洗 滌
一、玻璃器皿的洗滌
(一)、浸泡
新瓶使用前應(yīng)先用自來水簡單刷洗,然后用稀鹽酸溶液(5%)浸泡過夜;培養(yǎng)后的玻璃器皿用后要立即浸入清水中;注意:讓水能完全進入瓶皿中,不應(yīng)留有氣泡。
(二)、刷洗
浸泡后的玻璃器皿用毛刷沾洗滌劑洗滌(宜選用軟毛刷和優(yōu)質(zhì)的洗滌劑,如高級洗衣粉或洗潔精),絕對不能使用含沙粒的去污粉!洗刷時特別注意洗刷瓶角部位。
(三)、浸泡
器皿要充滿清潔液,勿留氣泡。浸泡時間不應(yīng)少于6小時;一般應(yīng)浸泡過夜。
清洗液配方:
【強液】 重鉻酸鉀 63g
濃硫酸 1000ml
蒸餾水 200L
【次強液】 重鉻酸鉀 120g
濃硫酸 200ml
蒸餾水 1000ml
【弱液】 重鉻酸鉀 100g
濃硫酸 100ml
蒸餾水 100ml
矽酸鈉洗液;
使用比較安全,可以代替清洗液,但價格較貴。
先配制成100Χ貯存液:矽酸鉀80g,偏磷酸鈉9g,加熱溶解在1000ml蒸餾水中。使用時,用蒸餾水100倍稀釋。
(四)、沖洗
刷洗和浸酸后都必須用水充分沖洗,使之不留任何殘跡。沖洗宜用洗滌裝置,以保證沖洗效果,如用手工操作,每瓶都得用水灌滿,倒掉,重復(fù)十次以上,最后再用蒸餾水漂洗2~3次,涼干備用。
二、膠塞的清洗
新購置的膠塞先用自來水沖洗干凈后,再做常規(guī)處理。
常規(guī)洗滌方法:
浸泡
↓
2%NaOH煮沸(10~20分鐘)
↓
自來水沖洗
↓
1%稀鹽酸浸泡(30分鐘)
↓
自來水沖洗
↓
蒸餾水清洗(2~3次)
↓
涼干備用
三、塑料器皿的清洗
目前我國培養(yǎng)使用的塑料器皿主要是從國外購置的,是一種無毒并已經(jīng)消毒過滅菌密封包裝的商品。用時,只要打開包裝即可,是一次使用性物品。必要時,用后經(jīng)無菌處理后 ,尚可反復(fù)使用2~3次,但不宜過多。再用時仍然需要清洗和滅菌處理。塑料器皿質(zhì)地軟,不宜用毛刷刷洗,造成清洗困難。為此使用中一是防止劃痕,二是用后要立即浸入水中,嚴防附著物干結(jié);如殘留有附著物,可用脫脂棉清拭掉,用流水沖洗干凈,涼干、再用2%NaOH液浸泡過夜,用自來水充分沖洗,然后 用5%鹽酸溶液浸泡30分鐘,最后用自來水沖洗和蒸餾水漂洗干凈,涼干后備用。
消 毒
一、紫外線消毒
紫外線直接照射法很方便,效果好,是目前各實驗室常用的消毒法。
【適用范圍】空氣、操作臺表面和一些不能使用其它方法進行消毒的培養(yǎng)器皿(如塑料培養(yǎng)皿、培養(yǎng)板等)
【要求】(1)培養(yǎng)室的紫外線燈應(yīng)距地面2.5米,使每平方厘米有0.06微瓦能量的照射,才能發(fā)生有效的消毒作用。(2)由于各種細菌對紫外線的敏感性不同,所用照射時間和劑量也不同。
【缺點】(1)產(chǎn)生臭氧,污染空氣,對身體有害;(2)射線照射不到的部位起不到消毒作用,故消毒時,物品不宜相互遮擋。
【注意】 有人習(xí)慣于邊照射邊進行實驗操作,這樣不好,一是紫外線對細胞、試劑和培養(yǎng)液都有不良影響,二是對人體皮膚也有傷害。
二、濕熱消毒
濕熱消毒即高壓蒸汽消毒,是最有效的一種方法。
【適用范圍】布類、膠塞、金屬器械、玻璃器皿及某些培養(yǎng)用液。
【要求】
培養(yǎng)用液、橡膠制品 10磅10分鐘
布類、玻璃制品、金屬器械等 15磅20分鐘
三、濾過消毒
【適用范圍】 大多數(shù)培養(yǎng)用液,如人工合成培養(yǎng)液、血清、酶溶液等(這些在高溫下會發(fā)生變性,失去其功能,必須采用濾過法除菌。
【常用濾器】 Zeiss濾器、微孔濾膜濾器及各種不同規(guī)格的一次性濾器。常用孔徑0.22um濾膜過濾一般用液即可。
【注意】
(1)濾膜用后丟棄,濾器清洗也比較方便,先用毛刷蘸洗滌劑刷洗干凈,用自來水沖洗后,再用蒸餾水沖洗,涼干即可;
(2)用前再裝上一張新的濾膜;
(3)消毒時旋鈕不要扭太緊,凡與空氣接觸部位都用紙包裝好,以保證消毒時的效果;
(4)消毒后,在無菌環(huán)境中立即將旋鈕扭緊;
(5)濾過少量液體時,用一種能安裝在注射器上的小濾器,使用相同的濾膜,濾過時把濾過物裝入注射器針管內(nèi),壓出過濾物注入無菌容器中即。