1 | 大腸菌群計數 | GB 4789.3 |
2 | 沙門氏菌檢驗 | GB 4789.4 |
3 | 致瀉大腸埃希氏菌檢驗 | GB 4789.6 |
4 | 商業無菌檢驗 | GB 4789.26 |
5 | 培養基和試劑的質量要求 | GB 4789.28 |
6 | 單核細胞增生李斯特氏菌檢驗 | GB 4789.30 |
7 | 乳酸菌檢驗 | GB 4789.35 |
8 | 克羅諾桿菌檢驗 | GB 4789.42 |
1.修訂標準中培養基和試劑像菌落總數一樣增加了大腸菌群計數測試片,并且規定了性能要求:應以發酵乳糖產酸產氣為陽性結果判斷為依據,也就是測試片上必須是有氣泡。同時其性能要符合GB4789.28中相關培養基的質量要求。
修訂標準中要求對于乳及乳制品,無論是VRBA平板計數還是測試片計數,培養溫度均為30 ℃ ±1 ℃,而BGLB復發酵的培養溫度依然為36 ℃ ±1 ℃。
原因分析:
由于國內外文獻報道,試驗發現對于自然污染大腸菌群的生乳,無論是使用VRBA平板計數還是測試片計數,培養溫度為30℃時乳制品中大腸菌群平板計數的結果,顯著高于培養溫度為36℃的計數結果。
2.對LST肉湯管乳糖發酵產氣的觀察修改為:小倒管或產氣收集裝置內有氣泡產生,或輕輕振搖LST肉湯管可見試管內有細密氣泡不斷上升者判斷為產氣。
3.修訂標準中平板菌落驗證試驗的選擇:
從同一稀釋度的VRBA平板上挑取典型和可疑菌落各5個,少于10個者,則挑取其全部菌落。
典型和可疑菌落的描述:
典型菌落為紅色至紫紅色,菌落周圍帶有或不帶膽鹽沉淀環,菌落直徑一般大于0.5mm。可疑菌落為紅色至紫紅色,菌落直徑一般小于0.5 mm.
內容來自分享報告《GB4789.3-2016大腸菌群計數標準修訂進展》
1.修改樣品前處理、增菌等:
修訂標準中樣品前處理:乳粉樣品從快速混勻,改用室溫浸泡1小時后再進行預增菌。
原因分析:
乳粉是經過高溫噴霧干燥的產品,其中的沙門氏菌一般處于受損狀態。乳粉中沙門氏菌檢驗的前處理, 如果進行快速混勻,適應了乳粉干燥環境的受損沙門氏菌可能會出現滲透壓休克。采用浸泡法室溫靜置一段時間后再進行預增菌,可以促進受損沙門氏菌的復蘇。
2.培養基修改:增加RVS代替SC作為選擇性增菌液,培養溫度為42℃。并且TTB培養基培養時間增加了一個36℃。
內容來自征求意見稿《GB 4789.4 食品安全國家標準 食品微生物學檢驗 沙門氏菌檢驗》
致瀉大腸埃希氏菌檢驗標準修訂要點:
1.ETEC的stp基因引物序列位點存在一定的突變,考慮優化修改。
2.根據風險監測數據,astA作為EAEC的鑒定基因在食品檢測中假陽性率較高,考慮刪除此基因。
3.增加實時熒光PCR方法
4.配套GB 29921-2021
2013:O157:H7不得檢出(4789.36)
牛肉制品、生食果蔬制品
2021:DEC不得檢出(4789.6)
牛肉制品、即食生肉制品、發酵肉制品類;
去皮或預切水果、去皮或預切的蔬菜及上述類別混合食品;
內容來自分享報告《食品安全微生物檢驗方法標準制修訂進展》
承擔單位:中國食品發酵工業研究院、龍巖出入境檢驗檢疫局
主要修訂內容:
增加生產過程抽樣
增加快速檢驗方法
刪除染色鏡檢要求
內容來自分享報告《商業無菌檢驗方法應用現狀》
主要修訂內容:
1.新增了參比培養基的質控要求:
2.新增分子生物學檢驗試劑的質控評定方法
3.新增國內菌種保藏中心菌株
CMCC:中國醫學細菌保藏管理中心
CICC:中國工業微生物菌種保藏管理中心
4.整合了附錄D和E,標準實施后,培養基生產廠商質檢和使用者驗收都需要采用現行附錄D的驗收形式。
5.新增28套培養基評價方法。
內容來自分享報告《食品安全微生物檢驗方法標準制修訂進展》、征求意見稿等。
主要修訂內容:
1.增加了OA李斯特氏菌顯色培養基配方。
2.增加了Fraser增菌肉湯(FB1、FB2)培養基和試劑;
原因分析:
由于國際、國外標準規范,ISO標準采用了Fraser增菌肉湯(FB1、FB2),分離平板包含OA李斯特氏菌顯色平板,征求意見稿參照ISO的方法,對其培養基進行調整,與國際接軌;增菌培養基由原來的“李氏增菌肉湯 LB(LB1,LB2)”改為“Fraser 增菌肉湯(FB1、FB2)”,分離培養基增加 “OA李斯特氏菌顯色平板”。
內容來自分享報告《食品安全微生物檢驗方法標準制修訂進展》
4項食品用菌種檢測方法獲得2023國家標準立項
包括檢驗項目有:雙歧桿菌(修訂)、乳球菌(制定)、片球菌(制定)、魏茨曼氏菌(制定);
標準主題構架:包含菌種計數和鑒定兩部分
計數:純菌種+食品樣品、平板計數法
鑒定(選做):
表型鑒定
生化鑒定
增加分子生物學方法:(PCR/熒光PCR)
內容來自分享報告《食品安全微生物檢驗方法標準制修訂進展》
GB 4789.35《乳酸菌檢驗》修訂情況
主要修訂內容:
1、增加了乳酸菌鑒定用實時熒光PCR方法
2、修改了乳酸菌的定義等。
內容來自分享報告《食品安全微生物檢驗方法標準制修訂進展》
GB 4789.42《克羅諾桿菌檢驗》修訂情況
主要修改內容:
1.修改標準名稱
《克羅諾桿菌屬(阪崎腸桿菌)檢驗》修改為《克羅諾桿菌檢驗》
2.修改適用范圍
克羅諾桿菌:增加嬰幼兒輔助食品
3.針對克羅諾桿菌屬不產黃色素造成漏檢風險,刪除在TSA瓊脂培養,建立克羅諾桿菌屬快速鑒定方法-PCR法。
4.為避免克羅諾桿菌屬生長受抑制,參考ISO22964-2017,修改選擇性增菌溫度為41.5℃±0.5℃。
內容來自分享報告《食品安全微生物檢驗方法標準制修訂進展》
從以上標準制修訂的方向,可以看出,標準修訂越來越嚴謹性、越來越適用,更多的站在標準使用者角度修改相關內容,完善了許多模糊的表述,增加了參考案例。測試片、PCR等快速檢驗及鑒定的方法逐漸走入國標中,從而使我國標準日益與國際標準接軌。
相信未來會有更多更成熟的方法引入到我國的標準體系中,我們現在可以去做一些技術儲備,爭取一些硬件條件,為未來的標準使用爭取一些資源。