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分析檢測中繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線目的是可以根據(jù)標(biāo)準(zhǔn)曲線查出待測物質(zhì)的含量，所以標(biāo)曲的制定是實驗室工作中必不可少的工作。在真實的實驗過程中，制作標(biāo)注曲線會遇到各式各樣的問題，比如標(biāo)注曲線彎曲、線性不夠好等問題，造成不同情況的原因是什么呢？本文將詳細(xì)介紹。
前期測定注意事項
1、儀器校驗好。
2、移取液體體積要精確，保證迅速準(zhǔn)確，盡可能用一根移液管；為減小人為誤差，同一種液體要一個人操作。
3、保證標(biāo)準(zhǔn)品的純度，所用標(biāo)準(zhǔn)品最好是新打開的，純度較高的固體或溶液，防止污染。
4、容器要保證潔凈。
5、根據(jù)標(biāo)準(zhǔn)品理化性質(zhì)注意加樣的先后順序。
6、如果要測OD值，應(yīng)保證測前各管液體充分混勻。
7、若還是有某個點(diǎn)誤差較大，應(yīng)舍棄。
8、樣品的濃度等指標(biāo)是根據(jù)標(biāo)準(zhǔn)曲線計算出來的，所以首先要把做標(biāo)準(zhǔn)曲線看作是比做正式實驗還要重要的一件事，否則后面的實驗結(jié)果無從談起。
9、設(shè)置標(biāo)準(zhǔn)曲線樣品的標(biāo)準(zhǔn)濃度范圍要有一個比較大的跨度，并且要能涵蓋你所要檢測實驗樣品的濃度，即樣品的濃度要在標(biāo)準(zhǔn)曲線濃度范圍之內(nèi)，包括上限和下限。而對于呈s型的標(biāo)準(zhǔn)曲線，盡量要使實驗樣品的濃度在中間坡度最陡段，即曲線幾乎成直線的范圍內(nèi)。
10、最好采用倍比稀釋法配制標(biāo)準(zhǔn)曲線中的標(biāo)準(zhǔn)樣品濃度，這樣就能夠保證標(biāo)準(zhǔn)樣品的濃度不會出現(xiàn)較大的偏離。
11、檢測標(biāo)準(zhǔn)樣品時，應(yīng)按濃度遞增順序進(jìn)行，以減少高濃度對低濃度的影響，提高準(zhǔn)確性。
12、標(biāo)準(zhǔn)曲線的樣品數(shù)一般為7個點(diǎn)，但至少要保證有5個點(diǎn)。
13、做出的標(biāo)準(zhǔn)曲線相關(guān)系數(shù)因?qū)嶒炓蟛煌兴儎樱话銇碚f，相關(guān)系數(shù)r至少要大于0.98，對于有些實驗，至少要0.99甚至是0.999。
分光光度法繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線所遇問題
1、單色光純度不夠
問題：標(biāo)準(zhǔn)曲線上端向下彎曲。
措施：光度法中要求在最大吸收峰處測定吸光度，光度計的有效譜帶寬度越窄越好，有利于獲得純度高的單色光。
2.比色皿的厚度或光學(xué)性能不一致
如果裝試劑空白液的比色皿較其它比色皿薄或?qū)獾奈蘸头瓷渖僖恍瑒t曲線的延線與縱坐標(biāo)相交；反之，與橫坐標(biāo)相交。
3.顯色反應(yīng)和反應(yīng)條件的問題
當(dāng)顯色反應(yīng)的靈敏度不高時，被測物低于某一濃度就不能顯色，當(dāng)濃度不同時，溶液對光的吸收、散射的程度不同，低濃度段往往彎曲，加上濃度高時部分膠體顆粒的聚沉，致使測定的吸光度降低，曲線上端向下彎曲。
4.操作上的原因
問題：褪色反應(yīng)，顯色溶液的顏色不穩(wěn)定、易褪色，若比色時間超過了穩(wěn)定時間，標(biāo)準(zhǔn)系列中高濃度溶液顏色減褪，致使曲線上端向下彎曲。
措施：控制好顯色劑的加入時間，可以每加3份，停3～3min，再加上3份，依次進(jìn)行，以使每支比色管的顯色時間相近。
5、干擾物質(zhì)的影響
標(biāo)準(zhǔn)曲線檢驗
標(biāo)準(zhǔn)曲線的檢驗是實際操作中最大的難點(diǎn)，也是工作中誤區(qū)和爭議最多的話題了！
先來了解下最重要的三大檢驗項目：
1.精密度檢驗
標(biāo)準(zhǔn)曲線的精密度檢驗：精密度檢驗就是看試驗點(diǎn)距離擬合的直線的距離有無異常，所以也稱線性檢驗（擬合檢驗），需用F檢驗，P<0.05作為線性檢驗合格的標(biāo)準(zhǔn)。
2.截距檢驗&斜率檢驗
標(biāo)準(zhǔn)曲線的截距檢驗和斜率檢驗分別考察Y=a+bX中a和b與0的統(tǒng)計學(xué)差異，a與0有差別說明有試劑空白或系統(tǒng)誤差，而b若與0沒差別說明儀器的靈敏度根本達(dá)不到分析要求。
標(biāo)準(zhǔn)曲線的檢驗應(yīng)該是線性檢驗結(jié)合失擬檢驗，以及殘差的正態(tài)性檢驗結(jié)合才是統(tǒng)計學(xué)上比較完備的。
接下來，我們看看實驗員在標(biāo)準(zhǔn)曲線使用中還遇到過哪些問題？
問題一：標(biāo)準(zhǔn)曲線需要人為的增加（0,0）點(diǎn)嗎？
答：不能。通常的標(biāo)準(zhǔn)系列多是配制0,1,2,3mg/L系列這樣的說法，沒做實驗人為添加（0,0）很不妥，因為很多時候0管進(jìn)入儀器可能也有響應(yīng)值，這也是我們考察試劑空白的一個重要步驟。這個0管在某些時候非常重要，如，全血鉛測定，我們采用牛血清來基體匹配標(biāo)準(zhǔn)系列，如果此時你用酸做空白或沒做實驗人為添加（0,0），那你就很難做好標(biāo)準(zhǔn)曲線，所以，標(biāo)準(zhǔn)曲線的0管也是做好標(biāo)準(zhǔn)曲線的重要考慮點(diǎn)。
問題二：標(biāo)準(zhǔn)曲線需要減掉試劑空白來做嗎？
答：不需要。儀器測出來標(biāo)準(zhǔn)系列的響應(yīng)值可以減掉試劑空白或減掉0管的響應(yīng)值來做，工作中我們也常用0管來做儀器調(diào)零。其實沒有必要那么麻煩，即使空白或0管有響應(yīng)值，在構(gòu)建標(biāo)準(zhǔn)曲線時，我們已經(jīng)認(rèn)為該響應(yīng)值就是0濃度，也就是扣除了這個空白的。
問題三：什么時候用Y=bx和二次曲線呢？
答：標(biāo)準(zhǔn)曲線我們通常采用的是Y=a+bX，曲線擬合完必須要做統(tǒng)計檢驗且要做統(tǒng)計完備的線性檢驗和失擬檢驗，然后再做a與0的差別檢驗，如果a與0的統(tǒng)計學(xué)上無差異，你就可以考慮用Y=bX的擬合曲線，擬合出來后同樣做線性檢驗和失擬檢驗，如果線性檢驗合格（P<0.05）且失擬檢驗合格（p>0.05）此時你就可以采用Y=bX。二次曲線的采用同樣是這樣的道理，如果你Y=a+bX時擬合不合格，你就考慮用Y=a+bX+cX2，同樣做失擬檢驗，考察擬合的符合情況。如果Y=a+bX 和Y=a+bX+cX2都滿足擬合檢驗和失擬檢驗合格，則采用Y=a+bX形式，這樣符合統(tǒng)計學(xué)上參數(shù)最少的統(tǒng)計簡潔性原則。
問題四：標(biāo)準(zhǔn)曲線去查含量時是先減空白信號算樣品含量還是先算出空白含量相減呢？
答：工作中我們常要減掉空白得到樣品含量，現(xiàn)有國家標(biāo)準(zhǔn)方法有的推薦先算出空白含量，用樣品含量相減，也有推薦先用樣品信號減空白信號然后去標(biāo)準(zhǔn)曲線推算含量。而且這兩種算法常常差距很大。其實這種差距往往是低含量水平時才出現(xiàn)，在低含量水平通過標(biāo)準(zhǔn)曲線推算含量時，本身不確定度就很大。這兩種方法都可以。個人推薦先用樣品信號減空白信號然后去標(biāo)準(zhǔn)曲線推算含量，因為這樣出來的含量不確定度要小一些，而先算出空白含量再相減就增加了1次標(biāo)準(zhǔn)曲線推算含量時的不確定度，因為好的測量永遠(yuǎn)是不確定度小的測量。
結(jié)語
要想繪制出合格的標(biāo)準(zhǔn)曲線、使用好標(biāo)準(zhǔn)曲線，真心不易，必須將以上各個方面的條件都考慮進(jìn)去，即對標(biāo)準(zhǔn)曲線的繪制也實行質(zhì)量控制，只有這樣, 才能得出理想的標(biāo)準(zhǔn)曲線。
文章來源：食品論壇網(wǎng)友分享
前期測定注意事項
1、儀器校驗好。
2、移取液體體積要精確，保證迅速準(zhǔn)確，盡可能用一根移液管；為減小人為誤差，同一種液體要一個人操作。
3、保證標(biāo)準(zhǔn)品的純度，所用標(biāo)準(zhǔn)品最好是新打開的，純度較高的固體或溶液，防止污染。
4、容器要保證潔凈。
5、根據(jù)標(biāo)準(zhǔn)品理化性質(zhì)注意加樣的先后順序。
6、如果要測OD值，應(yīng)保證測前各管液體充分混勻。
7、若還是有某個點(diǎn)誤差較大，應(yīng)舍棄。
8、樣品的濃度等指標(biāo)是根據(jù)標(biāo)準(zhǔn)曲線計算出來的，所以首先要把做標(biāo)準(zhǔn)曲線看作是比做正式實驗還要重要的一件事，否則后面的實驗結(jié)果無從談起。
9、設(shè)置標(biāo)準(zhǔn)曲線樣品的標(biāo)準(zhǔn)濃度范圍要有一個比較大的跨度，并且要能涵蓋你所要檢測實驗樣品的濃度，即樣品的濃度要在標(biāo)準(zhǔn)曲線濃度范圍之內(nèi)，包括上限和下限。而對于呈s型的標(biāo)準(zhǔn)曲線，盡量要使實驗樣品的濃度在中間坡度最陡段，即曲線幾乎成直線的范圍內(nèi)。
10、最好采用倍比稀釋法配制標(biāo)準(zhǔn)曲線中的標(biāo)準(zhǔn)樣品濃度，這樣就能夠保證標(biāo)準(zhǔn)樣品的濃度不會出現(xiàn)較大的偏離。
11、檢測標(biāo)準(zhǔn)樣品時，應(yīng)按濃度遞增順序進(jìn)行，以減少高濃度對低濃度的影響，提高準(zhǔn)確性。
12、標(biāo)準(zhǔn)曲線的樣品數(shù)一般為7個點(diǎn)，但至少要保證有5個點(diǎn)。
13、做出的標(biāo)準(zhǔn)曲線相關(guān)系數(shù)因?qū)嶒炓蟛煌兴儎樱话銇碚f，相關(guān)系數(shù)r至少要大于0.98，對于有些實驗，至少要0.99甚至是0.999。
分光光度法繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線所遇問題
1、單色光純度不夠
問題：標(biāo)準(zhǔn)曲線上端向下彎曲。
措施：光度法中要求在最大吸收峰處測定吸光度，光度計的有效譜帶寬度越窄越好，有利于獲得純度高的單色光。
2.比色皿的厚度或光學(xué)性能不一致
如果裝試劑空白液的比色皿較其它比色皿薄或?qū)獾奈蘸头瓷渖僖恍瑒t曲線的延線與縱坐標(biāo)相交；反之，與橫坐標(biāo)相交。
3.顯色反應(yīng)和反應(yīng)條件的問題
當(dāng)顯色反應(yīng)的靈敏度不高時，被測物低于某一濃度就不能顯色，當(dāng)濃度不同時，溶液對光的吸收、散射的程度不同，低濃度段往往彎曲，加上濃度高時部分膠體顆粒的聚沉，致使測定的吸光度降低，曲線上端向下彎曲。
4.操作上的原因
問題：褪色反應(yīng)，顯色溶液的顏色不穩(wěn)定、易褪色，若比色時間超過了穩(wěn)定時間，標(biāo)準(zhǔn)系列中高濃度溶液顏色減褪，致使曲線上端向下彎曲。
措施：控制好顯色劑的加入時間，可以每加3份，停3～3min，再加上3份，依次進(jìn)行，以使每支比色管的顯色時間相近。
5、干擾物質(zhì)的影響
標(biāo)準(zhǔn)曲線檢驗
標(biāo)準(zhǔn)曲線的檢驗是實際操作中最大的難點(diǎn)，也是工作中誤區(qū)和爭議最多的話題了！
先來了解下最重要的三大檢驗項目：
1.精密度檢驗
標(biāo)準(zhǔn)曲線的精密度檢驗：精密度檢驗就是看試驗點(diǎn)距離擬合的直線的距離有無異常，所以也稱線性檢驗（擬合檢驗），需用F檢驗，P<0.05作為線性檢驗合格的標(biāo)準(zhǔn)。
2.截距檢驗&斜率檢驗
標(biāo)準(zhǔn)曲線的截距檢驗和斜率檢驗分別考察Y=a+bX中a和b與0的統(tǒng)計學(xué)差異，a與0有差別說明有試劑空白或系統(tǒng)誤差，而b若與0沒差別說明儀器的靈敏度根本達(dá)不到分析要求。
標(biāo)準(zhǔn)曲線的檢驗應(yīng)該是線性檢驗結(jié)合失擬檢驗，以及殘差的正態(tài)性檢驗結(jié)合才是統(tǒng)計學(xué)上比較完備的。
接下來，我們看看實驗員在標(biāo)準(zhǔn)曲線使用中還遇到過哪些問題？
問題一：標(biāo)準(zhǔn)曲線需要人為的增加（0,0）點(diǎn)嗎？
答：不能。通常的標(biāo)準(zhǔn)系列多是配制0,1,2,3mg/L系列這樣的說法，沒做實驗人為添加（0,0）很不妥，因為很多時候0管進(jìn)入儀器可能也有響應(yīng)值，這也是我們考察試劑空白的一個重要步驟。這個0管在某些時候非常重要，如，全血鉛測定，我們采用牛血清來基體匹配標(biāo)準(zhǔn)系列，如果此時你用酸做空白或沒做實驗人為添加（0,0），那你就很難做好標(biāo)準(zhǔn)曲線，所以，標(biāo)準(zhǔn)曲線的0管也是做好標(biāo)準(zhǔn)曲線的重要考慮點(diǎn)。
問題二：標(biāo)準(zhǔn)曲線需要減掉試劑空白來做嗎？
答：不需要。儀器測出來標(biāo)準(zhǔn)系列的響應(yīng)值可以減掉試劑空白或減掉0管的響應(yīng)值來做，工作中我們也常用0管來做儀器調(diào)零。其實沒有必要那么麻煩，即使空白或0管有響應(yīng)值，在構(gòu)建標(biāo)準(zhǔn)曲線時，我們已經(jīng)認(rèn)為該響應(yīng)值就是0濃度，也就是扣除了這個空白的。
問題三：什么時候用Y=bx和二次曲線呢？
答：標(biāo)準(zhǔn)曲線我們通常采用的是Y=a+bX，曲線擬合完必須要做統(tǒng)計檢驗且要做統(tǒng)計完備的線性檢驗和失擬檢驗，然后再做a與0的差別檢驗，如果a與0的統(tǒng)計學(xué)上無差異，你就可以考慮用Y=bX的擬合曲線，擬合出來后同樣做線性檢驗和失擬檢驗，如果線性檢驗合格（P<0.05）且失擬檢驗合格（p>0.05）此時你就可以采用Y=bX。二次曲線的采用同樣是這樣的道理，如果你Y=a+bX時擬合不合格，你就考慮用Y=a+bX+cX2，同樣做失擬檢驗，考察擬合的符合情況。如果Y=a+bX 和Y=a+bX+cX2都滿足擬合檢驗和失擬檢驗合格，則采用Y=a+bX形式，這樣符合統(tǒng)計學(xué)上參數(shù)最少的統(tǒng)計簡潔性原則。
問題四：標(biāo)準(zhǔn)曲線去查含量時是先減空白信號算樣品含量還是先算出空白含量相減呢？
答：工作中我們常要減掉空白得到樣品含量，現(xiàn)有國家標(biāo)準(zhǔn)方法有的推薦先算出空白含量，用樣品含量相減，也有推薦先用樣品信號減空白信號然后去標(biāo)準(zhǔn)曲線推算含量。而且這兩種算法常常差距很大。其實這種差距往往是低含量水平時才出現(xiàn)，在低含量水平通過標(biāo)準(zhǔn)曲線推算含量時，本身不確定度就很大。這兩種方法都可以。個人推薦先用樣品信號減空白信號然后去標(biāo)準(zhǔn)曲線推算含量，因為這樣出來的含量不確定度要小一些，而先算出空白含量再相減就增加了1次標(biāo)準(zhǔn)曲線推算含量時的不確定度，因為好的測量永遠(yuǎn)是不確定度小的測量。
結(jié)語
要想繪制出合格的標(biāo)準(zhǔn)曲線、使用好標(biāo)準(zhǔn)曲線，真心不易，必須將以上各個方面的條件都考慮進(jìn)去，即對標(biāo)準(zhǔn)曲線的繪制也實行質(zhì)量控制，只有這樣, 才能得出理想的標(biāo)準(zhǔn)曲線。
文章來源：食品論壇網(wǎng)友分享
