愈傷組織和試管苗的培養(yǎng)
愈傷組織的培養(yǎng) 一般來說,從接種外植體到出現(xiàn)愈傷組織,需要經(jīng)過2周時間。2周之內(nèi)就可以看到外植體上逐漸長出乳白色或黃白色的瘤狀愈傷組織。首次培養(yǎng)愈傷組織時,恒溫箱的門應(yīng)該關(guān)閉,不必見光,因為在無光條件下愈傷組織長得更快。2周以后,由于培養(yǎng)基中的營養(yǎng)成分已接近耗盡,必須更換培養(yǎng)基,進行繼代培養(yǎng)。
愈傷組織的繼代培養(yǎng) 進行繼代培養(yǎng)所用的培養(yǎng)基,和培養(yǎng)愈傷組織所用的培養(yǎng)基相同。在嚴格的無菌條件下(接種箱內(nèi))將愈傷組織連同原來的外植體,一起移到新的培養(yǎng)基上。愈傷組織的繼代培養(yǎng),一代為20 d。如果延長培養(yǎng)時間,培養(yǎng)基中的營養(yǎng)物質(zhì)會減少,外植體也會分泌一些有毒物質(zhì),造成自身中毒。20 d以后,可以根據(jù)愈傷組織的大小,決定是繼續(xù)進行繼代培養(yǎng),還是進行試管苗培養(yǎng)。如果愈傷組織長到直徑為1~1?5 cm時,就可以進行試管苗培養(yǎng),否則還需要進行第二次繼代培養(yǎng)。
在愈傷組織進行繼代培養(yǎng)期間,可以將恒溫箱的門打開,讓愈傷組織見光。愈傷組織見光后,顏色可以轉(zhuǎn)為綠色。
試管苗的培養(yǎng) 當愈傷組織長到一定大小后,可以更換培養(yǎng)基,進行試管苗的培養(yǎng)。試管苗的培養(yǎng)分為生芽培養(yǎng)和生根培養(yǎng)。要想培育出一株完整的試管幼苗,必須先進行生芽培養(yǎng),然后進行生根培養(yǎng)。如果順序顛倒,先誘導生根,就不好誘導生芽了。生芽大約需要4~6周的時間,而生根培養(yǎng)時,1周以后就可以見到幼根了。注意,試管苗應(yīng)該進行見光培養(yǎng)。
下面列出繼代培養(yǎng)和試管苗培養(yǎng)的培養(yǎng)基配方。①繼代培養(yǎng)和生芽培養(yǎng)的培養(yǎng)基配方是:MS培養(yǎng)基 6BA(質(zhì)量濃度為0.5~1.0 mg/L) NAA(質(zhì)量濃度為0.1~0.15 mg/L)。即在1 L MS培養(yǎng)基中加入5~10 mL6BA和1~1.5 mL的NAA母液。NAA配合6BA,可以促進不定芽的生長。②生根培養(yǎng)的培養(yǎng)基配方是:MS培養(yǎng)基 NAA(質(zhì)量濃度為0.1~0.5 mg/L)。即在1 L MS培養(yǎng)基中加入1~5 mL的NAA母液。NAA起促進生根的作用。