油脂受到光、熱、空氣中氧的作用,發(fā)生酸敗反應(yīng),分解出醛、酸之類的化合物。丙二醛就是分解產(chǎn)物的一種,它能與TBA(硫代巴比妥酸)作用生成粉紅色化合物,在532nm波長(zhǎng)處有吸收高峰,利用此性質(zhì)即能測(cè)出丙二醛含量,從而推導(dǎo)出油脂酸敗的程度。
2、試劑。
BA水溶液:準(zhǔn)確稱取TBA0.288g溶于水中,并稀釋至100ml(如TBA不易溶解,可加熱至全溶澄清,然后稀釋至100ml),相當(dāng)于0.02mol/L;
三氯乙酸混合液:準(zhǔn)確稱取三氯乙酸(分析純)7.5g及0.1gEDTA,用水溶解,稀釋至100ml;
丙二醛標(biāo)準(zhǔn)溶液:稱取0.315g1,1,3,3-四乙氧基丙烷,溶解后稀釋至1000ml,此溶液每ml相當(dāng)于丙二醛100μg,置于冰箱內(nèi)保存。準(zhǔn)確吸取10ml,稀釋至100ml,此溶液每毫升相當(dāng)于丙二醛10μg,備用。
3、操作步驟 。
1)標(biāo)準(zhǔn)曲線的繪制
準(zhǔn)確吸取每相當(dāng)于丙二醛10μg的標(biāo)準(zhǔn)溶液0.0、0.1、0.2、0.3、0.4、0.5、0.6ml置于納氏比色管中,加水至總體積5.00ml,加入5.00ml TBA溶液,然后按樣品測(cè)定步驟進(jìn)行,測(cè)得光密度繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線。
(2)樣品測(cè)定:
稱取融化均勻的油脂樣品10g(準(zhǔn)確至0.0002g),置于100ml有蓋三角瓶?jī)?nèi),加入50.00ml三氯乙酸混合液,振搖半小時(shí)(保持油脂融溶狀態(tài),如冷結(jié)即在70℃水浴上略微加熱使之融化后繼續(xù)振搖)用雙層濾紙過(guò)濾,除去油脂。濾液重復(fù)用雙層濾紙過(guò)濾一次。
移取上述濾液5.00ml置于25ml比色管內(nèi),加入5.00ml TBA溶液,混勻,加塞,置于90℃水浴內(nèi)保溫40min,取出,搖勻,靜置,冷卻1h ,于532nm波長(zhǎng)比色,對(duì)照標(biāo)準(zhǔn)曲線得到微克數(shù)(同時(shí)作空白試驗(yàn))
4. 計(jì)算。
丙二醛含量(mg/kg)=
式中:C—從標(biāo)準(zhǔn)曲線查得丙二醛的微克數(shù)(ug)
m---樣品質(zhì)量(g)
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