌酶在其他食品中的應用
奶油蛋糕是容易腐敗變質的食品之一,在糕點中加入溶菌酶,可防止微生物的繁殖,起到防腐作用。章銀良研究了溶菌酶對草莓的保鮮作用,發現將溶菌酶與甘氨酸聯用,保鮮效果更佳。由于處于酵母細胞壁中的蛋白質利用率很低,所以利用溶菌酶破壞酵母細胞壁,可制成微生物蛋白質,提高酵母蛋白質的利用率。用含放線菌體的溶菌酶處理酵母液可生產出含有5'-肌苷酸、5'-鳥苷酸及其他呈味物質。
1)動物溶菌酶 雞蛋白中約含有3.5%的溶菌酶,可分解革蘭氏陽性菌,對革蘭氏陰性菌不起作用,其分子量為14000。此外,從其他鳥類蛋白、哺乳動物乳汁及體液中也分離到了溶菌酶。
2)植物溶菌酶 研究人員對116科410種植物進行普查,發現168種植物中含有溶菌酶。其中木瓜、無花果,大麥等植物中均可分離出溶菌酶,其分子量較大,約為24000-29000,其對溶壁小球菌的溶菌活性不超過雞蛋白溶菌酶的1/3。
3)微生物溶菌酶 人們從上世紀60年代發現微生物也產生溶菌酶,按其作用對象可分為兩大類,即細菌溶菌酶和真菌溶菌酶。
溶菌酶的種類
1)細菌溶菌酶 細菌溶菌酶通常可分為三大類:N-乙酰氨基己糖苷酶,它催化水解肽聚糖中糖骨架中的β(1→4)糖苷鍵;N-乙酰胞壁酰-丙氨酸酰胺酶,它催化裂解肽聚糖中糖基與肽基;內肽酶,它催化裂解肽聚糖肽橋中的肽鍵。研究發現,溶菌酶的抗菌活性不僅表現在其分解細菌細胞壁方面,當酶受到不可逆抑制后,它仍然顯示出抗菌效應,這可能與溶菌酶呈堿性有關。不同來源的溶菌酶有不同的抗菌范圍,并對不同類型的肽聚糖有特異性,特別是它們對O-乙酰化肽聚糖的分解能力不同。由于革蘭氏陽性菌無外膜,所以溶菌酶對它們作用較強。溶菌酶與EDTA并用,可加強對革蘭氏陰性菌的抑制作用。用紫蘇醛處理溶菌酶,或將溶菌酶連接到半乳甘露聚糖上,可加強該酶穿過外膜進入靶細胞,從而增強其對革蘭氏陰性菌的作用。此外,溶菌酶與其他抗微生物酶(葡萄糖氧化酶、乳過氧化物酶)或與傳統的防腐措施(如山梨酸鹽、乙醇、溫度和低PH)聯用,可以提高食品微生物安全性。
2)真菌溶菌酶
真菌溶菌酶主要包括幾丁質酶和-β葡聚糖酶。
(1)幾丁質酶
雖然一些外幾丁質酶(exochitinases;EC3.2.1.30)也表現出抗真菌的特性,但抗真菌的幾丁質酶主要是內幾丁質酶(endochitinases;EC3.2.1.14)。人們已經研究了許多來自于植物和微生物的幾丁質酶,并對有些幾丁質酶抑制真菌生長/裂解真菌細胞的作用進行了研究。科學家們首先在植物中發現了幾丁質酶的抗真菌作用,這類幾丁質酶可以對抗侵入植物體的真菌病原體。微生物幾丁質酶主要是由鏈霉菌屬、桿菌和大多數真菌產生的。細菌分泌幾丁質酶主要用于真菌細胞壁的降解和重組,但在大多數產幾丁質酶的真菌中,此酶主要用于真菌細胞壁的成型過程。只有在一些特定的寄生霉菌中,如 Trichoderma harzianum、APhanocladium album和Gliocladium vixens中,胞外幾丁質酶和β-葡聚糖酶用來附著和降解目的菌絲。這些抗真菌的幾丁質酶與植物幾丁質酶相似,多為內幾丁質酶。由于肽聚糖和甲殼質的糖骨架具有相似的結構,因此,一些幾丁質酶也具有溶菌酶活性。
(2)β-葡聚糖酶
β-葡聚糖酶(β-glucanases;EC 3.2.1.39)具有抗真菌作用主要是因為它能水解β(1→3)糖苷鍵。研究表明:β(1→3)葡聚糖酶對幾丁質降解真菌細胞壁具有顯著的協同作用。如將純化的幾丁質酶和β-葡聚糖酶合用,抗灰色葡萄孢(Botrytis cinera)的作用提高了10倍。內葡聚糖酶與外葡聚糖酶、不同內葡聚糖酶間也具有協同抗真菌作用。因為許多植物性食品中含有β-葡聚糖成分,它對維持產品的組織性、黏度和外觀都有重要作用,將β-葡聚糖酶加入這類食品,可能會引起不良影響。真菌的細胞壁主要組分為幾丁質和β-葡聚糖,但一些真菌和大多數酵母細胞壁含有其他類型的多糖(甘露聚糖、α-葡聚糖和纖維素),因此,甘露聚糖酶、α-葡聚糖酶也可作為抗真菌的酶類應用于食品工業。
溶菌酶在食品工業中的應用
1)溶菌酶在乳制品中的應用
人乳中含有大量的溶菌酶,而牛乳中則很少,將溶菌酶添加到牛乳及其制品中,可使牛乳人乳化;研究還表明,溶菌酶是雙歧桿菌增長因子,有防止腸炎和變態反應的作用,對嬰、幼兒的腸道菌群有平衡作用;在干酪生產中添加溶菌酶可代替硝酸鹽等抑制丁酸菌的污染,防止干酪產氣,并對干酪的感官質量有明顯改善作用。
2)溶菌酶在新鮮海產品、肉類制品中的應用
研究表明,溶菌酶、氯化鈉和亞硝酸鹽聯合應用到肉制品中可延長肉制品的保質期,其防腐效果比單獨使用時效果更好。對于-些新鮮的海產品和水產品經溶菌酶處理后均可延長儲存期。
3)溶菌酶在低度酒類和飲料中的應用
在低度酒中添加20mg/kg的溶菌酶不僅對酒的風味無任何不良影響,還可防止產酸菌的生長,同時受酒類澄清劑的影響很小,是低度酒類較好的防腐劑,如日本就把溶菌酶用于清酒的防腐。此外,溶菌酶還可用于pH 6.0-7.5的飲料和果汁的防腐。
4)溶菌酶在其他食品中的應用
奶油蛋糕是容易腐敗變質的食品之一,在糕點中加入溶菌酶,可防止微生物的繁殖,起到防腐作用。章銀良研究了溶菌酶對草莓的保鮮作用,發現將溶菌酶與甘氨酸聯用,保鮮效果更佳。由于處于酵母細胞壁中的蛋白質利用率很低,所以利用溶菌酶破壞酵母細胞壁,可制成微生物蛋白質,提高酵母蛋白質的利用率。用含放線菌體的溶菌酶處理酵母液可生產出含有5'-肌苷酸、5'-鳥苷酸及其他呈味物質。