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GB 4789.15-2016相比GB 4789.15-2010，最大的區(qū)別可能就在于對(duì)平皿的培養(yǎng)方式。2016版的國標(biāo)在5.2中要求：瓊脂凝固后，正置平板，置28℃±1℃培養(yǎng)箱中培養(yǎng)，觀察并記錄培養(yǎng)至第5d的結(jié)果。
其實(shí)針對(duì)這一條，需要注意兩點(diǎn)：
第一，是需要對(duì)平板進(jìn)行觀察的，不能直接培養(yǎng)至第5天計(jì)數(shù)，因?yàn)槊咕奶厥庑裕谂囵B(yǎng)過程中會(huì)產(chǎn)生大量孢子，導(dǎo)致整個(gè)平板蔓延。因此，在培養(yǎng)后的第2天開始，就要對(duì)平板進(jìn)行觀察，并計(jì)數(shù)典型菌落，而這樣的觀察在之后每一天都應(yīng)該進(jìn)行，直至培養(yǎng)第5天。
第二，就是正置培養(yǎng)。這一點(diǎn)是16版國標(biāo)與舊版最大的區(qū)別，10版之前的國標(biāo)都是倒置培養(yǎng)的。而進(jìn)行正置培養(yǎng)，很多朋友可能都會(huì)遇到平板被霉菌污染的問題，比如圖中的情況，這怎么解決呢？
遇到這種情況，一開始我們也是十分疑惑，檢測(cè)方法的霉菌是從哪里來的呢！
其實(shí)造成這種情況的原因有很多種，可能有培養(yǎng)箱環(huán)境污染，平皿冷凝水污染，操作環(huán)境污染、培養(yǎng)基問題等等，這些問題都該如何解決呢？
污染原因與解決措施
一、培養(yǎng)箱環(huán)境污染
很多實(shí)驗(yàn)室培養(yǎng)霉菌采用的是專用的霉菌培養(yǎng)箱，所以培養(yǎng)箱空間里會(huì)有大量的霉菌孢子。而平皿的蓋和底是有一定縫隙的，尤其是玻璃平皿縫隙還是比較大的，正置培養(yǎng)中，孢子會(huì)向上飛揚(yáng)通過縫隙落到平板的培養(yǎng)基上，導(dǎo)致污染。細(xì)心地實(shí)驗(yàn)猿可能發(fā)現(xiàn)，污染的菌落大部分都是在平皿邊緣生長的。用一次性塑料平皿來培養(yǎng)，污染的概率就會(huì)小很多，因?yàn)橐淮涡运芰掀矫蟮纳w和底之間的縫隙相比之下是比較小的。因此培養(yǎng)箱環(huán)境中的孢子可能會(huì)是主要污染源。
這樣一來，解決的方法就應(yīng)該是對(duì)培養(yǎng)箱進(jìn)行殺菌。可以考慮用紫外線殺一下菌，同時(shí)輔助消毒劑擦拭的方法，常用消毒劑比如75%酒精和新潔爾滅等，應(yīng)該注意的是，這樣的殺菌操作也是需要經(jīng)常進(jìn)行的，因?yàn)槊咕逆咦邮鞘蛛y清除的，而每次培養(yǎng)可能又會(huì)引進(jìn)新的污染源，可以考慮每周進(jìn)行兩次，保證培養(yǎng)環(huán)境無污染源。
二、平皿冷凝水污染
正置培養(yǎng)過程中，若是平皿的上蓋有泠凝水，在培養(yǎng)過程中冷凝水滴落到培養(yǎng)基上，也極容易造成菌落蔓延，平皿污染。因此在培養(yǎng)之前，一定要保證平皿干燥，可以把平皿放在37℃的環(huán)境里烘干，烘干之后再進(jìn)行培養(yǎng)，就會(huì)避免這個(gè)原因造成的污染。
三、操作環(huán)境和培養(yǎng)基的污染
因?yàn)闊o菌室里可能也會(huì)因?yàn)闇缇Ч焕硐朐斐晌廴尽Ｐ【幹肮ぷ鞯膶?shí)驗(yàn)室，操作臺(tái)使用紫外線滅菌，經(jīng)常就會(huì)滅菌不徹底有孢子污染，尤其是在進(jìn)行過霉菌的相關(guān)檢測(cè)之后。所以在進(jìn)行過霉菌檢測(cè)之后，適當(dāng)?shù)脑鲩L滅菌時(shí)間，可能會(huì)達(dá)到比較理想的效果。另外，為了徹底解決無菌室空間孢子污染的問題，可以購買安裝臭氧發(fā)生器，通過紫外線+臭氧的雙重消毒模式，效果就十分理想了。
大家如果還是想驗(yàn)證一下究竟是什么原因造成的污染，這里提供一個(gè)簡(jiǎn)單的驗(yàn)證試驗(yàn)：在正常檢測(cè)的環(huán)境中倒一組空白平皿，將這些平皿分為AB兩組，其中A組用有充足氧氣的自封袋將平皿封好，B組不封，均放置在培養(yǎng)箱中正置培養(yǎng)。若是A組B組均有霉菌生長，則需要考慮培養(yǎng)基污染或者操作環(huán)境的污染；若是A組不生長霉菌而B組生長，則需要考慮是培養(yǎng)箱內(nèi)的環(huán)境污染。通過這個(gè)小試驗(yàn)，可以基本上確定污染源，然后針對(duì)污染源進(jìn)行相應(yīng)的處理。
