一、概況
細(xì)菌分類學(xué)上,腸球菌屬早期并不存在,現(xiàn)今的一些菌種本歸屬于鏈球菌屬,1989年,依據(jù)Facklam和Collins的分類,腸球菌屬內(nèi)包括十二個種及一個變異株,它們是:
糞腸球菌(E.faecalis) 屎腸球菌(E.faecium)
鳥腸球菌(E.avium) 酪黃腸球菌(E.casseliflavus)
堅忍腸球菌(E.durans) 雞腸球菌E.galinarum)
芒地腸球菌(E.mundii) 惡臭腸球菌(E.maladoratum)
希拉腸球菌(E.hirae) 孤立腸球菌(E.solitarius)
棉子糖腸球菌(E.raffinosus) 假鳥腸球菌(E.pseudoavium)
糞腸球變異株(E.faecalis var)。
糞腸球菌為該屬中最常見的即為代表種。該屬通常指糞便來的可以用氮鈉分離鑒定的一群革蘭氏陽性球菌。由于腸球菌的菌種均含有Lancefield的D群抗原,亦稱D群糞腸球菌或D群腸球菌。腸球菌的DNA G+C含量33%-39%mol。
腸球菌普遍存在于自然界,一般棲居在各種溫血和冷血動物的腔腸,甚至昆蟲體內(nèi),也是健康人體的上呼吸道,口腔或腸道的常居菌。本菌可以引起心內(nèi)膜炎,膽囊炎,腦膜炎,尿路感染及傷口感染等多種疾病。在人類糞便中的數(shù)量僅次于大腸菌群,每克成人的糞便中約含2×108個。由于此污染指示菌比較大腸桿菌對外界環(huán)境溫度適應(yīng)性強(qiáng)、抵抗力強(qiáng)及耐受性強(qiáng),甚至可以與多種抗生素相抵抗和生長營養(yǎng)要求不高,因此在自然界分布廣,存活力持久。在無糞便污染的環(huán)境中較大腸菌更易發(fā)現(xiàn),所以,即使檢出腸球菌也沒有糞便污染的指示作用。此外,即使在冷凍,干燥性和經(jīng)中等強(qiáng)度加熱處理的食品中檢出腸球菌也不能提示腸道致病菌的存在,因?yàn)槟c球菌比沙門氏菌,致病性大腸桿菌抵抗性及存活率均高。
食品微生物檢驗(yàn)主要針對在10℃和45℃下可生長發(fā)育的糞腸球菌與屎腸球菌,二者在生化特性、DNA雜交結(jié)果有明顯不同。在45℃條件下,用含疊氮鈉成分的培養(yǎng)基檢測此類指示菌是其主要特征。
目前該菌多作為生活飲用水,管道水和一些水質(zhì)的指示菌。衛(wèi)生學(xué)家認(rèn)為,腸球菌類似于大腸菌群的生態(tài)活動,但其對惡劣的外環(huán)境和冷凍條件具有較強(qiáng)的抵抗力,作為監(jiān)測水質(zhì)衛(wèi)生,環(huán)境衛(wèi)生質(zhì)量的污染指標(biāo)更具有衛(wèi)生學(xué)意義。另據(jù)有關(guān)報道,大量的(109以上)腸球菌可以引起食物中毒,作為一個有衛(wèi)生學(xué)意義的細(xì)菌(該菌的污染在某些食品中也常被發(fā)現(xiàn)),有些國家已經(jīng)制定了針對腸球菌污染限量標(biāo)準(zhǔn),大多制定在0/克~105/克范圍內(nèi)。從預(yù)防食物中毒方面,保障人民身體健康考慮,借鑒國外標(biāo)準(zhǔn),制定適宜的污染限量指標(biāo),應(yīng)盡快擺到議事日程上來。
二、生物學(xué)性狀
1、形態(tài)與染色
腸球菌屬的細(xì)菌為革蘭氏陽性球菌,多數(shù)菌種成雙或呈短鏈狀排列;一般無芽胞,無莢膜,少數(shù)菌種有鞭毛,陳舊培養(yǎng)物或在厭氧狀態(tài)下有時呈革蘭氏陰性。
2、培養(yǎng)特性
在普通瓊脂及麥康凱瓊脂上形成小菌落,在血瓊脂上形成較鏈球菌稍大的菌落,光滑、較濕潤、易乳化,依據(jù)種的不同,α、β或γ溶血均可出現(xiàn)。在液體培養(yǎng)基中呈均勻渾濁生長,也較易形成長鏈。需氧或兼性厭氧,最適生長溫度37℃,最適pH為4.7-7.6,屬內(nèi)各菌種均能在6.5%氯化鈉肉湯,pH9.6葡萄糖肉湯及45℃生長,個別菌種在50℃時生長快。
3、抗原結(jié)構(gòu)
Lancefied血清系統(tǒng)屬D群,其特異性抗原決定簇是位于細(xì)胞壁中的甘油壁酸,本質(zhì)上是多糖類,含有N-乙酰己糖胺。
4、生化反應(yīng)
過氧化氫酶呈陰性,能分解葡萄糖、麥芽糖生成酸,多數(shù)菌株分解甘露醇;膽汁七葉苷水解、萬古霉素敏感性及咯烷基芳基酰胺酶均為陽性;耐一定程度的酸堿、耐鹽和40%的膽鹽;結(jié)合D群抗血清進(jìn)行血清學(xué)鑒定可用來區(qū)分腸球菌與鏈球菌,乳球菌屬。依據(jù)甘露醇、山梨醇、山梨糖產(chǎn)酸及精氨酸脫氨基四個關(guān)鍵性的生化生理實(shí)驗(yàn),可將腸球菌分為三個群。
三、腸球菌屬主要檢測步驟如下:
檢樣
↓
AC培養(yǎng)基
36℃ ↓ 48±3h
↓ ↓
(推斷試驗(yàn)陰性) (推斷試驗(yàn)陽性)
↓
AC培養(yǎng)基
45±0.5℃↓ 48±3h
↓ ↓
(確定試驗(yàn)陰性) (確定試驗(yàn)陽性)
↓
葡萄糖瓊脂
36±1℃ ↓48±3h
單獨(dú)集落
↓
葡萄糖肉湯
↓
↓ ↓
6.5%氯化鈉葡萄糖 葡萄糖瓊脂斜面
36±1℃↓48±3h 36±1℃↓24±2h
↓ ↓
↓ 過氧化氫酶(-)
↓ 革蘭氏陽性球菌
↓ ↓
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↓
(完全試驗(yàn)陽性)