1.判斷儀器脫氣機是否正常:打開purge閥,流速設為2ml/min,然后提起過濾頭,讓體系進一些空氣,再放下過濾頭,看氣泡是否會減少來判斷脫氣機是否起作用;
2.溶劑過濾頭不可超聲清洗,可用35%硝酸浸泡1小時后再用溶劑清洗;
3.EDTA、乙二胺四乙酸等會對液相柱的不朽鋼產生腐蝕;四氯化碳與2-異丙醇、四氫呋喃不可混合使用,但可單獨使用;
4.溶劑的使用:每兩天更換或重新過濾溶劑(尤其是水,需要每天更換);流動相過濾是為了去除微生物,一般水要放在棕色瓶中;
5.判斷purge閥的濾芯是否需更換:用水作流動相時,流速為5ml/min時,正常泵壓應為0bar(若打開purge閥時,泵壓超過10bar時需更換濾芯);
6.若用非極性溶劑作流動相,則需更換泵中起密封作用的“黑草帽”(適合反相的材料為石墨+聚四氟乙烯,而適合正相的為 ),而且必須一對同時更換,否則損壞更快;
7.密封墊的沖洗:當流動相中鹽的濃度大于0.01M時,可減少密封墊的磨損;用1%異丙醇溶液沖洗活塞桿中析出的鹽(加異丙醇是為了防止細菌生長),流速設為3-5滴/min;泵開著,洗鹽裝置也須開著;
8.泵頭不可用超聲清洗(可用乙醇、水清洗)、寶石桿不可超聲,石英窗可用超聲清洗;
9.緩沖鹽的通道放在比例閥的下面,只有兩相的話,只用一邊(鹽在下面,有機相在上面);
10.雙元泵為泵后混合方式(為高壓混合方式,不易進氣泡),而四元泵為低壓混合方式;
11.出口球型閥(outlet ball valve)可用超聲清洗;
12.雙元泵有一個篩網(sieve)可控制低流速;
13.流動相使用了緩沖鹽,則必為反相柱(不可長時間用水沖),一般可沖20-30min,然后加入有機相(如甲醇),濃度逐步加大,直至100%甲醇;
14.反相和正相轉換時,一般要做溶劑過渡(最佳為異丙醇),因為粘度大,流速不可設太大,不要超過1ml/min(完全置換原來溶劑所需溶劑體積=體系體積(柱體積+1.5ml)×5);
15.比例閥內漏:抬起有嫌疑的通路,看管內流動相體積是否減少(抬起時同時打開purge閥);
16.泵壓力不正常可能原因:氣泡、主動閥故障、出口閥故障、密封墊或柱塞桿磨損,滲漏或堵塞、比例閥故障、傳感器故障、使用比例閥混合時鹽濃度太高;
17.自動進樣:旁路狀態、主路狀態;手動進樣:load狀態至inject狀態(最好滿刻度進樣,建議吸3倍以上進樣體積),小體積進樣則以小于1/2進樣閥體積為佳;平時進樣閥最好保持在inject狀態(最右邊狀態);
18.進樣流程:插針——inject狀態——load狀態——進樣(緩慢)——inject狀態——拔出針(進樣閥后有兩根廢液管);
19.VWD(可變波長)檢測器:檢測器后out廢液管不可太短,否則流通池容易進氣泡,也不可太長,否則易壓碎流通池;
20.DAD檢測器(優勢為優化條件方便):最大波長選擇——要選擇溶劑沒有吸收的位置(避開約20nm);VWD檢測器的靈敏度略高于DAD檢測器;濾光片中鈥玻璃用于校準波長;若要檢測器的靈敏度提高則要開大狹縫(二極管陣列前狹縫默認為4nm);
21.DAD檢測器的氘燈可用于VWD檢測器,但反之則不行;鎢燈、氙燈壽命長,可隨開隨用,但“氘燈需要預熱(10幾分鐘)(壽命為1000小時),1-2小時不用,不用關,還是開著更好,氘燈放時間長容易衰變”,燈可進行測試;
22.測定條件設定:reference wave(流動相中溶劑的吸收)可以不設,梯度洗脫時參考波長要設,否則會導致基線漂移,DAD可選一個樣品沒吸收的波長作為參考光;band width(VWD設為光譜的半譜帶寬度,而DAD檢測器則不用設)(此范圍內作色譜圖可降低噪音,信噪比更好,但信號會降低);參考波長選擇原則:樣品沒有吸收,但靠近樣品最大吸收的位置;參考光波長帶寬必須大于或等于測量光波長帶寬;DAD選條件時要存所有光譜圖(spectrum);氘燈(190-800nm),但有效范圍為190-600nm,鎢燈(470-950nm),若用470-800nm時兩燈同開則強度加大;
23.基線噪音大原因:泵壓不穩、有氣泡、柱污染;
24.清洗在線脫氣機及比例閥(尤其是長期使用水相或緩沖鹽的通路):先用水沖洗,再用甲醇沖洗,可以打開purge閥,使用5ml/min的流速,也可用IPA清洗:A、Buffer B、MeoH C、Water D、CH3CN 分析:A:B:D=20:
25.流動相大于9.5或小于2.3時,進樣閥應更換tefzel轉子密封,可耐受壓:VWD(40bar),MWD(120bar), FLD(20bar), RID(56bar);RID,FLD永遠是最后一個檢測器;