1 材料和方法
1.1 供試材料
采用當家品種下寨65和青薯168.
1.2 試驗方法
1.2.1 催芽 于11月中旬左右,挑揀表皮光滑、正常薯形、大小均勻、無病害和無損傷薯塊,放置在有供暖的房間,室內溫度24 ℃左右進行催芽。在催芽前薯塊正處于休眠期,采用0.05~0.l0 mg/L的GA3來處理薯塊,浸沒于GA3溶液中10~20 min,以打破休眠[4].
1.2.2 種薯處理 采用MS培養基,加入不同配比的激素,準備BA、NAA、GA3、IBA和IAA,由于激素在培養基中用量非常少,且不易溶于水,所以采用特殊的配置方法,配置成500 mg/L的溶液待用。當兩個品種的種薯芽長到2~3 cm時,挑選生長健壯的芽,用清水沖洗芽部表面污物,在無菌操作室采用12種不同的方法進行表面消毒,用最近制作的蒸餾水沖洗四五次,將表面消毒劑徹底清除,不同表面消毒劑處理時間見表1.
1.2.3 莖尖組織培養 在解剖鏡下剝取大小為0.30~
0.50 mm莖尖生長點,置于不同濃度生長調節劑的MS培養基上進行培養,培養基編號為MS1~MS12,另設不加任何生長調節劑的MS培養基作為對照(CK),植物生長調節劑配比見表2.
1.2.4 馬鈴薯脫毒苗培養 在無菌條件下,將得到的無毒苗進行切段,每段帶一葉,置于不同種類、濃度的1/2MS培養基中進行培養,中國農業網以不加任何生長調節劑的1/2MS培養基作為對照,編號為M1~M9,快繁培養基配比見表3.
2 結果與分析
2.1 不同表面消毒方法對莖尖成活率和污染的影響
從表4可以看出,在莖尖組織培養過程中,外植體在清水沖洗后,直接采用0.1 %升汞或5 %次氯酸鈉消毒,都可以將污染控制在5 %以下,但需時稍長,不同程度地影響到成活率。另外由于升汞的滲透性強,不宜徹底清洗,且對環境污染嚴重,建議盡量不要使用。
2.2 不同生長調節劑培養基配比對莖尖組織生長的影響
從表5可以看出,不含生物調節劑的培養基,馬鈴薯莖尖組織的生長非常緩慢,導致成苗率低下。在同等條件下,KT和6-BA對馬鈴薯莖尖組織的生長都具有促進作用,且效果顯著,就這兩種物質而言,含有KT的培養基中成苗率較低。在同等條件下加入GA3,可明顯促進馬鈴薯莖尖組織分化,加快生長,提高成苗率。
2.3 不同生長調節劑配比對馬鈴薯脫毒苗快繁的影響
經過觀測表明,與對照培養基相比較,培養基中加入生長調節劑后,芽萌發推遲,有效促進幼根生長。生長調節劑濃度過大時,愈傷組織發達,生根受到抑制。在實驗中觀察到下寨65對NAA較為敏感,濃度稍大就會產生較大愈傷組織,生根較為緩慢,而青薯168反應較為遲鈍,結果見表6.
3 結論
通過實驗發現,在馬鈴薯脫毒技術實施過程中,采用酒精與其他兩種表面消毒劑配合使用效果最好,能有效控制污染,降低對莖尖組織的影響。剝離的莖尖組織誘導成苗是脫毒快繁的關鍵技術,在實驗中,KT和BA均有助于莖尖組織分化成苗。在快繁中,適當濃度的生物調節劑對馬鈴薯莖段生根有促進作用,但當濃度過高時只產生分生組織,不利于小苗生根,而且各品種表現有所不同。