四氮唑亦叫2,3,5——三苯基氯化四氮唑(簡稱T·T·C,為白色或淡黃色的有毒粉末)。四氮唑測定水稻發芽率的原理是:滲入種子的四氮唑在胚組織脫氫酶的作用下,被還原成紅色穩定不擴散的2,3,5——三苯基甲 ,而死種子沒有這種反應,以此區別種子有無活力。
配制試劑溶液:用蒸餾水把試劑配成0.25-0.5%的溶液,將溶液儲存在黑暗條件下或棕色瓶中。
去除水稻穎殼:將水稻樣品放入出糙機中進行出糙,出糙后清除稻粒中的穎殼,然后隨機取出種子試樣2份,每份100粒。
巧切米粒種胚:用左拇指、食指捏緊米粒,露出胚部,右手拇、食、中指捏緊單面刀片,沿著米粒種胚輕輕斜削,即可將米粒種胚剖開。
放入試液浸種:將胚切好后的米粒放入培養皿中,倒入配制的四氮唑溶液,液面以剛好淹沒米粒為佳,避光,放到30℃的溫度下浸漬15分鐘。
測算發芽率:凡種胚染成紅色的種子為有生活力的種子,芽鞘、根鞘、胚根尖端、盾片上、下端不染色,其余部分染色的也是有生活力的種子。種胚全部不染色或染成淺紅色或盾片中部、胚根、胚軸、胚芽等其中之一不染色的為無生活力的種子,然后根據鑒別的結果算出生活力的百分率。生活力的百分率要高于自然發芽率的百分率的8-10%,也就是說,在一般情況下生活力的百分率減去8-10個百分點,即為田間自然發芽率的百分率。
用四氮唑測定水稻發芽率具有經濟、省力、快速、準確的特點。但須注意,四氮唑具有較強的感光性,有毒,因此必須避光保存,處理后的種子不能作飼料,試驗完畢后應洗手。