進行培養時，動作要準確敏捷，但又不必太快，以防空氣流動，增加污染機會。不能用手觸及已消毒器皿，如已接觸，要用火焰燒灼消毒或取備品更換。

為拿取方便，工作臺面上的用品要有合理的布局，原則上應是右手使用的東西放置在右側，左手用品在左側，酒精燈置于中央。工作由始至終要保持一定順序性，組織或細胞在未做處理之前，勿過早暴露在空氣中。

同樣，培養液在未用前，不要過早開瓶；用過之后如不再重復使用，應立即封閉瓶口直立可增加落菌機會。吸取營養液、PBS、細胞懸液及其它各種用液時，均應分別使用吸管，不能混用，以防擴大污染或導致細胞交叉污染。

工作中不能面向操作野講話或咳嗽，以免唾沫把細菌或支原體帶入工作臺面發生污染。操作前用酒精擦拭超凈臺面及雙手。手或相對較臟的物品不能經過開放的瓶口上方，瓶口最易污染，加液時如吸管尖碰到瓶口，則應將吸管丟掉。

在開始實驗前要制定好實驗計劃和操作程序。有關數據的計算要事先做好。根據實驗要求，準備各種所需器材和物品、清點無誤后將其放置操作場所（培養室、超凈臺）內，然后開始消毒。這可以避免開始實驗后．囚物品不全往返拿取而增加污染機會。

無菌培養室每天都要用0.2%的新潔爾滅拖洗地面—次（拖布要專用）．紫外線照射消毒30-50min，超凈工作臺臺面每次實驗前要用75％酒精擦洗。然后紫外線淌毒30min。

在工作臺面消毒時切勿將培養細胞和培養用液同時照射紫外線，消毒時工作臺面上用品不要過多或重疊放置．否則會遮擋射線降低消毒效果。—些操作用具如移液器、廢液缸、污物盒、試管架等用75%酒精擦洗后置于臺內同時紫外線消毒。

體外培養細胞缺乏抗感染能力，所以防止污染是決定培養成功或失敗的首要條件。即便使用設備完善的實驗室。若實驗者粗心大意，技術操作不規范,也會導致污染。因而．為在一切操作中為最大可能的保證無菌．每一項工作都必須做到有條不紊和完全靠。

穿實驗服、佩戴口罩和滅菌手套，長頭發的同學應把頭發扎在腦后，佩戴的手套的上緣應該與實驗服的袖口重疊在一起，就是把袖口末端塞進手套內，并于開始操作前要用75％酒精消毒手。

如果實驗過程中手觸及可能污染的物品和出入培養室都要重新用消毒液洗手。

灼燒是一種可以去除顆粒性灰塵或棉絨的有效辦法，火焰也會造成附近的氣流上升，避免灰塵沉降。

在無菌環境進行培養或做其它無菌工作時，首先要點燃酒精燈。以后一切操作，如按裝吸管帽、打開或封閉瓶口等，都需在火焰近處并經過燒灼進行。

開啟、關閉長有細胞的培養瓶時，火焰滅菌時間要短。防止因溫度過高燒死細胞。另外膠塞過火焰時也不能時間長，以免燒焦產生有毒氣體，危害培養細胞。

但是，在生物安全柜內，點燃酒精燈進行灼燒是不合適的。

 

生物安全柜工作時，會為內部空間提供一個穩定的層流，但酒精燈的火焰會對它產生干擾，進而影響內部的無菌環境，提高了生物污染的風險。

對于小體積移液，一般特指小于1mL的液體轉移，因為其體積小，通常需要使用移液器來操作。

而小體積的移液吸頭比較短，在吸液的過程中有可能出現移液器下端也進入瓶皿內部的情況。

此時就需要特別注意，不能讓移液器碰觸到瓶皿內壁，如果碰觸了，則應該立即使用70%乙醇清潔移液器下端，然后才可以繼續往下進行實驗操作。

對于大體積移液，例如5/10/25mL或以上的液體轉移，可以用大量程的移液吸頭或大量程的電動移液器輔助移液。

但不管是什么體積的移液，都應該確保吸頭或移液管的末端內是含有棉花或透氣膠塞的，這樣可以有效避免因為移液過程中，液體吸入移液器內部造成污染。

但由于大體積移液的液體轉移速度快、量大，有時候即使有棉花，也會出現液體被吸入移液器內的現象，這時就只能停止實驗，或改用其他未被污染的移液器來操作了。

關于溶液傾倒，有時液體的轉移不需要特別精準，會把溶液從一個瓶內直接倒入另一個瓶內或管內。

在操作時，需要注意溶液從原來的容器中倒入新的容器時，瓶口應保持懸空，而不是直接接觸新容器的瓶口邊緣來完成液體轉移。

因為后者會容易出現液橋，即液體在兩個挨得很近的接觸面之間形成的水柱，這樣的水柱容易被微生物進入；同時，在傾倒的時候也要注意不要讓液體流淌在容器的外表面，因為這樣也會提高微生物污染的風險。