根據分離DNA片段的大小及需凝膠的容積,配制聚丙烯酰胺凝膠.
1.按要求裝配好垂直電泳板,兩塊玻璃板的兩側及底部用1%的瓊脂 糖封邊,防止封閉不嚴而使聚丙烯酰胺液漏出.
2.將裝好的玻璃電泳板傾斜成45~60℃角.
3.按表3配制所需%濃度凝膠的毫升數.
4.加入TEMED后,立即混勻,緩緩倒入兩玻璃板間的膠床中,直到液 體接近溢出時為止.
5.立即插入適當的梳子,密切注意防止梳齒下產生氣泡,用一有力 的夾將梳子夾在一邊的玻璃板上,然后將玻璃板斜靠在物體上,使 成10°角,可減少液體泄漏的機會.
6.室溫聚合一小時后,將玻璃板插入電泳槽中,上緊,倒入0.1XTBE 緩沖液.
7.小心取出梳子,立即用緩沖液沖洗加樣孔,因為梳子取出后,梳 子上吸附的及凝膠頂部未聚合的丙烯酰胺會流入加樣孔內聚合,產 生不規則的表面,將導致以后DNA電泳帶型不規則.
8.將DNA樣品與適量的載樣緩沖液混勻后,加到樣品孔內,加樣時不 要產生氣泡.
9.接好電極,電壓為1-8V/cm,進行電泳.
10.根據指示劑遷移位置來判定是否終止電泳.
11.電泳畢,切斷電源,棄去電泳儀,取出膠床板,小心移去一塊玻 璃板,讓凝膠吸附在另一塊玻璃板上.浸入含0.5ug/ml的溴化乙錠溶 液中,15~30min后取出水洗紫外儀下觀察結果.
12.聚丙烯酰胺凝膠電泳只能檢出>10ng以上量的DNA條帶.要求更高 的靈敏度,可用銀染.
1.按要求裝配好垂直電泳板,兩塊玻璃板的兩側及底部用1%的瓊脂 糖封邊,防止封閉不嚴而使聚丙烯酰胺液漏出.
2.將裝好的玻璃電泳板傾斜成45~60℃角.
3.按表3配制所需%濃度凝膠的毫升數.
4.加入TEMED后,立即混勻,緩緩倒入兩玻璃板間的膠床中,直到液 體接近溢出時為止.
5.立即插入適當的梳子,密切注意防止梳齒下產生氣泡,用一有力 的夾將梳子夾在一邊的玻璃板上,然后將玻璃板斜靠在物體上,使 成10°角,可減少液體泄漏的機會.
6.室溫聚合一小時后,將玻璃板插入電泳槽中,上緊,倒入0.1XTBE 緩沖液.
7.小心取出梳子,立即用緩沖液沖洗加樣孔,因為梳子取出后,梳 子上吸附的及凝膠頂部未聚合的丙烯酰胺會流入加樣孔內聚合,產 生不規則的表面,將導致以后DNA電泳帶型不規則.
8.將DNA樣品與適量的載樣緩沖液混勻后,加到樣品孔內,加樣時不 要產生氣泡.
9.接好電極,電壓為1-8V/cm,進行電泳.
10.根據指示劑遷移位置來判定是否終止電泳.
11.電泳畢,切斷電源,棄去電泳儀,取出膠床板,小心移去一塊玻 璃板,讓凝膠吸附在另一塊玻璃板上.浸入含0.5ug/ml的溴化乙錠溶 液中,15~30min后取出水洗紫外儀下觀察結果.
12.聚丙烯酰胺凝膠電泳只能檢出>10ng以上量的DNA條帶.要求更高 的靈敏度,可用銀染.