2 在空白出現(xiàn)菌落的時候需要去分析哪一步出現(xiàn)問題,人機料法環(huán)。當然空白出現(xiàn)菌落的時候,那么該批次的菌落總數(shù)數(shù)據(jù)都作廢處理。在制樣和做樣的時候需要在百級的環(huán)境(百級的潔凈工作臺)下進行。
3 稀釋液的均勻性,這個會影響結果,剛開始的時候可能會造成同一梯度的兩個結果相差有點遠,這個是因為做的時候沒有把稀釋液均勻。如果前后兩個梯度沒有梯度性,那么就是在做稀釋做不好。這個都是靠多做,技術才會提高。(當然還有一種情況,樣品是中添加了抑菌物質,這樣沒有梯度性。)
1 可用肉眼觀察,必要時用放大鏡或菌落計數(shù)器,記錄稀釋倍數(shù)和相應的菌落數(shù)量。菌落計數(shù)以菌落形成單位(colony-formingunits , CFU )表示。
2 選取菌落數(shù)在 30CFU~300CFU 之間、無蔓延菌落生長的平板計數(shù)菌落總數(shù)。低于 30CFU的平板記錄具體菌落數(shù),大于 300CFU 的可記錄為多不可計。每個稀釋度的菌落數(shù)應采用兩個平板的平均數(shù)。
3 其中一個平板有較大片狀菌落生長時,則不宜采用,而應以無片狀菌落生長的平板作為該稀釋度的菌落數(shù);若片狀菌落不到平板的一半,而其余一半中菌落分布又很均勻,即可計算半個平板后乘以2,代表一個平板菌落數(shù)。(這個是很多新手會問的一個問題)
4 當平板上出現(xiàn)菌落間無明顯界線的鏈狀生長時,則將每條單鏈作為一個菌落計數(shù)。
1 若只有一個稀釋度平板上的菌落數(shù)在適宜計數(shù)范圍內,計算兩個平板菌落數(shù)的平均值,再將平均值乘以相應稀釋倍數(shù),作為每 g ( mL )樣品中菌落總數(shù)結果。
2 若有兩個連續(xù)稀釋度的平板菌落數(shù)在適宜計數(shù)范圍內時,按式( 1 )計算:
3 若所有稀釋度的平板上菌落數(shù)均大于 300CFU,則對稀釋度最高的平板進行計數(shù),其他平板可記錄為多不可計,結果按平均菌落數(shù)乘以最高稀釋倍數(shù)計算。
4 若所有稀釋度的平板菌落數(shù)均小于 30CFU,則應按稀釋度最低的平均菌落數(shù)乘以稀釋倍數(shù)計算。
5 若所有稀釋度(包括液體樣品原液)平板均無菌落生長,則以小于 1 乘以最低稀釋倍數(shù)計算。
6 若所有稀釋度的平板菌落數(shù)均不在 30CFU~300CFU 之間,其中一部分小于 30CFU 或大于300CFU 時,則以最接近 30CFU 或 300CFU 的平均菌落數(shù)乘以稀釋倍數(shù)計算。