一、母種培養:培養母種是指用組織分離或孢子分離得到的菌種。母種培養基的制備通常用土豆洋菜培養基。配制1000毫升培養基,用土豆200克,瓊脂(洋菜)18-20克,葡萄糖20克。
做法:先將土豆洗凈去皮,切成蠶豆粒小塊,放1000毫升水中煮沸30分鐘,用6-8層沙布過濾,補足損失水分。將瓊脂加入溶化后,加進溶解的糖,補充水分至1000毫升。以后分裝試管,每管裝量1/5-1/4,并加棉塞、包紙。在1.2公斤壓力下滅菌30分鐘, 趁熱擺成斜面。冷卻后置于25-27℃條件下觀察無雜菌即可接種。一支母種可轉管25-30支。 在無菌操作下接種的試管置于25℃左右恒溫條件下培養,半個月左右菌絲可長滿試管。培養過程中應注意除掉雜菌污染的試管。培養好的母種移入冰箱,在4℃條件下保存半年,或室溫下保存三個月。
二、原種培養:原種培養原料可用木屑(鋸末)或棉籽皮。木屑培養基配方:木屑78%,麥麩或米糠20%,糖1%,石膏1%(生、熟石膏均可,但要磨成粉方可應用)。棉籽皮培養基配方:用100 斤棉籽皮加土豆浸出汁水3%,(3 斤土豆切成泥煮沸 30分鐘的濾液),糖0.1%,硫酸鎂0.1%(按水量的千分之一)。
做法:培養料加水拌合均勻,培養料的濕度以用手緊握料,指縫內見水珠,而滴不下來為宜,一般料水比 1:1.2-1.3(即100斤料加水120-130斤)。然后裝瓶,裝瓶方法是邊裝邊將瓶輕輕地抖動,使瓶上下部緊密適中,裝至瓶肩部將料壓平,洗凈瓶口內外的培養料,加棉塞包紙捆好放進高壓消毒鍋內進行滅菌,在1.5 公斤壓力下滅菌一小時。冷卻后,在無菌操作條件下接種。將試管種母種接入瓶中,一支母種可接4-5瓶原種, 接種后置于25℃恒溫條件下培養一個月左右菌絲可長滿瓶,即為原種。
三、栽培種培養:栽培種的制備實際上就是原種進行一次擴大繁殖。栽培種木屑培養基的配方同原種培養的配方。棉籽皮培養基的配方也同原種培養的配方。裝瓶后滅菌,在無菌條件下,把原種菌種接入栽培種瓶內。一瓶750毫升原種可接80-100瓶栽培后。接種后置于25℃恒溫條件下培育一個月左右,長滿瓶后即可播種。在培養原種和栽培種時,接種后每隔2-3天要檢查一次, 直至菌絲長滿料面后每周檢查一次。揀出有雜菌污染的菌種,并遠離培養室處理掉。