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一、 實驗室設施
開展無菌檢查及微生物限度檢查工作，首先要按照《藥品檢驗所實驗室質量管理規(guī)范》及《藥品生產質量管理規(guī)范》的要求，建立一個布局合理、使用方便、操作安全的無菌室，并且配有完善的實驗設施和管理制度。無菌檢查、微生物限度檢查以及接種室（接種對照菌、菌種傳代）均應嚴格分開，具有危險性的毒株、毒素如破傷風梭菌、黃曲霉毒素的實驗室需單獨使用，以便控制防止傳播。
（一） 潔凈實驗室
1.潔凈室的布局
1.1根據(jù)樣品檢驗要求，一般應至少包括更衣緩沖系統(tǒng)、微生物限度檢查室、無菌檢查室、陽性菌室和物流通道。
1.2更衣系統(tǒng)應至少包括一更（含更鞋）、二更（含洗手）、緩沖以及人流走廊等。
1.3物流通道應考慮凈污分流的布局，有條件的可設置污物走廊
2.潔凈室的設計要求
2.1凈化級別：潔凈走廊、檢查室、陽性菌室應為一萬級；其他房間應為十萬級
2.2氣流組織：陽性菌室對走廊呈負壓，走廊對緩沖有5Pa的正壓；陽性菌室全排風
2.3電氣控制：控制開關外置；設置通訊系統(tǒng)
3.結構與要求：
無菌潔凈室不宜設在底層，防潮、防霉、采光好，遠離交通干道，廁所及污染區(qū)，面積不超過10m2，高度不超過2.4m，由兩個緩沖間、操作間組成。操作間緩沖間之間應有樣品傳遞窗，出入操作間和緩沖間的門不應直對。無菌室內應六面光滑平整，無縫隙，不起灰，不落塵，耐腐蝕，易清洗，墻壁與地面、墻壁與天花板連接處應呈凹弧形，操作間不得安裝下水道。
無菌室內的照明燈應嵌裝在天花板內，采光面積要大，光照應分布均勻，光照度不低于300勒克斯。緩沖間和操作間應裝有紫外線殺菌燈（2－25w/m3）''用于空氣消毒。紫外線波長200－300nm者具有殺菌作用，其中以265－266nm殺菌作用最強，這與DNA的吸收光譜范圍一致，其殺菌機理可能是在細菌細胞DNA中引起胸腺嘧啶雙聚體形成，從而干擾細菌細胞DNA復制，導致細菌變異死亡。紫外線殺菌燈1m以內距離殺菌效果最佳，每次開燈照射時間為30min。應定期檢查紫外線燈輻射強度，不得低于70μW•cm-21m距離。其缺點是穿透力弱，一張紙板可以阻礙光的透過，不能穿透固體物，故只能用作表面消毒及一些不耐熱或化學消毒劑物品的消毒。
4.溫度、濕度
無菌室內溫度和相對濕度直接影響紫外殺菌燈的殺菌效果，故溫度最好控制在25±2℃，相對濕度40－60％。操作間或凈化工作臺的潔凈空氣應保持對環(huán)境形成正壓，不低于49Pa。
5.操作間
無菌室內應安裝空氣除菌過濾層流裝置及調溫裝置。潔凈度要求：凈化工作臺潔凈度為100級，無菌室應為10000級。
操作間應準備乙醇燈（或煤氣燈），火柴，2％碘酊棉球及75％乙醇棉球、試管架、大小橡皮乳頭、砂輪、記號筆、無菌剪刀、鑷子、注射器等。微生物限度檢查無菌室操作間內還應有電子稱（感覺為0.1g，最大稱量為300g為宜），電動勻漿儀等。
6.緩沖間
緩沖間內應有洗手盆，消毒液，無菌衣，帽，口罩，拖鞋等，緩沖間內不應放置培養(yǎng)箱和其他雜物。
（二）潔凈室的使用
1.在實驗開始之前1小時啟動風機系統(tǒng)（空調系統(tǒng)），并開啟空氣消毒裝置，消毒至少半小時后關閉
2.觀察并確保潔凈室的壓差
3.物品經物流通道進入潔凈室
4.人員正確著裝后經人流通道進入潔凈室
5.使用完畢，應用消毒液清潔工作臺面。實驗人員在更衣室換下無菌工作衣后出潔凈工作室。開啟空氣消毒裝置，消毒至少半小時后，關閉潔凈工作室的控制開關。
（三）潔凈室的清潔維護
1.潔凈室的清潔維護分為日常維護、定期維護和不符合時的維護。
2.日常維護由每次實驗的實驗人員進行，維護的范圍為進行實驗的潔凈工作室和輔助潔凈區(qū)，維護的頻率為每次實驗后。
3.定期維護由實驗室指定專人進行，維護的范圍為所有潔凈工作室，維護的頻率為每二周一次。
4.不符合時的維護由實驗人員進行，維護的范圍為所有不符合的潔凈室，維護的時機為出現(xiàn)不符合時
（四） 潔凈室的驗證
1.驗證的項目：潔凈度、微生物數(shù)、換氣次數(shù)、靜壓差、照度、溫度、相對濕度
2.驗證的技術要求
驗證項目 十萬級 一萬級 一百級
溫度（℃） 18-26 20-24 20-24
相對濕度（%） 45-65 45-60 45-60
換氣次數(shù)（次/h） 不小于15 不小于25 -
壓差（pa） 相對室外：10 有級差的潔凈室之間：5
照度（Lx） 主要工作室≥300 輔助工作室≥150
懸浮粒子數(shù)（粒/m3） ≥0.5um 3500000 350000 3500
≥5um 20000 2000 0
浮游菌數(shù)（個/ m3） 500 100 5
沉降菌（個/皿） 10 3 1
3.驗證的周期 建議每半年一次，也可根據(jù)潔凈室的使用頻率適當增加驗證次數(shù)。
4.驗證的方法 潔凈度和微生物數(shù)：采用GB/T16292~16294-1996，其他項目：參照JGJ71－90。
5.驗證不符合項的處理
5.1當潔凈度、微生物數(shù)、換氣次數(shù)、靜壓差等指標出現(xiàn)不符合時，應停用潔凈室，對凈化系統(tǒng)進行調整后，在重新驗證，直至符合規(guī)定才能重新啟用潔凈室。
5.2當溫度、相對濕度和照度等指標出現(xiàn)不符合時，潔凈室可不必停用，但應及時修復空調系統(tǒng)（或更換照明裝置），使其符合規(guī)定。
二、實驗室管理：
為保證實驗工作有序進行，實驗室必須制定一系列實驗室管理制度。
（一） 實驗室要求：
1實驗室環(huán)境應清潔、衛(wèi)生、安靜，實驗室內嚴禁吸煙和飲食。
2實驗人員必須穿戴工作衣帽，工作服經常洗滌、消毒、保持清潔。
3操作前后或離開實驗室必須用肥皂或消毒液洗手。
4發(fā)生菌液污染臺面或地面，應立即用3％甲醛或5％碳酸等消毒液由外向內傾覆其上，1小時后再擦拭，如為破傷風梭菌，則應隔夜后再擦洗。
5工作衣、帽、口罩受到菌液污染時，應立即脫下使污染部位包裹在內部，高壓滅菌后再清洗。
6如有傳染性培養(yǎng)物污染手部，應先用75％乙醇棉球擦拭，再浸入0.1%新潔爾滅消毒液內泡手，然后再用肥皂及清水徹底洗干凈。
7接種環(huán)（針），每次使用前后，必須通過火焰滅菌，冷卻后方可接種培養(yǎng)物，接種帶有蠟質、油質的培養(yǎng)物或菌苔殘留多時，不應立即在火焰上灼燒，應先在內焰里將油質培養(yǎng)物烘干后再移至火焰上滅菌，以免活菌外濺污染環(huán)境及感染操作者。
8帶菌的吸管應浸泡在5％甲酚消毒液內24h后取出清洗，帶菌的試管或培養(yǎng)物應在121℃高壓滅菌30分鐘后再取出清洗。
9在接種霉菌、放線菌時應在鋪有浸過消毒液的紗布上操作，防止孢子散落傳播。
10廢棄物的處理：
a) 必須消除生物危害后，才能處理，一般使用高壓蒸汽滅菌，也可以采用直接焚燒。
b) 污染性銳器（如一次性針頭）應滅菌后處理，注意避免銳器扎傷。
c) 污染性可重復使用的材料（如平皿）應滅菌后清洗，宜使用不易破碎的材料。
d) 工作服（含潔凈工作服）應定期清洗，懷疑污染的工作服應滅菌后清洗，潔凈工作服應滅菌后使用。
（二） 無菌操作要求：
無菌操作是指在無菌的環(huán)境條件下，使用無菌器材，防止微生物污染的操作技術。即保持待檢樣品在操作時不被污染，又要防止被檢的微生物及陽性對照菌在操作中污染環(huán)境或感染操作人員。從事無菌及微生物操作的工作人員必須經過無菌技術及基礎微生物學專業(yè)知識的學習及培訓才具備上崗操作的資格，微生物專業(yè)檢驗人員也不應該頻繁地變換工作崗位。
1.無菌室應每次使用前后用0.1%苯扎溴銨溶液或2％甲醛液擦拭工作臺面及可能污染的死角，濕拖地面，打開無菌空氣過濾器及超凈工作臺的開關30分鐘，紫外線殺菌燈照射1小時。
2.操作人員用肥皂洗手后進入緩沖間換拖鞋，用75％乙醇棉球擦手，穿戴工作衣帽、口罩。將所需物品剝去牛皮紙及外包裝，從傳遞窗移入操作間，再用0.1%苯扎溴銨溶液泡手后進入操作間，在乙醇（或煤氣燈）火焰區(qū)（火焰高度3－5cm）操作。
3供試品表面消毒，如為安瓿先用砂輪劃痕后用2％碘酒棉球擦拭，再用75％乙醇棉球擦拭、待干，也可以用消毒液浸泡消毒。
4操作者勿用嘴直接吸吹吸管，防止致病菌感染操作人員及口中的雜菌污染供試品。
5在無菌操作中切勿大幅度或快速動作、拖行，以免攪動空氣中塵埃微粒。
6注射器如需回抽時，應對著火焰吸入無菌空氣。
7所用的器材如培養(yǎng)基、稀釋劑配制后經濕熱滅菌121℃30分鐘，吸管培養(yǎng)皿等均應洗滌，干燥，包扎后經干熱滅菌160℃2小時才能使用。
三、消毒劑的質量控制
（一）消毒劑安全使用原則
1.正確選擇消毒劑的種類，盡可能選擇低毒、低殘留的消毒劑。
2.正確選擇使用濃度，確保消毒效果。
3.正確選擇消毒方式，可以浸泡、擦拭或噴霧。
4嚴格掌握消毒時間。
5.定期更換，避免產生耐藥性。
6.不聯(lián)用和混合使用。
7消毒前，應進行清潔。
（二）消毒劑的種類
1.高效消毒劑（HLD）：能殺滅一切微生物（包括芽孢），常見的有過氧乙酸、甲醛、環(huán)氧乙烷和含氯消毒劑
2.中效消毒劑（ILD）：能殺滅抵抗力較強的結核桿菌和其他細菌、真菌和大多數(shù)病毒，常見的有乙醇、苯扎溴銨、碘酊和甲酚皂溶液等
3.低效消毒劑（LLD）：能殺滅除結核桿菌以外的抵抗力較弱的細菌以及抵抗力較弱的真菌（如念珠菌）和病毒（如流感病毒、艾滋病毒等），常見的有氯已定、三氯散和高錳酸鉀等
（三） 消毒劑配制
1.根據(jù)消毒劑使用區(qū)域和對象的不同，將消毒劑分成3類，分別是：
第一類消毒劑，專用于普通實驗區(qū)，僅用于物品外表面的消毒，常用的有聚維酮碘和石炭酸等；
第二類消毒劑，專用于潔凈室的更衣室，僅用于佩戴手套的雙手消毒，常用的有苯扎溴銨和75％乙醇；
第三類消毒劑，專用于無菌操作間，直接用于消毒直接接觸藥品的容器表面，也用于實驗操作過程中的手部消毒和實驗臺面消毒，常用的有聚維酮碘溶液和75％乙醇。
2.配制
第一類消毒劑的配制方法：不需使用無菌器具，可直接在普通實驗區(qū)按消毒劑使用說明書的配制方法，用純化水稀釋消毒劑的濃溶液后使用。
第二類消毒劑的配制方法：不需使用無菌器具，應在更衣室內按消毒劑使用說明書的配制方法，用純化水稀釋消毒劑的濃溶液后使用。
第三類消毒劑的配制方法：需要使用無菌器具并在無菌操作間內配制。首先取一次性集菌過濾器一個，將排液口放置在滅菌過的錐形瓶上，將消毒劑濃溶液通過薄膜過濾的方式除菌。然后，按比例取滅菌后的純化水，稀釋濃溶液，制成可供使用的消毒劑。將此消毒劑倒入放置有無菌脫脂棉球的消毒劑缸中，得到可直接使用的消毒劑棉球。（該類消毒劑制備后，應收集消毒劑中的微生物）
四、環(huán)境監(jiān)控
（一）目的：
確定工作臺面、設備表面的消毒效果和消毒頻次，確定潔凈室的綜合性能以及進行維護的時機，確定培養(yǎng)箱的污染情況，判斷是否有必要進行徹底消毒。
（二）環(huán)境監(jiān)控的對象
1.樣品貯存的環(huán)境
2.培養(yǎng)基制備的環(huán)境
3.樣品制備和檢驗的環(huán)境
4.培養(yǎng)的環(huán)境
（三）環(huán)境監(jiān)控的方法
1.表面微生物數(shù)
擦拭法（棉拭子法）
淋洗法
影印盤法（RODAC法）
2.空氣微生物數(shù)
沉降菌法 浮游菌法
浮游菌數(shù)的測定：采用浮游菌測定儀。
沉降菌數(shù)測定：方法：無菌室及凈化工作臺面消毒擦拭后，打開層流凈化裝置及凈化工作臺開關30min，將營養(yǎng)瓊脂平板3個及玫瑰紅鈉瓊脂平板3個（直徑9cm），置凈化工作臺左、中、右各1個，開蓋暴露30min后將蓋蓋上，分別放在30－35℃培養(yǎng)箱內培養(yǎng)48h及25－28℃培養(yǎng)箱內培養(yǎng)72h，細菌和真菌平均菌落數(shù)小于等于1個為100級。實驗室一旦被污染，潔凈度達不到要求，可以清洗或更換凈化工作臺過濾器，用甲醛或丙二醇、乳酸熏蒸消毒，方法：在支架上放一個燒杯（內裝少許甲醛，8ml／平方米），下面放一個裝有少許乙醇的乙醇燈，點燃后，關閉門窗，乙醇用盡后燈自滅，甲醛蒸氣充滿無菌室，密閉24h。
缺點：甲醛蒸氣易銹蝕儀器，對人有刺激，可用氨水噴霧中和，減少對人眼的刺激。
（四）環(huán)境監(jiān)控的評價指標
1.表面微生物數(shù)
1.1需氧嗜溫菌小于5cfu/cm2，合格
1.2需氧嗜溫菌在5～25cfu/cm2之間，需進一步調查
1.3需氧嗜溫菌大于25cfu/cm2，不合格，應立即消毒處理
2.空氣微生物數(shù)
沉降菌大于15cfu/板，應暫停工作，進行消毒
開展無菌檢查及微生物限度檢查工作，首先要按照《藥品檢驗所實驗室質量管理規(guī)范》及《藥品生產質量管理規(guī)范》的要求，建立一個布局合理、使用方便、操作安全的無菌室，并且配有完善的實驗設施和管理制度。無菌檢查、微生物限度檢查以及接種室（接種對照菌、菌種傳代）均應嚴格分開，具有危險性的毒株、毒素如破傷風梭菌、黃曲霉毒素的實驗室需單獨使用，以便控制防止傳播。
（一） 潔凈實驗室
1.潔凈室的布局
1.1根據(jù)樣品檢驗要求，一般應至少包括更衣緩沖系統(tǒng)、微生物限度檢查室、無菌檢查室、陽性菌室和物流通道。
1.2更衣系統(tǒng)應至少包括一更（含更鞋）、二更（含洗手）、緩沖以及人流走廊等。
1.3物流通道應考慮凈污分流的布局，有條件的可設置污物走廊
2.潔凈室的設計要求
2.1凈化級別：潔凈走廊、檢查室、陽性菌室應為一萬級；其他房間應為十萬級
2.2氣流組織：陽性菌室對走廊呈負壓，走廊對緩沖有5Pa的正壓；陽性菌室全排風
2.3電氣控制：控制開關外置；設置通訊系統(tǒng)
3.結構與要求：
無菌潔凈室不宜設在底層，防潮、防霉、采光好，遠離交通干道，廁所及污染區(qū)，面積不超過10m2，高度不超過2.4m，由兩個緩沖間、操作間組成。操作間緩沖間之間應有樣品傳遞窗，出入操作間和緩沖間的門不應直對。無菌室內應六面光滑平整，無縫隙，不起灰，不落塵，耐腐蝕，易清洗，墻壁與地面、墻壁與天花板連接處應呈凹弧形，操作間不得安裝下水道。
無菌室內的照明燈應嵌裝在天花板內，采光面積要大，光照應分布均勻，光照度不低于300勒克斯。緩沖間和操作間應裝有紫外線殺菌燈（2－25w/m3）''用于空氣消毒。紫外線波長200－300nm者具有殺菌作用，其中以265－266nm殺菌作用最強，這與DNA的吸收光譜范圍一致，其殺菌機理可能是在細菌細胞DNA中引起胸腺嘧啶雙聚體形成，從而干擾細菌細胞DNA復制，導致細菌變異死亡。紫外線殺菌燈1m以內距離殺菌效果最佳，每次開燈照射時間為30min。應定期檢查紫外線燈輻射強度，不得低于70μW•cm-21m距離。其缺點是穿透力弱，一張紙板可以阻礙光的透過，不能穿透固體物，故只能用作表面消毒及一些不耐熱或化學消毒劑物品的消毒。
4.溫度、濕度
無菌室內溫度和相對濕度直接影響紫外殺菌燈的殺菌效果，故溫度最好控制在25±2℃，相對濕度40－60％。操作間或凈化工作臺的潔凈空氣應保持對環(huán)境形成正壓，不低于49Pa。
5.操作間
無菌室內應安裝空氣除菌過濾層流裝置及調溫裝置。潔凈度要求：凈化工作臺潔凈度為100級，無菌室應為10000級。
操作間應準備乙醇燈（或煤氣燈），火柴，2％碘酊棉球及75％乙醇棉球、試管架、大小橡皮乳頭、砂輪、記號筆、無菌剪刀、鑷子、注射器等。微生物限度檢查無菌室操作間內還應有電子稱（感覺為0.1g，最大稱量為300g為宜），電動勻漿儀等。
6.緩沖間
緩沖間內應有洗手盆，消毒液，無菌衣，帽，口罩，拖鞋等，緩沖間內不應放置培養(yǎng)箱和其他雜物。
（二）潔凈室的使用
1.在實驗開始之前1小時啟動風機系統(tǒng)（空調系統(tǒng)），并開啟空氣消毒裝置，消毒至少半小時后關閉
2.觀察并確保潔凈室的壓差
3.物品經物流通道進入潔凈室
4.人員正確著裝后經人流通道進入潔凈室
5.使用完畢，應用消毒液清潔工作臺面。實驗人員在更衣室換下無菌工作衣后出潔凈工作室。開啟空氣消毒裝置，消毒至少半小時后，關閉潔凈工作室的控制開關。
（三）潔凈室的清潔維護
1.潔凈室的清潔維護分為日常維護、定期維護和不符合時的維護。
2.日常維護由每次實驗的實驗人員進行，維護的范圍為進行實驗的潔凈工作室和輔助潔凈區(qū)，維護的頻率為每次實驗后。
3.定期維護由實驗室指定專人進行，維護的范圍為所有潔凈工作室，維護的頻率為每二周一次。
4.不符合時的維護由實驗人員進行，維護的范圍為所有不符合的潔凈室，維護的時機為出現(xiàn)不符合時
（四） 潔凈室的驗證
1.驗證的項目：潔凈度、微生物數(shù)、換氣次數(shù)、靜壓差、照度、溫度、相對濕度
2.驗證的技術要求
驗證項目 十萬級 一萬級 一百級
溫度（℃） 18-26 20-24 20-24
相對濕度（%） 45-65 45-60 45-60
換氣次數(shù)（次/h） 不小于15 不小于25 -
壓差（pa） 相對室外：10 有級差的潔凈室之間：5
照度（Lx） 主要工作室≥300 輔助工作室≥150
懸浮粒子數(shù)（粒/m3） ≥0.5um 3500000 350000 3500
≥5um 20000 2000 0
浮游菌數(shù)（個/ m3） 500 100 5
沉降菌（個/皿） 10 3 1
3.驗證的周期 建議每半年一次，也可根據(jù)潔凈室的使用頻率適當增加驗證次數(shù)。
4.驗證的方法 潔凈度和微生物數(shù)：采用GB/T16292~16294-1996，其他項目：參照JGJ71－90。
5.驗證不符合項的處理
5.1當潔凈度、微生物數(shù)、換氣次數(shù)、靜壓差等指標出現(xiàn)不符合時，應停用潔凈室，對凈化系統(tǒng)進行調整后，在重新驗證，直至符合規(guī)定才能重新啟用潔凈室。
5.2當溫度、相對濕度和照度等指標出現(xiàn)不符合時，潔凈室可不必停用，但應及時修復空調系統(tǒng)（或更換照明裝置），使其符合規(guī)定。
二、實驗室管理：
為保證實驗工作有序進行，實驗室必須制定一系列實驗室管理制度。
（一） 實驗室要求：
1實驗室環(huán)境應清潔、衛(wèi)生、安靜，實驗室內嚴禁吸煙和飲食。
2實驗人員必須穿戴工作衣帽，工作服經常洗滌、消毒、保持清潔。
3操作前后或離開實驗室必須用肥皂或消毒液洗手。
4發(fā)生菌液污染臺面或地面，應立即用3％甲醛或5％碳酸等消毒液由外向內傾覆其上，1小時后再擦拭，如為破傷風梭菌，則應隔夜后再擦洗。
5工作衣、帽、口罩受到菌液污染時，應立即脫下使污染部位包裹在內部，高壓滅菌后再清洗。
6如有傳染性培養(yǎng)物污染手部，應先用75％乙醇棉球擦拭，再浸入0.1%新潔爾滅消毒液內泡手，然后再用肥皂及清水徹底洗干凈。
7接種環(huán)（針），每次使用前后，必須通過火焰滅菌，冷卻后方可接種培養(yǎng)物，接種帶有蠟質、油質的培養(yǎng)物或菌苔殘留多時，不應立即在火焰上灼燒，應先在內焰里將油質培養(yǎng)物烘干后再移至火焰上滅菌，以免活菌外濺污染環(huán)境及感染操作者。
8帶菌的吸管應浸泡在5％甲酚消毒液內24h后取出清洗，帶菌的試管或培養(yǎng)物應在121℃高壓滅菌30分鐘后再取出清洗。
9在接種霉菌、放線菌時應在鋪有浸過消毒液的紗布上操作，防止孢子散落傳播。
10廢棄物的處理：
a) 必須消除生物危害后，才能處理，一般使用高壓蒸汽滅菌，也可以采用直接焚燒。
b) 污染性銳器（如一次性針頭）應滅菌后處理，注意避免銳器扎傷。
c) 污染性可重復使用的材料（如平皿）應滅菌后清洗，宜使用不易破碎的材料。
d) 工作服（含潔凈工作服）應定期清洗，懷疑污染的工作服應滅菌后清洗，潔凈工作服應滅菌后使用。
（二） 無菌操作要求：
無菌操作是指在無菌的環(huán)境條件下，使用無菌器材，防止微生物污染的操作技術。即保持待檢樣品在操作時不被污染，又要防止被檢的微生物及陽性對照菌在操作中污染環(huán)境或感染操作人員。從事無菌及微生物操作的工作人員必須經過無菌技術及基礎微生物學專業(yè)知識的學習及培訓才具備上崗操作的資格，微生物專業(yè)檢驗人員也不應該頻繁地變換工作崗位。
1.無菌室應每次使用前后用0.1%苯扎溴銨溶液或2％甲醛液擦拭工作臺面及可能污染的死角，濕拖地面，打開無菌空氣過濾器及超凈工作臺的開關30分鐘，紫外線殺菌燈照射1小時。
2.操作人員用肥皂洗手后進入緩沖間換拖鞋，用75％乙醇棉球擦手，穿戴工作衣帽、口罩。將所需物品剝去牛皮紙及外包裝，從傳遞窗移入操作間，再用0.1%苯扎溴銨溶液泡手后進入操作間，在乙醇（或煤氣燈）火焰區(qū)（火焰高度3－5cm）操作。
3供試品表面消毒，如為安瓿先用砂輪劃痕后用2％碘酒棉球擦拭，再用75％乙醇棉球擦拭、待干，也可以用消毒液浸泡消毒。
4操作者勿用嘴直接吸吹吸管，防止致病菌感染操作人員及口中的雜菌污染供試品。
5在無菌操作中切勿大幅度或快速動作、拖行，以免攪動空氣中塵埃微粒。
6注射器如需回抽時，應對著火焰吸入無菌空氣。
7所用的器材如培養(yǎng)基、稀釋劑配制后經濕熱滅菌121℃30分鐘，吸管培養(yǎng)皿等均應洗滌，干燥，包扎后經干熱滅菌160℃2小時才能使用。
三、消毒劑的質量控制
（一）消毒劑安全使用原則
1.正確選擇消毒劑的種類，盡可能選擇低毒、低殘留的消毒劑。
2.正確選擇使用濃度，確保消毒效果。
3.正確選擇消毒方式，可以浸泡、擦拭或噴霧。
4嚴格掌握消毒時間。
5.定期更換，避免產生耐藥性。
6.不聯(lián)用和混合使用。
7消毒前，應進行清潔。
（二）消毒劑的種類
1.高效消毒劑（HLD）：能殺滅一切微生物（包括芽孢），常見的有過氧乙酸、甲醛、環(huán)氧乙烷和含氯消毒劑
2.中效消毒劑（ILD）：能殺滅抵抗力較強的結核桿菌和其他細菌、真菌和大多數(shù)病毒，常見的有乙醇、苯扎溴銨、碘酊和甲酚皂溶液等
3.低效消毒劑（LLD）：能殺滅除結核桿菌以外的抵抗力較弱的細菌以及抵抗力較弱的真菌（如念珠菌）和病毒（如流感病毒、艾滋病毒等），常見的有氯已定、三氯散和高錳酸鉀等
（三） 消毒劑配制
1.根據(jù)消毒劑使用區(qū)域和對象的不同，將消毒劑分成3類，分別是：
第一類消毒劑，專用于普通實驗區(qū)，僅用于物品外表面的消毒，常用的有聚維酮碘和石炭酸等；
第二類消毒劑，專用于潔凈室的更衣室，僅用于佩戴手套的雙手消毒，常用的有苯扎溴銨和75％乙醇；
第三類消毒劑，專用于無菌操作間，直接用于消毒直接接觸藥品的容器表面，也用于實驗操作過程中的手部消毒和實驗臺面消毒，常用的有聚維酮碘溶液和75％乙醇。
2.配制
第一類消毒劑的配制方法：不需使用無菌器具，可直接在普通實驗區(qū)按消毒劑使用說明書的配制方法，用純化水稀釋消毒劑的濃溶液后使用。
第二類消毒劑的配制方法：不需使用無菌器具，應在更衣室內按消毒劑使用說明書的配制方法，用純化水稀釋消毒劑的濃溶液后使用。
第三類消毒劑的配制方法：需要使用無菌器具并在無菌操作間內配制。首先取一次性集菌過濾器一個，將排液口放置在滅菌過的錐形瓶上，將消毒劑濃溶液通過薄膜過濾的方式除菌。然后，按比例取滅菌后的純化水，稀釋濃溶液，制成可供使用的消毒劑。將此消毒劑倒入放置有無菌脫脂棉球的消毒劑缸中，得到可直接使用的消毒劑棉球。（該類消毒劑制備后，應收集消毒劑中的微生物）
四、環(huán)境監(jiān)控
（一）目的：
確定工作臺面、設備表面的消毒效果和消毒頻次，確定潔凈室的綜合性能以及進行維護的時機，確定培養(yǎng)箱的污染情況，判斷是否有必要進行徹底消毒。
（二）環(huán)境監(jiān)控的對象
1.樣品貯存的環(huán)境
2.培養(yǎng)基制備的環(huán)境
3.樣品制備和檢驗的環(huán)境
4.培養(yǎng)的環(huán)境
（三）環(huán)境監(jiān)控的方法
1.表面微生物數(shù)
擦拭法（棉拭子法）
淋洗法
影印盤法（RODAC法）
2.空氣微生物數(shù)
沉降菌法 浮游菌法
浮游菌數(shù)的測定：采用浮游菌測定儀。
沉降菌數(shù)測定：方法：無菌室及凈化工作臺面消毒擦拭后，打開層流凈化裝置及凈化工作臺開關30min，將營養(yǎng)瓊脂平板3個及玫瑰紅鈉瓊脂平板3個（直徑9cm），置凈化工作臺左、中、右各1個，開蓋暴露30min后將蓋蓋上，分別放在30－35℃培養(yǎng)箱內培養(yǎng)48h及25－28℃培養(yǎng)箱內培養(yǎng)72h，細菌和真菌平均菌落數(shù)小于等于1個為100級。實驗室一旦被污染，潔凈度達不到要求，可以清洗或更換凈化工作臺過濾器，用甲醛或丙二醇、乳酸熏蒸消毒，方法：在支架上放一個燒杯（內裝少許甲醛，8ml／平方米），下面放一個裝有少許乙醇的乙醇燈，點燃后，關閉門窗，乙醇用盡后燈自滅，甲醛蒸氣充滿無菌室，密閉24h。
缺點：甲醛蒸氣易銹蝕儀器，對人有刺激，可用氨水噴霧中和，減少對人眼的刺激。
（四）環(huán)境監(jiān)控的評價指標
1.表面微生物數(shù)
1.1需氧嗜溫菌小于5cfu/cm2，合格
1.2需氧嗜溫菌在5～25cfu/cm2之間，需進一步調查
1.3需氧嗜溫菌大于25cfu/cm2，不合格，應立即消毒處理
2.空氣微生物數(shù)
沉降菌大于15cfu/板，應暫停工作，進行消毒
