一、微量全血培養
(一)原理
人體外周血中淋巴細胞是成熟的免疫細胞，正常情況下處于G。期不再增殖。PHA(Phytohemagglutinin，植物血凝素)是人和其它動物淋巴細胞的有絲分裂刺激劑，它能使處于G0期的淋巴細胞轉化為淋巴母細胞，進入細胞周期開始旺盛的有絲分裂。
人體微量全血培養是一種簡單的淋巴細胞培養方法。此法采血量少、操作簡便，在 PHA作用下進行短期培養即可獲豐富的、有絲分裂活躍的淋巴母細胞，適于制備核型標本。各種因素的效應(如病毒、電離輻射、化學藥劑等)也可在淋巴細胞的培養條件下進行觀察，從而進行多種在體內無法進行的研究。因此它是細胞生物學及其它學科研究中的一種有效的方法。
(二)操作
1．打開超凈臺紫外燈20～30分鐘。洗手、換潔凈白大衣后進入操作室。啟動超凈臺，點燃煤氣燈。用75％酒精棉球擦洗手、各種試劑瓶及操作臺面，然后將培養液及肝素、秋水仙素、PHA等所需溶液移入超凈臺。
2．在超凈臺內將每個培養瓶裝入5ml培養液及0.2ml PHA溶液，封好備用。
3．用5ml注射器，7號針頭，先吸取少許肝素濕潤針筒，然后從肘靜脈抽血l～2ml。
每個培養瓶接種全血O．2ml左右輕輕搖動使血和培養液混勻。
4．在培養瓶上標記好供血者姓名、性別、采血日期等，放入培養箱中37℃培養。每天輕輕震蕩培養瓶二、三次，防止血球沉積并保證血細胞與培養液充分接觸，促進細胞生長繁殖。
二、人淋巴細胞染色體標本制備
(一)原理
在淋巴母細胞分裂高峰時加入秋水仙素，破壞細胞紡錘體的形成，使細胞停止在分裂中期。然后收集細胞，低滲處理，使細胞脹大，染色體伸展。接著進行固定并除去中期分裂相中殘存的蛋白質，使染色體清晰且分散良好。再結合離心技術去掉紅細胞碎片，然后采用空氣干燥法制片獲得中期染色體標本。
(二)操作
1．微量全血細胞培養至68小時左右，用1ml注射器 號針頭向每個5ml培養瓶內加2滴秋水仙素溶液，搖勻后繼續培養3小時，此項操作不需要嚴格無菌。
2．按時終止培養，用吸管溫和吹打成細胞懸液后，移至10ml離心管中。用天平平衡后以1000rpm離心8分鐘，棄大部上清，剩0.5ml。再吹打成細胞懸液，加入預熱37℃的 0.075mol／L的KCL溶液9ml，置37℃水浴中低滲處理30分鐘(這期間配制3:1甲醇一冰醋酸固定液)。
3.向離心管中加入1ml固定液預固定。平衡后以1000rpm離心8分鐘，同樣剩 0.5ml上清。
4．輕輕將細胞吹成懸液，加5~6ml固定液，室溫下固定30分鐘。然后離心，棄上清，重復固定一次。再離心，留0.1～0.2ml上清，吹打成細胞懸液。
5．吸取1～2滴懸液，在距載片約15cm高度滴于預冷的干凈載玻片上，迅速對準細胞吹氣促進染色體分散。斜放載玻片，在空氣中晾干(此期間配制Giemsa染液，Giemsa原液和磷酸緩沖液1:10)。
6．將標本面朝下放在染色槽中，加入染液染10分鐘，自來水沖洗，晾干后觀察。
(三)結果
低倍鏡下，制片質量較好的標本上可看到有較多的分裂相，染色體之間分散良好，互不重疊。
油鏡下觀察可見每一條染色體都含有兩條染色單體，兩條單體由著絲粒相結。分區計數染色體數目并判定性別，或拍照后進行核型分析。
三、腫瘤細胞的染色體標本制備
(一)原理
利用腫瘤細胞無限繁殖的特點，掌握其體外生長動態，取處于對數生長期的細胞便可獲得豐富的分裂相。腫瘤細胞染色體異常包括兩個方面：
1．結構異常 即在腫瘤細胞常出現的染色體畸變，包括雙著絲點染色體、環狀染色體、斷裂的染色體、染色體裂隙及微小體等。
2．數目異常 由于腫瘤細胞分裂失去應有的調控，可出現亞二倍體、超二倍體和多一
倍體數目異�，F象。
腫瘤細胞染色體制備技術在細胞生物學、醫學遺傳學的基礎研究和臨床診斷、愈后觀察等方面均有廣泛用途。
(二)操作
l．以1.6× 105個／ml細胞濃度將FL—60細胞接種于培養瓶內，48小時后以終濃度為0.04μg／ml的秋水仙素處理2.5小時，移入10ml離心管。其余步驟與淋巴細胞染色體制備相同。
2.將長成單層的HeLa細胞按1:2傳代進行培養，36小時后用終濃度為0.04μg／ml的秋水仙素處理3小時。按時終止培養，用0.25％胰蛋白酶一0.02％EDTA混合消化液處理單層細胞，待細胞收縮變圓時，棄去消化液。加入少許低滲液將細胞從瓶壁洗脫，移入10ml離心管，加入預熱37℃的低滲液至5 ~ 6ml，在37℃處理25分鐘。以下步驟同淋巴細胞染色體核型制備。
(三)結果
計數HeLa細胞和HL—60細胞的染色體數并尋找是否有畸變的染色體。
附：人體染色體常規核型的分析
一、人體染色體的觀察
取制備較好的染色體玻片標本，先在低倍鏡下觀察。在標本中選擇一個染色體之間分散較好，互不重疊的中期分裂相，置于視野中央，然后換油鏡仔細觀察。每個染色體都含有兩條染色單體，兩單體連接處為著絲粒。計數時要把分散的染色體劃分為幾個區域以免計數重復或遺漏，然后計數并判定性別。
二、核型分析的方法
人體染色體常規核型的分析，在今天的染色體研究水平上作為染色體結構異常的疾病診斷已經失去意義，但對染色體數目異常仍具有診斷上的價值，尤其是起著分析其它幾種顯帶核型的橋梁作用。通過常規核型的分析必須掌握三點：(一)會分組、(二)了解各組染色體的基本形態特征、(三)會計數數目和鑒定性別。
人體染色體的常規核型即按照Denver會議(1960年)提出的染色體命名和分類標準，將人類體細胞的46條染色體按大小、著絲點的位置分成七組(A、B、C、D、E、F、G、)23對的排列。
七組染色體的基本形態特征及分析順序是：
A組是七組染色體中最大的一組，首先找出它。A組包括三對，即第1~3號6條染色體，第1號為最大、是中央著絲點，長臂近側有次縊痕；第2號第二大、著絲點略偏離中央；第3號為三大，是中央著絲點。
接著確定B組：B組二對即第4～5號4條染色體，較大，均為亞中著絲點，兩者不易區分開。
第三確定D組和G組：D組三對即第13～15號6條染色體，中等大小均為近端著絲點，短臂末端有隨體。G組二對即第21～22號4條染色體，是最小的一組，均為近端著絲點，短臂末端有隨體，長臂常呈分叉狀，21號稍小于22號。Y染色體被隸屬于該組，短臂無隨體，一般較2l、22號大點。
第四確定F組：F組二對即第19～20號4條染色體，染色體比G組稍大、均為中央著絲點。
第五確定E組：E組三對即第16～18號6條染色體，較小，第16號是中央著絲點，17、18號是亞中著絲點。
余者為C組：C組七對即第6～12號14條染色體，按大小順序依次排列，均是亞中著絲點；X染色體被隸屬該組，大小居6～7號之間，是亞中著絲點。
上述人的常規核型中，1～22號為常染色體，男女共有，另一對為性染色體，決定性別，男性為XY，女性為XX，人的正常核型寫法：男46，XY；女46，XX。