今年臺風“蘇羅迪”后，福建長樂對蝦發光病嚴重，筆者針對發光死蝦主要采用了病原分離、人工感染等方法，對熒光菌感染途徑進行探究，并提出了初步的防治方法。

 

    對蝦發光病是一種在對蝦養殖中常見的細菌性疾病，它具有發病快、傳播廣、感染力強、致死率高、防治困難等特點，是對蝦養成期間危害較大的流行病之一。我國對蝦發光病主要發生于福建、廣東、廣西等沿海地區，主要危害凡納濱對蝦 (Penaeus vannamei) 和斑節對蝦 (Penaeus monodon)。目前的研究表明，引起對蝦發光病的病原有霍亂弧菌(V．cholerae) 、燦爛弧菌(V．splendidus) 、火神弧菌(V．logei) 、哈維氏弧菌(V．harveyi) 和費氏弧菌(V．fischeri) 5 種，但其主要病因是哈維氏弧菌感染。

 

    今年臺風“蘇羅迪”后，福建長樂對蝦發光病嚴重，筆者針對發光死蝦主要采用了病原分離、人工感染等方法，對熒光菌感染途徑進行探究，并提出了初步的防治方法。

 

一、研究方法

 

1、細菌分離

 

    將采自福建長樂某養殖場已經死亡的發光病蝦，體表用75%乙醇消毒后，用無菌解剖刀在超凈工作臺上切開病蝦腹肌肉，用TSA和TCBS固體培養基對肌肉進行細菌劃線分離，30℃培養24h后觀察菌落生長情況。

 

    挑取TSA和TCBS培養基上的典型菌落，再次劃線純化后分別接種于含2% NaCl的TSB中，30℃振蕩培養10h，OD560測定細菌濃度，然后分別拌料投喂，每克飼料含細菌數量為106cfu，每組40尾，對照組直接投喂，將南美白對蝦放在藍色玻璃桶（0.3m3）中飼養。

 

2、人工感染

 

    將取自長樂某養殖場的健康對蝦(體長6-8cm)飼養于藍色玻璃鋼桶（0.3m3），養殖用水為沙濾水，鹽度30‰，水溫22-24℃，暫養4d，每組30尾蝦。

 

    （1） 投喂感染：將試驗菌株的菌懸液（108cfu/mL）拌料制成試驗對蝦做餌料,濃度分別為102cfu/g、104cfu/g、106cfu/g，飼養、觀察5天，記錄對蝦死亡情況及發病癥狀，并及時移去死蝦。

 

    （2）創傷浸泡感染：將經活化的新鮮試驗菌懸液 (108cfu/mL) 加入試驗用藍色玻璃鋼桶內，充氣攪拌使海水分別為102cfu/mL、104cfu/mL、106cfu/mL，然后用針頭在健康試驗對蝦腹肌上刺扎，造成創傷后放入帶菌的海水中。

 

    （3）普通浸泡感染：方法同（2），不同的是不用將試驗蝦刺扎，直接將其放入帶菌海水中。

 

 

嚴重感染（感染后第2、3天）：游動緩慢、有明顯的胃炎、肝胰腺萎縮、體色明顯發紅

 

二、結果

 

1、分離與回歸感染

 

    從發病蝦苗體內分離純化到3株優勢菌A－1、A－2、A－3在TCBS培養基上顏色分別為綠色、 黃色、 黑色，在暗室只有A－1菌株發淡綠色熒光。經回歸感染試驗證實，A－1能引起南美白對蝦死亡且死蝦發光，其癥狀與自然發病成蝦的癥狀相同，而其他優勢菌均不能使死蝦發光，因此證實該菌為對蝦發光的致病菌之一。

 

2、人工感染

 

    （1）投喂感染：拌料投喂感染的實驗結果見表1。結果表明：對照組實驗期間沒有發生死亡；102cfu/g組在第3天對蝦開始死亡，實驗結束時，共死亡22尾，占73.3%；104cfu/g組在第2天開始死亡，實驗結束時，共死亡29尾，占96.7%；而106cfu/g在第2天出現死亡，在第4天已全部死亡。由此可見，飼料中熒光菌數量與對蝦死亡速度呈正相關。

    （2）創傷浸浴感染：創傷浸浴感染的實驗結果見表2。結果表明：對照組沒有發生死亡；102cfu/mL組在第4天開始死亡，實驗結束時，共死亡20尾，占66.7%；104cfu/mL在第3天開始死亡，實驗結束時，共死亡25尾，占83.3%；106cfu/mL組在第2天開始死亡，實驗結束時，全部死亡。由此可見，水體中的熒光菌數量與對蝦死亡速度呈正相關。

    （3）普通浸浴感染：普通浸浴感染的實驗結果見表3。結果表明：對照組、102cfu/mL組、104cfu/mL組均沒有發現死亡；106cfu/mL組在第4天開始死亡，實驗結束時，共死亡2條，占6.7%。由此可見，健康對蝦在含熒光菌的海水中不易被感染。

三、討論

 

    投喂感染的實驗結果表明，即使飼料中含有少量的發光細菌，仍然可以在較短的時間里，使對蝦大量死亡，這說明攝食感染是熒光菌感染健康對蝦最主要的感染方式。

 

    對蝦的捕捉搬運、受驚嚇以及頻繁活動，都有可能造成蝦體創傷，發光菌侵入蝦體后，利用機體組織作為營養物質進行大量繁殖，并在熒光素酶的作用下使還原型熒光素氧化成氧化型熒光素，同時放出熒光，因而我們可見對蝦局部組織發白發光。大量繁殖的發光菌隨著蝦體的循環系統逐漸侵入到蝦體全身器官，遍布全身就使得蝦體全身死亡并發光。創傷感染的實驗結果表明，當水體中的熒光菌含量在102cfu/mL，仍然會有超過60%的蝦發病死亡，這說明創傷感染也是熒光菌感染健康對蝦的一種重要途徑。

 

    本研究中普通浸浴感染的實驗結果表明，當熒光菌濃度濃度達到106cfu/mL，會導致少量對蝦死亡，而當濃度低于104cfu/mL時，不會引起對蝦死亡，在高位池中熒光菌數量一般不會超過102cfu/mL，所以說健康對蝦在含有熒光菌的蝦池較難感染發病，這說明普通浸浴感染不是引起對蝦發光的主要途徑。

 

    因此，防治南美白對蝦成蝦發光病需從切斷攝食感染和創傷浸浴感染途徑著手。

 

    在高位池中，可先進行消毒，后加芽孢桿菌、光合細菌，同時投喂優質飼料的方法來切斷這兩種主要的感染途徑。消毒的作用是殺死病蝦、弱蝦、蝦創傷部位的細菌和養殖環境中細菌，減少病原體的來源；消毒后及時撈起死蝦，避免攝食感染；加芽孢桿菌、光合細菌的作用是消毒導致養殖環境中細菌大量死亡，養殖水體的菌相處于“真空”狀態，添加有益細菌，能夠迅速占據有害細菌的生態位，使有害菌處于被抑制的狀態；投喂優質飼料的目的是提高養殖對蝦的健康程度，尤其是提高對蝦的免疫力，有效降低感染的概率。

 

作者：福建大北農水產科技有限公司  黎東