一般由五個部分組成：

高壓輸液系統 —— 進樣系統 —— 分離系統—— 檢測系統 —— 數據處理系統

一. 高壓輸液系統

     貯液裝置、高壓輸液泵、過濾器、脫氣裝置等

1. 貯液器：貯液器用于存放溶劑。溶劑必須很純，貯液器材料要耐腐蝕，對溶劑呈惰性。貯液器應配有溶劑過濾器，以防止流動相中的顆粒進入泵內。溶劑過濾器一般用耐腐蝕的鎳合金制成，空隙大小一般為2mm。

2. 脫氣裝置：脫氣的目的是為了防止流動相從高壓柱內流出時，釋放出氣泡進入檢測器而使噪聲劇增，甚至不能正常檢測。

3. 高壓輸液泵  高壓輸液泵是高效液相色譜儀的重要部件，是驅動溶劑和樣品通過色譜柱和檢測系統的高壓源，其性能好壞直接影響分析結果的可靠性。

    對高壓泵的基本要求是：

    ①流量穩定；②輸出壓力高，最高輸出壓力為50Mpa；③流量范圍寬，可在0.01～10ml／min范圍任選。④耐酸、堿、緩沖液腐蝕。⑤壓力波動小。

2. 梯度洗脫裝置  梯度洗脫是利用兩種或兩種以上的溶劑，按照一定時間程序連續或階段地改變配比濃度，以達到改變流動相極性、離子強度或pH值，從而提高洗脫能力，改善分離的一種有效方法。當一個樣品混合物的容量因子是范圍很寬，用等度洗脫時間太長，且后出的峰形扁平不便檢測時，用梯度洗脫可以改善峰形、并縮短分離時間。HPLC的梯度洗脫與GC的程序升溫相似，可以縮短分析時間，提高分離效果。使所有的峰都處于最佳分離狀態，而且峰形尖而窄。

二. 進樣器

    進樣器一般要求密封性好，死體積小，重復性好，保證中心進樣，進樣時對色譜系統的壓力和流量波動小，并便于實現自動化。

    高壓進樣閥是目前廣泛采用的一種方式。閥的種類很多，有六通閥、四通閥，雙路閥等。以六通進樣閥最為常用。

 三.分離系統

    色譜分離系統包括色譜柱、固定相和流動相。色譜柱是其核心部分，柱應具備耐高壓、耐腐蝕、抗氧化、密封不漏液和柱內死體積小、柱效高、柱容量大、分析速度快、柱壽命長的要求。通常采用優質不銹鋼管制成。

    色譜柱按內徑不同可分為常規柱、快速柱和微量柱三類。

    常規分析柱柱長一般為10~25cm，內徑4 ~ 5mm，固定相顆粒直徑為 5 ~ 10 mm。為了保護分析柱不受污染，一般在分析柱前加一短柱，約數厘米長，稱為保護柱。

（微量分析柱內徑小于l mm，凝膠色譜往內徑3～12 mm，制備往內徑較大，可達25 mm以上。）

四. 檢測系統

    檢測器的作用是將柱流出物中樣品組成和含量的變化轉化為可供檢測的信號，常用檢測器有紫外吸收、熒光、示差折光、化學發光等。

 1. 紫外可見吸收檢測器（ultraviolet－visible detector，UVD）

紫外可見吸收檢測器（UVD）是HPLC中應用最廣泛的檢測器之一，幾乎所有的液相色譜儀都配有這種檢測器。其特點是靈敏度較高，線性范圍寬，噪聲低，適用于梯度洗脫，對強吸收物質檢測限可達1ng，檢測后不破壞樣品，可用于制備，并能與任何檢測器串聯使用。紫外可見檢測器的工作原理與結構同一般分光光度計相似，實際上就是裝有流動地的紫外可見光度計。

（1）紫外吸收檢測器：

    紫外吸收檢測器常用氘燈作光源，氘燈則發射出紫外-可見區范圍的連續波長，并安裝一個光柵型單色器，其波長選擇范圍寬（190nm～800nm）。它有兩個流通池，一個作參比，一個作測量用，光源發出的紫外光照射到流通池上，若兩流通池都通過純的均勻溶劑，則它們在紫外波長下幾乎無吸收，光電管上接受到的輻射強度相等，無信號輸出。當組分進入測量池時，吸收一定的紫外光，使兩光電管接受到的輻射強度不等，這時有信號輸出，輸出信號大小與組分濃度有關。

局限：流動相的選擇受到一定限制，即具有一定紫外吸收的溶劑不能做            流動相，每種溶劑都有截止波長，當小于該截止波長的紫外光通過溶劑時，溶劑的透光率降至10%以下，因此，紫外吸收檢測器的工作波長不能小于溶劑的截止波長

（2）光電二極管陣列檢測器（photodiode array detector，  PDAD）：

    也稱快速掃描紫外可見分光檢測器，是一種新型的光吸收式檢測器。它采用光電二極管陣列作為檢測元件，構成多通道并行工作，同時檢測由光柵分光，再入射到陣列式接收器上的全部波長的光信號，然后對二極管陣列快速掃描采集數據，得到吸收值(A)是保留時間(t_R)和波長(l)函數的三維色譜光譜圖。由此可及時觀察與每一組分的色譜圖相應的光譜數據，從而迅速決定具有最佳選擇性和靈敏度的波長。

下圖是單光束二極管陣列檢測器的光路圖。光源發出的光先通過檢測池，透射光由全息光柵色散成多色光，射到陣列元件上，使所有波長的光在接收器上同時被檢測。陣列式接收器上的光信號用電子學的方法快速掃描提取出來，每幅圖象僅需要10ms，遠遠超過色譜流出峰的速度，因此可隨峰掃描。

圖1  二極管陣列檢測器光路圖

2．熒光檢測器（fluorescence detector， FD）

     熒光檢測器是一種高靈敏度、有選擇性的檢測器，可檢測能產生熒光的化合物。某些不發熒光的物質可通過化學衍生化生成熒光衍生物，再進行熒光檢測。其最小檢測濃度可達0.1ng／ml，適用于痕量分析；一般情況下熒光檢測器的靈敏度比紫外檢測器約高2個數量級，但其線性范圍不如紫外檢測器寬。

    近年來，采用激光作為熒光檢測器的光源而產生的激光誘導熒光檢測器極大地增強了熒光檢測的信噪比，因而具有很高的靈敏度，在痕量和超痕量分析中得到廣泛應用。

3. 示差折光檢測器（differential refractive Index detector， RID）

    示差折光檢測器是一種濃度型通用檢測器，對所有溶質都有響應，某些不能用選擇性檢測器檢測的組分，如高分子化合物、糖類、脂肪烷烴等，可用示差檢測器檢測。示差檢測器是基于連續測定樣品流路和參比流路之間折射率的變化來測定樣品含量的。光從一種介質進入另一種介質時，由于兩種物質的折射率不同就會產生折射。只要樣品組分與流動相的折光指數不同，就可被檢測，二者相差愈大，靈敏度愈高，在一定濃度范圍內檢測器的輸出與溶質濃度成正比。

4. 電化學檢測器 （elec）chemical detector， ED）

    電化學檢測器主要有安培、極譜、庫侖、電位、電導等檢測器，屬選擇性檢測器，可檢測具有電活性的化合物。目前它已在各種無機和有機陰陽離子、生物組織和體液的代謝物、食品添加劑、環境污染物、生化制品、農藥及醫藥等的測定中獲

得了廣泛的應用。其中，電導檢測器在離子色譜中應用最多。

    電化學檢測器的優點是：

 ①靈敏度高，最小檢測量～般為ng級，有目可達pg級；

 ②選擇性好，可測定大量非電活性物質中極痕量的電活性物質；

 ③線性范圍寬，一般為4～5個數量級；

 ④設備簡單，成本較低；⑤易于自動操作。

5. 化學發光檢測器 （c。iluminescence detector， CD）

    化學發光檢測器是近年來發展起來的一種快速、靈敏的新型檢測器，因其設備簡單、價廉、線性范圍寬等優點。其原理是基于某些物質在常溫下進行化學反應，生成處于激發態勢反應中間體或反應產物，當它們從激發態返回基態時，就發射出光子。由于物質激發態的能量是來自化學反應，故叫作化學發光。當分離組分從色譜柱中洗脫出來后，立即與適當的化學發光試劑混合，引起化學反應，導致發光物質產生輻射，其光強度與該物質的濃度成正比。  

    這種檢測器不需要光源，也不需要復雜的光學系統，只要有恒流泵，將化學發光試劑以一定的流速泵入混合器中，使之與柱流出物迅速而又均勻地混合產生化學發光，通過光電倍增管將光信號變成電信號，就可進行檢測。這種檢測器的最小檢出量可達10^-12g。

五. 數據處理系統

    早期的 HPLC 只配有記錄儀記錄色譜峰，用人工計算 A或 H。隨著計算機技術的發展，簡單的積分儀，可自動打印出 H、A和 t_R，作一些簡單的計算，但不能存儲數據。 

    現在的色譜工作站功能增多，一般包括：色譜參數的選擇和設定：自動化操作儀器；色譜數據的采集和存儲，并作“實時”處理；對采集和存儲的數據進行后處理；自動打印，給出一套完整的色譜分析數據和圖譜。同時也可把一些常用色譜參數、

操作程序，及各種定量計算方法存入存儲器中，需用時調出直接使用。