已解決
奶粉/牛奶中的三聚氰胺LC-MS/MS分析
三聚氰胺（melamine，如圖1所示）是作為塑料、涂料等行業的改性劑。一些違法企業為提高產品的蛋白質含量將其作為偽蛋白質非法添加到食品或飼料等產品中。2006年美國FDA有報道，其作為寵物食品的偽蛋白質使用，使寵物死亡或生病；并且因為其容易和人體內氰脲酸反應生成晶體狀聚合物（如圖2所示），而引起結石等病狀，嚴重影響人類健康。
圖1 三聚氰胺結構式
圖2 三聚氰胺與氰脲酸結合示意圖
標準品配制
取50mg三聚氰胺標準品，以20%甲醇溶解，定容至50mL，得到1000ppm的標準溶液。使用時以提取液稀釋至所需的濃度。
樣品前處理
1．直接提取法：
稱取奶粉樣品5g (或牛奶10mL)，加入24mL乙腈/水溶液（50︰50，V/V）和1mL 1.0mol/L 鹽酸，劇烈振搖30s，在漩渦振蕩器上渦旋 1min，5℃ 4000 r/min離心 5min；取上層清液過0.45μm濾膜上機測定。
2．SPE凈化法
Bond Elut Plexa PCX
(200mg, 6mL, P/N.12108206 )
活化
5mL甲醇，5mL水
上樣
上述上清液，重力自流上樣
液相色譜分析條件
VARIAN 212 HPLC 儀器
色譜柱： Pursuit C8 4.6 mm×50mm×5μm（P/N:A3030030×046）
流動相：
時間(min) 25mmol/L乙酸銨+25mmol/L乙酸水溶
液/乙腈
0 90% 10%
2.5 5% 95%
4.5 5% 95%
5 90% 10%
7 90% 10%
流 速： 200μl/min
進樣量： 10μL
洗脫
5mL 5%氨化甲醇(v/v)洗脫（5mL氨水+95mL甲醇）
淋洗
5mL 0.1mol/L HCl，2mL甲醇，真空抽1min
50℃氮吹干燥20min，95:5乙腈:甲酸銨(20 mmol/L), 定容至1mL，渦旋10s或過0.45μm濾膜，進行測定
服務熱線：800 820 8266
Varian 食品安全應用
柱溫： 35℃
MS/MS條件
VARIAN 320-MS 串聯四極桿LC-MS/MS儀器
離子源： ESI+
Needle voltage： 3.6 kV
Shield voltage: 225 V
Dry gas： 22 psi@300℃
霧化氣： 55 psi
碰撞氣： 氬氣，1.8Torr
MRM 參數
母離子
子離子
碰撞能量（V）
67.9
21.5
126.9
84.9*
13.5
*為定量離子
結果與討論
按照以上色譜和質譜條件，建立二級質譜MRM檢測方法，并將三聚氰胺標準品添加到陰性牛奶中，建立1、5、10、50ppb和100ppb濃度范圍內校正曲線。三聚氰胺外加標離子色譜圖和標準曲線如圖3和圖4所示。
圖3 陰性牛奶樣品中加標1ppb三聚氰胺MRM離子流圖
圖4 三聚氰胺（1、5、10、50ppb和100ppb）濃度
范圍內校正曲線
結論
采用固相萃取-液相色譜-串聯質譜方法檢測牛奶中三聚氰胺，Bond Elut Plexa PCX萃取柱凈化效果良好，串聯質譜MRM方法可以大大提高檢測方法的準確度，該方法可靠性好，靈敏度高，完全能搞滿足對牛奶和奶制品中的三聚氰胺檢測要求。
三聚氰胺（melamine，如圖1所示）是作為塑料、涂料等行業的改性劑。一些違法企業為提高產品的蛋白質含量將其作為偽蛋白質非法添加到食品或飼料等產品中。2006年美國FDA有報道，其作為寵物食品的偽蛋白質使用，使寵物死亡或生病；并且因為其容易和人體內氰脲酸反應生成晶體狀聚合物（如圖2所示），而引起結石等病狀，嚴重影響人類健康。
圖1 三聚氰胺結構式
圖2 三聚氰胺與氰脲酸結合示意圖
標準品配制
取50mg三聚氰胺標準品，以20%甲醇溶解，定容至50mL，得到1000ppm的標準溶液。使用時以提取液稀釋至所需的濃度。
樣品前處理
1．直接提取法：
稱取奶粉樣品5g (或牛奶10mL)，加入24mL乙腈/水溶液（50︰50，V/V）和1mL 1.0mol/L 鹽酸，劇烈振搖30s，在漩渦振蕩器上渦旋 1min，5℃ 4000 r/min離心 5min；取上層清液過0.45μm濾膜上機測定。
2．SPE凈化法
Bond Elut Plexa PCX
(200mg, 6mL, P/N.12108206 )
活化
5mL甲醇，5mL水
上樣
上述上清液，重力自流上樣
液相色譜分析條件
VARIAN 212 HPLC 儀器
色譜柱： Pursuit C8 4.6 mm×50mm×5μm（P/N:A3030030×046）
流動相：
時間(min) 25mmol/L乙酸銨+25mmol/L乙酸水溶
液/乙腈
0 90% 10%
2.5 5% 95%
4.5 5% 95%
5 90% 10%
7 90% 10%
流 速： 200μl/min
進樣量： 10μL
洗脫
5mL 5%氨化甲醇(v/v)洗脫（5mL氨水+95mL甲醇）
淋洗
5mL 0.1mol/L HCl，2mL甲醇，真空抽1min
50℃氮吹干燥20min，95:5乙腈:甲酸銨(20 mmol/L), 定容至1mL，渦旋10s或過0.45μm濾膜，進行測定
服務熱線：800 820 8266
Varian 食品安全應用
柱溫： 35℃
MS/MS條件
VARIAN 320-MS 串聯四極桿LC-MS/MS儀器
離子源： ESI+
Needle voltage： 3.6 kV
Shield voltage: 225 V
Dry gas： 22 psi@300℃
霧化氣： 55 psi
碰撞氣： 氬氣，1.8Torr
MRM 參數
母離子
子離子
碰撞能量（V）
67.9
21.5
126.9
84.9*
13.5
*為定量離子
結果與討論
按照以上色譜和質譜條件，建立二級質譜MRM檢測方法，并將三聚氰胺標準品添加到陰性牛奶中，建立1、5、10、50ppb和100ppb濃度范圍內校正曲線。三聚氰胺外加標離子色譜圖和標準曲線如圖3和圖4所示。
圖3 陰性牛奶樣品中加標1ppb三聚氰胺MRM離子流圖
圖4 三聚氰胺（1、5、10、50ppb和100ppb）濃度
范圍內校正曲線
結論
采用固相萃取-液相色譜-串聯質譜方法檢測牛奶中三聚氰胺，Bond Elut Plexa PCX萃取柱凈化效果良好，串聯質譜MRM方法可以大大提高檢測方法的準確度，該方法可靠性好，靈敏度高，完全能搞滿足對牛奶和奶制品中的三聚氰胺檢測要求。