资源新版在线天堂-桌下含校园污肉高h-坠落女教师-椎名由奈在线播放-六月色婷婷-六月丁香婷婷天天在线

VIP標識 上網做生意,首選VIP會員| 設為首頁| 加入桌面| | 手機版| RSS訂閱
食品伙伴網服務號
 

凝膠電泳

放大字體  縮小字體 發布日期:2006-07-02

  以淀粉膠、瓊脂或瓊脂糖凝膠、聚丙烯酰胺凝膠等作為支持介質的區帶電泳法稱為凝膠電泳。其中聚丙烯酰胺凝膠電泳(polyacrylamide gel electrophoresis,PAGE)普遍用于分離蛋白質及較小分子的核酸。瓊脂糖凝膠孔徑較大,對一般蛋白質不起分子篩作用,但適用于分離同工酶及其亞型,大分子核酸等應用較廣,介紹如下:

  ⒈瓊脂糖凝膠電泳的原理概述 瓊脂糖是由瓊脂分離制備的鏈狀多糖。其結構單元是D-半乳糖和3.6-脫水-L-半乳糖。許多瓊脂糖鏈依氫鍵及其它力的作用使其互相盤繞形成繩狀瓊脂糖束,構成大網孔型凝膠。因此該凝膠適合于免疫復合物、核酸與核蛋白的分離、鑒定及純化。在臨床生化檢驗中常用于LDH、CK等同工酶的檢測。

  ⒉瓊脂糖凝膠電泳分離核酸的基本技術 在一定濃度的瓊脂糖凝膠介質中,DNA分子的電泳遷移率與其分子量的常用對數成反比;分子構型也對遷移率有影響,如共價閉環DNA>直線DNA>開環雙鏈DNA。當凝膠濃度太高時,凝膠孔徑變小,環狀DNA(球形)不能進入膠中,相對遷移率為0,而同等大小的直線DNA(剛性棒狀)可以按長軸方向前移,相對遷移率大于0。

  ⑴設備與試劑:瓊脂糖凝膠電泳分為垂直及水平型兩種。其中水平型可制備低濃度瓊脂糖凝膠,而且制膠與加樣都比較方便,故應用比較廣泛。核酸分離一般用連續緩沖體系,常用的有TBE(0.08mol/L Tris·HCl,pH8.5,0.08mol/L硼酸,0.0024mol/L EDTA)和THE(0.04mol/L Tris·HCl。pH7.8,0.2mol/L醋酸鈉,0.0018mol/L EDTA)。

  ⑵凝膠制備:用上述緩沖液配制0.5%-0.8%瓊脂糖凝膠溶液,沸水浴或微波爐加熱使之融化,冷至55℃時加入溴化乙錠(EB)至終濃度為0.5μg/ml,然后將其注入玻璃板或有機玻璃板組裝好的模子中,厚度依樣品濃度而定。注膠時,梳齒下端距玻璃板0.5-1.0mm,待脫凝固后,取出梳子,加入適量電極緩沖液使板膠浸沒在緩沖液下1mm處。

  ⑶樣品制備與加樣:溶解于TBE或THE內的樣品應含指示染料(0.025%溴酚藍或桔黃橙)、蔗糖(10%-15%)或甘油(5%-10%),也可使用2.5%Fico Ⅱ增加比重,使樣品集中,每齒孔可加樣5-10μg。

  ⑷電泳:一般電壓為5-15V/cm。對大分子的分離可用電壓5V/cm。電泳過程最好在低溫條件下進行。

  ⑸樣品回收:電泳結束后在紫外燈下觀察樣品的分離情況,對需要的DNA分子或特殊片段可從電泳后的凝膠中以不同的方法進行回收,如電泳洗脫法:在紫外燈下切取含核酸區帶的凝膠,將其裝入透析袋(內含適量新鮮電泳緩沖液),扎緊透析袋后,平放在水平型電泳槽兩電極之間的淺層緩沖液中,100V電泳2-3小時,然后正負電極交換,反向電泳2分鐘,使透析袋上的DNA釋放出來。吸出含DNA的溶液,進行酚抽提、乙醇沉淀等步驟即可完成樣品的回收。

  其它還有低融點瓊脂糖法、醋酸銨溶液浸出法、冷凍擠壓法等,但各種方法都僅僅有利于小分子量DNA片段(<1kb)的回收,隨著DNA分子量的增大,回收量顯著下降。

 
[ 網刊訂閱 ]  [ 食品專題搜索 ]  [ ]  [ 告訴好友 ]  [ 打印本文 ]  [ 關閉窗口 ] [ 返回頂部 ]

 

 
推薦圖文
推薦食品專題
點擊排行
 
 
Processed in 0.154 second(s), 19 queries, Memory 0.88 M
主站蜘蛛池模板: 人体内射精一区二区三区| 年轻老师毛茸茸自由性| 久久这里只有精品2| 男生互捏jiji的故事| jizz日本美女| 三级在线网址| 国产亚洲精品久久无亚洲| 日产日韩亚洲欧美综合搜索| 俄罗斯人xxx| 亚洲爱视频| 精品国产国产精2020久久日| 最近最新中文字幕MV高清在线| 免费高清毛片| 亚洲精品色情婷婷在线播放 | 小学生偷拍妈妈视频遭性教育| 韩国成人理伦片免费播放| 最近的中文字幕免费完整| 日本美女bb| 国产在线高清视频无码| 中文字幕无码A片久久| 人妖和美女玩| 国产在线精品视频二区| 2019久久这里只精品热在线观看| 激情床戏揉胸吃胸视频| 5g在线视讯年龄确认海外禁止进入| 国产精品视频免费观看| 欧美精品久久久久性色AV苍井 | 亚洲色t图| 国内国外精品影片无人区| 亚洲精品有码在线观看| 美女的jj| 性按摩AAAAAAA片| 娇妻归来在线观看免费完整版电影| 91精品专区| 无限资源在线看影院免费观看| 久久人妻少妇嫩草AV无码| 动漫AV纯肉无码AV电影网| 一本大道香蕉中文在线视频观看| 欧洲兽交另类AVXXX| 国语自产拍在线视频普通话 | 99热在线视频这里只精品|