實驗室里，加標回收率不理想是一項非常讓人頭痛的事情，因為它代表著這次實驗的檢測結(jié)果不一定正確，而在實驗操作步驟完全正確的情況下，進行問題排查又非常復(fù)雜。那么，加標實驗要怎么做？哪些地方最容易因起加標實驗失敗呢？

加標回收率的大小不僅反應(yīng)了分析人員的操作技術(shù)水平，更重要的是它反應(yīng)了分析方法是否適合被測基體，幫助分析人員及時地發(fā)現(xiàn)分析中存在的問題，確保分析數(shù)據(jù)準確、可靠。

首先，我們要知道什么是加標回收率？加標回收率就是在測定樣品的同時，于一樣品的子樣中加入一定量的標準物質(zhì)進行測定，將其測定結(jié)果扣除樣品的測定值，而得到加入標準物質(zhì)的回收率。又分為空白加標回收和樣品加標回收兩種。

1、空白加標回收
在沒有被測物質(zhì)的空白樣品基質(zhì)中加入定量的標準物質(zhì)，按樣品的處理步驟分析，得到的結(jié)果與理論值的比值即為空白加標回收率。

2、樣品加標回收
相同的樣品取兩份，其中一份加入定量的待測成分標準物質(zhì)；兩份同時按相同的分析步驟分析，加標的一份所得的結(jié)果減去未加標一份所得的結(jié)果，其差值同加入標準物質(zhì)的理論值之比即為樣品加標回收率。

如何進行加標回收率的測定

加標回收率的測定可以和平行樣的測定相同，一般多按隨機抽取10%～20%的樣品量做加標回收率測定。

例如，有10個樣品待測定，則可以從中隨機抽出2個樣品做加標回收率測定。抽出的2個樣品各取4份，其中兩份做平行本底測定，另兩份做平行加標回收率測定。

加標回收率的測定往往由于樣品中待測物質(zhì)含量未知，難以估計加標量，需預(yù)先測定樣品含量，再作回收率測定。由于加標回收率受加標量大小的影響，因此，必須對加標量有所規(guī)定：
(1)加標物質(zhì)的形態(tài)應(yīng)該和待測物的形態(tài)相同。
(2)加標樣品和樣品中待測物濃度應(yīng)控制在精密度相當?shù)姆秶鷥?nèi)。

一般情況下規(guī)定：

a. 加標量應(yīng)盡量與樣品中待測物質(zhì)含量相等或相近，并應(yīng)注意對樣品容積的影響；

b. 當樣品中待測物質(zhì)含量接近方法檢出限時，加標量應(yīng)控制在校準曲線的低濃度范圍；當樣品中待測物含量小于方法檢出限時，以檢出限的量作為待測物質(zhì)的含量加標；

c. 一般加標量不得大于待測物含量的3倍；

d. 加標后的測定值不應(yīng)超出方法的測定上限的90%；

e. 當樣品中待測物濃度高于校準曲線的中間濃度時，加標量應(yīng)控制在待測物濃度的半量。

計算方法及數(shù)學表達式


其計算公式為：
回收率P=(加標試樣測定值-試樣測定值)/加標量×100%

1、理論公式使用的前提條件
文獻中對加標回收率的解釋是:“在測定樣品的同時, 于同一樣品的子樣中加入一定量的標準物質(zhì)進行測定, 將其測定結(jié)果扣除樣品的測定值, 以計算回收率。”因此，使用理論公式時應(yīng)當滿足以下2個條件：
①同一樣品的子樣取樣體積必須相等；
②各類子樣的測定過程必須按相同的操作步驟進行；

2、理論公式使用的約束條件
文獻中強調(diào)指出：加標量不能過大，一般為待測物含量的0.5～2.0倍，且加標后的總含量不應(yīng)超過方法的測定上限；加標物的濃度宜較高，加標物的體積應(yīng)很小，一般以不超過原始試樣體積的1%為好。

3、理論公式的不足之處
各文獻對公式中“加標量”一詞的定義，均未準確給定，使其含義不是十分明確。從公式的分子上分析，加標量應(yīng)為濃度單位；從公式的分母上理解，應(yīng)為加入一定體積的標準溶液中所含標準物質(zhì)的量值，為質(zhì)量單位。

若公式中的加標量為濃度單位，此時的加標量并不是指標準溶液的濃度，而應(yīng)該是加標體積所含標準物質(zhì)的量值除以試樣體積（或除以試樣體積與加標體積之和）所得的濃度值。這里存在著濃度換算，而在理論公式中并沒有明確予以表現(xiàn)出來。

影響加標回收率值的因素


1、分析方法及實驗條件
有的項目由于分析方法有局限，而造成加標回收率值較低；由于實驗條件(裝置、儀器等)較差，對加標回收值的影響也較大，例如：水中硫化物的測定。

2、樣品中的本底值
一般在分析方法適用濃度范圍的中、高濃度水平，加標回收率與濃度水平關(guān)系不大。但是，在低濃度區(qū)加標回收率要受樣品中本底值的影響。通常，樣品中本底值越低，加標回收率越低。

3、加標量對加標回收率的影響
a、加入過多或過少標準物質(zhì)，均不能保證加標樣品和樣品中所含待測物濃度在相同的精密度范圍內(nèi)；
b、當樣品中待測物含量較高時，加入標準物質(zhì)過高，使加標后測定值接近方法的檢出上限，這樣測得加標樣中待測物的誤差較大，加標后引起的濃度增量在方法測定上限濃度C 的0.4～0.6倍之間為宜；
c、當樣品中待測物含量較低時，加入標準物質(zhì)太少，測得回收率值較差；加入標準物質(zhì)太多則會改變待測物質(zhì)在加標樣品和樣品中的測定背景；
d、當加入標準物質(zhì)是有機溶劑時，加標量過多，則會造成溶劑和標準物質(zhì)難以在水中溶解，從而因溶解度問題造成對加標回收率的影響。


加標回收測定結(jié)果判斷


結(jié)果判斷的一般方法加標回收率測定所得結(jié)果一般按方法規(guī)定的水平進行判斷，或在質(zhì)量控制圖中檢驗。在沒有這兩項依據(jù)時，可按95%～105%的域限做判斷標準，超出此域限的，再按測定結(jié)果的標準差、自由度、給定的置信限和加標量計算加標回收率的可按受域P。
計算公式為：

注意事項

1、加標物的形態(tài)應(yīng)和待測物的形態(tài)相同。
2、加標量應(yīng)和樣品中所含待測物的測量精密度控制在相同的范圍內(nèi)，一般情況下作如下規(guī)定：
（1）加標量應(yīng)盡量與樣品中待測物含量相等或相近，并應(yīng)注意對樣品容積的影響；
（2）當樣品中待測物含量接近方法檢出限時，加標量應(yīng)控制在校準曲線的低濃度范圍；
（3）在任何情況下加標量均不得大于待測物含量的3倍；
（4）加標后的測定值不應(yīng)超出方法的測定上限的90%；
（5）當樣品中待測物濃度高于校準曲線的中間濃度時，加標量應(yīng)控制在待測物濃度的半量。

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