（一）原理
在pH8.6的瓊脂凝膠中，抗體球蛋白只帶有微弱的負(fù)電荷，在電泳時(shí)，由于電滲作用的影響，抗體球蛋白不但不能抵抗電滲作用向正極移動(dòng)，反而向負(fù)極倒退。而一般抗原蛋白質(zhì)帶負(fù)電荷，將抗原置于負(fù)極，將血清抗體置于正極，電泳后則在兩孔之間相遇，并在比例適當(dāng)?shù)牟课恍纬扇庋劭梢姷某恋砭�。
本法由于抗原抗體分子在電場(chǎng)作用下定向運(yùn)動(dòng)，限制了自由擴(kuò)散，增加了相應(yīng)作用的抗原抗體的濃度，從而提高了敏感性，它較瓊脂擴(kuò)散敏感性高10～16倍。本法快速、操作簡(jiǎn)單。
（二）試劑
同免疫電泳。
（三）操作方法
1．制瓊脂板 以pH8.6離子強(qiáng)度0.05巴比妥緩沖液配成1%～1.5％瓊脂凝膠板，厚度2mm～3mm。
2．打孔 瓊脂冷卻后，按圖打孔，打成對(duì)的小孔數(shù)列，孔徑0.3cm～0.6cm，孔距0.4cm～1.0cm。挑去孔內(nèi)瓊脂，封底。
3．加樣 一對(duì)孔中，一孔加已知（或待測(cè)）抗原，另一孔加待測(cè)（或已知）抗體。
4．電泳 將抗原孔置于負(fù)極端。電壓2.5V／cm～6V／cm，或電流強(qiáng)度3mA/cm～5mA/cm，電泳時(shí)間30min～90min。
（四）觀察結(jié)果
斷電后，將玻板置于燈光下，襯以黑色背景觀察。陽(yáng)性者則在抗原抗體孔之間形成一條清楚致密的白色沉淀線。如沉淀線不清晰，可把瓊脂板放在濕盒中37℃數(shù)小時(shí)或置電泳槽過夜再觀察。
（五）注意事項(xiàng)
1．抗原抗體濃度的比例 當(dāng)抗原抗體比例不適合時(shí)，均不能出現(xiàn)明顯可見的沉淀線。所以除了應(yīng)用高效價(jià)的血清外，每份待測(cè)樣品均可做幾個(gè)不同的稀釋度來進(jìn)行檢查。
2．特異性對(duì)照鑒定 為了排除假陽(yáng)性反應(yīng)，則在待檢抗原孔的鄰近并列一陽(yáng)性抗原孔，若待檢樣品中的抗原與抗體所形成的沉淀線和陽(yáng)性抗原抗體沉淀線完全融合時(shí)，則待檢樣品中所含的抗原為特異性抗原。
3．適當(dāng)?shù)碾姖B作用在對(duì)流免疫電泳中是必要的。當(dāng)瓊脂質(zhì)量差時(shí)，電滲作用太大，而使血清中的其它蛋白成分也泳向負(fù)極，造成非特異性反應(yīng)。在某些情況，瓊脂糖由于缺乏電滲作用而不能用于對(duì)流免疫電泳。
4．當(dāng)抗原抗體在同一介質(zhì)中帶同樣電荷或遷徙相近時(shí)，則電泳時(shí)兩者向著一個(gè)方向泳動(dòng)。故不能用對(duì)流免疫電泳來檢查。