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1、在培養物中加入某種底物與指示劑，經接種、培養后，觀察培養基的PH值變化。
2、在培養物中加入試劑，觀察它們同細菌代謝產物所生成的顏色反應。
3、根據酶作用的反應特性，測定酶的存在。
4、根據細菌對理化條件和藥品的敏感性，觀察細菌的生長情況。
生化試驗的注意事項
1、待檢菌應是新鮮培養物。培養18-24h。
2、待檢菌應是純種培養物。
3、遵守觀察反應的時間。觀察結果的時間，多為24或48小時。
4、應做必要的對照試驗。
5、提高陽性檢出率，至少挑取2-3個待檢的疑似菌落分別進行試驗。
生化試驗分類
（一）糖類代謝試驗
（二）氨基酸和蛋白質代謝試驗
（三）有機酸鹽和銨鹽代謝試驗
（四）酶類試驗
1. 糖(醇)發酵試驗
原理 糖類是作為碳源和能量來源提供細菌合成菌體成分必需的原料，由于細菌各自有不同的酶系統，故對糖(醇)類的分解能力不盡相同。有的能分解某些糖類，生成酸又生成氣體，有的雖能分解這些糖類但只能生成酸不能生成氣體，有的則根本不能分解。借此特點，可以作為鑒定細菌的依據之一。該試驗檢查細菌對加在基礎培養基中的特殊的糖發酵(降解)后產酸或產酸產氣的能力。
常用的糖、醇
單糖：葡萄糖、甘露糖醇、木糖、半乳糖、鼠李糖
雙糖：乳糖、蔗糖、麥芽糖、蕈糖
三糖：棉子糖
多糖：菊糖、肝糖、淀粉
醇類：甘露醇、山梨醇、肌醇、衛茅醇
方法
(1)試劑：糖發酵培養基中，常用的指示劑主要有酚紅、溴麝香草酚藍、溴甲酚紫和酸性復紅等。前二者顏色反應較敏感，但穩定性較差。后二者比較穩定。特別是對發酵遲緩的細菌，培養時間較長，則以后二者為優。
(2)培養基：液體糖發酵管，半固體糖發酵管，固體糖發酵管，雙糖(或三糖)高層斜面發酵管。
(3)操作：以無菌操作的方法將經分離培養的純種細菌接種到糖(醇)發酵培養基中，置溫箱內，按各類菌所要求溫度(通常為37℃)經一定時間(數小時至二周)培養，然后觀察結果。
結果
(1)接種的細菌，如能分解培養基中的糖(醇)類而生成酸，由于培養基內加有指示劑，故可使培養基中的指示劑呈酸性反應，如產生氣體，則可使半固體培養基內或液體培養基中倒置的小管出現氣泡。如若不分解則無任何反應。
糖酵解試驗
不同微生物分解利用糖類的能力有很大差異，或能利用或不能利用，能利用者，或產氣或不產氣。可用指示劑及發酵管檢驗。
記錄：
產酸不產氣，陽性，以“+”表示
產酸產氣，陽性，以“⊕”表示
不產酸產氣，陰性，以“-”表示
(2)在半固體糖發酵管中，還可以觀察細菌的動力，若為有鞭毛的細菌，則沿接種線向周圍擴散生長。若為無鞭毛菌，則僅在接種線處生長。
(3)在雙糖(或三糖)高層斜面發酵管中，由于葡萄糖含量僅為乳糖或蔗糖的1/10，如細菌只分解葡萄糖，則斜面上產生的酸少，且易被氧化并因產生氨以及細菌分解培養基中的蛋白質產生堿性物質而變弱堿性，故斜面變為粉紅色，而底層變酸，指示劑變色。若細菌分解葡萄糖，同時也分解乳糖或蔗糖時，則產酸量較多，底層和斜面均呈酸性，指示劑亦變色。若在此培養基中加入硫酸亞鐵或尿素，同時還可以觀察細菌產生硫化氫及尿素分解情況。
注意事項
(1)各種糖發酵培養基，含糖的濃度一般為5～10g/L，有時為20g/L。
(2)有些糖類，可因121℃高壓蒸汽滅菌時水解變質，特別是在堿性溶液中更易被破壞，故含糖的培養基常用115℃，15min滅菌。亦可先將糖類單獨配制成100～200g/L的水溶液，經115℃ 15min滅菌后，然后再以無菌操作的方法加入已滅菌的培養基中。此外，還可將糖的溶液用濾菌器進行濾過除菌，再加入培養基中。
(3)若應用微量發酵管，或要求培養時間較長時，應注意保持其周圍的濕度，以免培養基干燥。
2. 甲基紅(MR)試驗
原理 某些細菌分解葡萄糖的過程中產生丙酮酸，丙酮酸進一步被代謝成為乳酸，乙酸，甲酸等。使培養基的pH下降至4.5以下，加入甲基紅指示劑出現紅色為陽性；有些細菌分解葡萄糖產酸量少，或產生的酸進一步轉化為其他物質，最終的酸類較少，培養基pH較高，加入甲基紅指示劑呈黃色為陰性反應。
因此該試驗是檢查細菌發酵葡萄糖產生并保持穩定的酸性終末產物和克服體系緩沖作用的能力，某些細菌比其他細菌能夠產生更多的酸。
方法
(1)培養基：葡萄糖蛋白胨水(MR/VP培養基)。
(2)試劑：甲基紅指示劑。
(3)操作：待檢菌18～24h純培養物接種于葡萄糖蛋白胨水培養基中；37℃培養2～3d，每2ml培養液加2滴甲基紅指示劑，立即觀察。
結果
MR陽性：培養物有足夠的酸，能使培養基表面甲基紅試劑仍保持明顯的紅色(pH4.4)；
MR陰性：培養基表面呈黃色(pH6.0)；
延遲反應：橙色，應繼續孵育到4天，并重復試驗。
3. 伏普試驗(V-P試驗)
某些細菌在葡萄糖蛋白胨水培養基中能分解葡萄糖產生丙酮酸，丙酮酸縮合，脫羧成乙酰甲基甲醇，后者在強堿環境下，被空氣中氧氧化為二乙酰，二乙酰與蛋白胨中的胍基生成紅色化合物，稱V-P（+）反應。
方法(Barritt法)
(1)試劑：甲液為60g/Lα－萘酚酒精溶液；乙液為400g/L KOH溶液.
(2)操作：首先將被檢菌接種于葡萄糖蛋白胨水中，經37℃培養4d。再按每2ml培養液中加入甲液lml、乙液0.4ml，充分搖動試管，觀察結果。
結果 如立即或于數分鐘內出現紅色反應者為陽性；若為陰性應將試管置37℃中4h后再進行觀察。
4. β-半乳糖苷酶試驗
原理 細菌的酶分為結構酶和適應酶。β-半乳糖苷酶是一種誘導酶，它對半乳糖苷的作用是特異的。發酵乳糖的大腸菌類能產生β-半乳糖苷酶-滲透酶和β-半乳糖苷酶，因此能迅速地(在24～48h內)分解乳糖，并通過中間產物半乳糖和葡萄糖形成CO2和H2。非乳糖發酵菌缺少這兩種酶，因此乳糖既不能進入菌體，又不能被分解。然而，不能發酵乳糖的細菌可呈現兩種表型之一：一是G-P + ，即沒有β-半乳糖苷酶(G)，但有滲透酶(P)，因此不能發酵半乳糖苷，但能積累半乳糖苷；二是 G+P-，具有β-半乳糖苷酶(G)，但沒有滲透酶(P)。
通過使用有機化合物鄰位-硝基苯β-D-吡喃半乳糖苷(ONPG)證明有無β-半乳糖苷酶活性，可預測細菌發酵乳糖的能力。若有半乳糖苷酶陽性的細菌存在，無色的ONPG試劑被水解，釋放出黃色化合物鄰位-硝基苯酚(ONP)。陽性β-半乳糖苷酶試驗就是基于對鄰位-硝基苯酚的檢測。
方法
(1)培養基：10g/L乳糖肉湯瓊脂。
(2)試劑：0.01mol/L磷酸鹽緩沖液；鄰硝基酚β-D-半乳糖苷(ONPG)液。
(3)操作：首先將被檢菌接種到10g/L乳糖肉湯瓊脂上，經37℃培養過夜，以無菌方法取一接種環菌置于0.25ml的生理鹽水中做成菌懸液，然后加ONPG液0.25ml，置于37℃溫箱或水浴箱中，分別在20min和3h后觀察結果。
結果
如有β-半乳糖苷酶，一般在20～30min即呈現黃色者為陽性；如無此酶則24h不變色。
5. 七葉苷水解試驗
原理 某些細菌(如糞鏈球菌)可水解七葉苷，生成葡萄糖和七葉素(為一種珊瑚狀的白色結晶)。七葉素可與培養基中的檸檬酸鐵試劑的二價鐵離子起反應生成黑色的化合物沉淀，使培養基變黑。
方法
(1)培養基：七葉苷培養基。
(2)操作：以無菌方法將試驗菌接種到七葉苷瓊脂斜面培養基上，經37℃ 18～24h培養，觀察結果。
結果 培養基變黑色者為試驗陽性。若將糞鏈球菌接種到七葉苷液體培養基中，經37℃ 4～6h培養，培養基即可。
6. 石蕊牛乳試驗
原理 牛乳中含有大量的乳糖和酪蛋白，營養豐富，一般細菌均可在其中生長。一種細菌在石蕊牛奶中可表現一種或幾種代謝特性，每種代謝特性對一個特定細菌來說都是特異的。這樣，就有助于細菌的鑒定：①乳糖發酵；②石蕊還原；③凝固蛋白；④蛋白陳化(消化)；⑤氣體產生。
有的細菌如產氣莢膜梭菌，對牛乳具有強烈發酵反應，產酸、產氣、凝固、胨化幾乎同時發生。所產生的氣體，可將培養基表層的凡士林沖至管口，牛乳可全被胨化變清，這種被稱為“洶涌發酵”是為該菌所特有。有的細菌不發酵乳糖，而分解含氮物質，生成氨及胺，使培養基變堿性，石蕊指示劑變藍紫色。
方法
(1)培養基：石蕊牛乳培養基。
(2)操作：首先將培養基表面的一層凡士林在酒精燈上熔化，然后無菌取被檢菌接種到石蕊牛乳培養基中。接種后將培養基直立，置37℃溫箱培養，觀察結果。
結果
產酸：若發酵糖產酸，使石蕊指示劑變為粉紅色。產氣：若發酵乳糖同時產氣者，可沖開覆蓋在培養基上的凡士林。凝固：若發酵乳糖產酸甚多，可使酪蛋白凝固。胨化：若將凝固的酪蛋白，繼續水解成蛋白胨，此時牛乳培養基的上段則變清。產堿：若不發酵乳糖，分解含氮物質，生成氨及胺，使培養基變堿性，石蕊指示劑變藍紫色。
不同細菌分解蛋白質能力不同，可利用不同氮源來合成菌體蛋白質，可通過檢測加入蛋白質分解代謝后的產物或pH變化鑒定細菌。
1.靛基質（Imdole）試驗
某些細菌能分解蛋白胨中的色氨酸，生成吲哚。吲哚的存在可用顯色反應表現出來。吲哚與對二甲基氨基苯醛結合，形成玫瑰吲哚，為紅色化合物。
方法
(1)培養基：蛋白胨水。
(2)試劑：Kovac試劑；歐氏試劑。
(3)操作：純培養物接種蛋白胨水培養基35℃培養24～48h，沿管壁徐徐加入Kovac氏試劑或歐氏試劑0.5ml，分為兩層，觀察。
結果
兩層液體交界處出現紅色為陽性，無色為陰性。
2. 硫化氫試驗
原理 某些細菌能分解培養基中的含硫氨基酸生成H2S， H2S可與加入培養基中的鉛或鐵離子生成黑色硫化物。
方法與結果
(1)瓊脂穿刺法：
培養基：三糖鐵培養基、含硫酸亞鐵(或醋酸鉛)的半固體培養基。
操作：將試驗細菌以接種針沿管壁穿刺接種到含醋酸鉛或硫酸亞鐵培養基中，經37℃ 24h培養后，觀察結果。
結果：培養基變黑色為陽性。當產生硫化氫量少時，為了便于觀察結果，在穿刺接種培養時，一定要沿培養基管壁進行。
(2)醋酸鉛試紙法：
培養基：含胱氨酸的半固體培養基、浸有醋酸鉛的濾紙條。
操作：待檢菌穿刺接種培養基，懸掛醋酸鉛紙條，37℃培養24～48h。
結果：試紙呈黑色為陽性。該法較敏感。
3. 尿素酶試驗
原理 有些細菌(如某些變形桿菌)具有尿素分解酶，能分解尿素形成大量的氨,使培養基pH上升，而變成堿性，使含有酚紅指示劑的培養基變成紅色。
方法
(1)培養基：尿素瓊脂。
(2)操作：將待檢菌接種于尿素培養基，37℃培養18～24h，觀察結果，如為陰性應繼續觀察4d。
結果 培養基變紅為陽性，不變為陰性。
4. 明膠液化試驗
原理 某些細菌產生明膠酶可使明膠分解，失去凝固力，使其由半固體轉化為液體狀態。天然存在的蛋白質分子太大不能進入菌體細胞，因此，細菌為了利用這些蛋白質，首先必須將其分解為較小的組分。某些細菌分泌細胞外類蛋白水解酶(明膠酶)來分解蛋白質，這種能力有助于細菌的鑒定。
方法
(1)培養基：明膠培養基
(2)操作：將待檢菌穿刺接種于明膠培養基，同時設置對照管(未接種細菌)，20℃培養5～7d，觀察。在孵育期間，每24h取出試管(包括含細菌的試驗管相對照管)放冰箱(或冰浴)內約2h，檢查明膠是否已被消化(液化)，每天一次，直到7d，除非發生液化。有許多菌種要證實明膠液化需要延長孵育時間。
結果 半固體培養基不再凝固為陽性。
注意事項:
明膠在≤20℃時為固體，≥35℃時則為液體。從凝膠(固態)轉變為液體大約在28℃。所以，明膠管在≥35℃下孵育時，在決定是否液化以前，必須先放在冰箱或冰浴中冷卻一段時間。因細菌在培養基的表面生長引起液化，當明膠管還溫熱時不要搖動，否則液化的明膠與培養基液體混合，由此忽略陽性結果，造成假陰性。
5. 苯丙氨酸脫氨酶試驗
原理 某些細菌產生苯丙氨酸脫氨酶，使苯丙氨酸脫去氨基，形成苯丙酮酸和游離氨，加入FeCl3試劑與苯丙酮酸螯合后出現綠色產物，隨后綠色可褪去。延長時間后，所生成的綠色會較快褪色。苯丙酮酸如與檸檬酸鐵相遇則產生棕黑色。
方法
(1)培養基：苯丙氨酸培養基。
(2)試劑：100g/L FeCl3溶液。
(3)操作：被檢菌濃厚接種于苯丙氨酸瓊脂斜面上，37℃培養18～24h，滴加100g/L FeCl3試劑數滴于斜面上，自上流下觀察。
結果 須在5min內作出判斷，出現綠色為陽性。
6. 精氨酸、鳥氨酸、精氨酸試驗
(1)賴氨酸：賴氨酸經過賴氨酸脫羧酶作用生成尸胺和CO2。
(2)鳥氨酸：鳥氨酸經鳥氨酸脫羧酶的脫羧作用，產生腐胺和CO2。
(3)精氨酸：L-精氨酸經精氨酸脫羧酶的作用，可產生精胺和CO2。
方法
(1)培養基：氨基酸脫羧酶培養基。
(2)操作：待檢菌接種于氨基酸培養基及對照培養基，35℃培養1～4d。延長時間則常有假陽性出現，假陽性系由蛋白胨中其他種氨基酸分解而造成，故必須同時接種對照管。
結果 檢測培養基由黃色變紫色為陽性，黃色為陰性，對照(無氨基酸)為黃色。
陽性反應試驗管顏色變化過程
紫色→黃色→紫色
原理：
對照管呈黃色，說明有細菌生長。在培養的早期（10~12h），細菌發酵葡萄糖產酸使培養液PH下降，指示劑溴甲酚紫由紫色變為黃色，以后由于氨基酸脫羧生成胺，PH又回升至堿性，指示劑顯紫色。
7. 精氨酸雙水解試驗
原理 細菌分解精氨酸產堿不限于精氨酸脫羧酶。精氨酸雙水解酶可使精氨酸經過兩次水解，產生鳥氨酸、兩分子氨和一分子CO2。經氣相色譜分析證明，沙門菌分解精氨酸系由于精氨酸雙水解酶，而大腸埃希菌則系由于精氨酸脫羧酶。
方法
(1)培養基：含精氨酸的氨基酸脫羧酶試驗培養基及對照培養基。
(2)操作：自斜面培養物接種，作腸桿菌科的鑒定時可覆蓋滅菌的液狀石蠟，作假單胞菌屬的鑒定時則不能覆蓋液狀石蠟。于37℃培養。
結果 指示劑顏色轉為堿性時為陽性。即溴甲酚紫轉為紫色，酚紅轉為紅色。但由培養基pH的改變不能證明是由精氨酸脫羧酶或由精氨酸雙水解酶，欲鑒別應作氣相色譜分析。
8. 肉渣消化試驗
原理 肉渣消化試驗是測定細菌對蛋白質的另一種分解能力。某些梭菌在生長過程中可將肉渣消化。例如肉毒梭菌有很強的消化能力，皰肉培養基可被消化而呈黑色，有助于和其他梭菌的鑒別。
方法
(1)培養基：皰肉培養基。
(2)操作：試驗菌按常規法接種于皰肉培養基，用蠟筆于培養基的肉渣上緣畫一橫線作為標記。于37℃培養數日。
結果 觀察管內肉渣的高度有無變化，即可判定肉渣是否已被部分消化。
9. 凝固血清消化試驗
原理 某些細菌液化凝固血清，系由于這些細菌產生一種胞外蛋白酶的作用所致
方法
(1)培養基：呂氏血清培養基。
(2)操作：取試驗細菌，以無菌方法接種于呂氏血清斜面上，經37℃培養數日，觀察結果。
結果 凝固之血清發生液化為陽性。
1. 檸檬酸鹽利用試驗
原理 有些細菌能利用檸檬酸鹽作為唯一的碳源，能在除檸檬酸鹽外不含其他碳源的培養基上生長，分解檸檬酸鹽，生成碳酸鈉，使培養基變成堿性。
方法
(1)培養基：檸檬酸鹽培養基。
(2)操作：被檢菌接種于檸檬酸鹽斜面培養基上，35℃培養l～4d，觀察。
結果 培養基由淡綠色變為深藍色為陽性，不變色為陰性。
指示劑為：1%溴麝香草酚藍(酒精溶液)或0.04%苯酚紅 10mL/1000mL水
用脫脂棉過濾，制成后為黃綠色。
斜面有菌苔生長，培養基斜面變為藍色或深藍色，為陽性，記+；
無菌苔生長，培養基斜面仍為綠色者，為陰性，記-
2. 馬尿酸鈉水解試驗
三氯化鐵法
原理：B群鏈球菌具有馬尿酸水解酶，可使馬尿酸水解為苯甲酸和甘氨酸，苯甲酸與三氯化鐵試劑結合，形成苯甲酸鐵沉淀.
方法
培養基:馬尿酸鈉培養基。
試劑：三氯化鐵溶液。
操作：待檢菌接種馬尿酸鈉培養基，35℃培養48h，離心沉淀，取上清液0.8mL加入三氯化鐵溶液0.2mL，立即混合均勻，經10～15min觀察結果。
結果：出現穩定的沉淀物為陽性，輕搖后沉淀物溶解為陰性。
茚三酮法
原理：馬尿酸被細菌分解后，形成苯甲酸及甘氨酸。甘氨酸在茚三酮的作用下，經氧化脫氨基反應，生成氨，CO2和相應的醛，而茚三酮則生成了還原型茚三酮。其中形成的氨和還原型茚三酮，與殘留的茚三酮起反應，形成紫色化合物。
方法：
試劑：l％馬尿酸鈉水溶液；3.5g茚三酮溶于100mL的1：1的丙酮，丁酮混合溶液。
操作：0.4ml待檢菌與等量的1％馬尿酸鈉水溶液混合后，35℃培養2h，加入0.2ml茚三酮試劑，振搖后觀察。
結果：出現紫色為陽性。
3. 丙二酸鹽利用試驗
原理 某些細菌利用丙二酸鹽作為唯一碳源時，丙二酸鈉可被分解生成碳酸鈉，使培養基變堿性。
溴麝香草酚藍：溴麝香草酚藍是一種酸堿指示劑，變色范圍pH6.0(黃)～7.6(藍)。普通水是中性，pH也就是7左右，差不多呈淡藍，溶有二氧化碳后，由于會形成碳酸，碳酸是弱酸，因此pH不會降太多，變黃。當中過渡顏色是綠色。
方法
(1)培養基：丙二酸鈉培養基。
(2)操作：被檢菌接種于丙二酸鹽培養基，于35℃培養24～48h后觀察結果。
結果：培養基由綠色變為藍色為陽性，顏色無變化為陰性。
1. 氧化酶試驗(Kovacs試驗)
原理 氧化酶(又稱細胞色素氧化酶)是細胞色素呼吸酶系統的終末呼吸酶，能使還原型的細胞色素C氧化成氧化型的細胞色素C，氧化型細胞色素C又使對苯二胺氧化，生成紅色的醌類化合物。
方法
(1)試劑：10g/L鹽酸四甲基對苯二胺水溶液，或10g/L鹽酸二甲基對苯二胺水溶液。
(2)操作：取濾紙片蘸取待測菌落少許，加試劑一滴，觀察顏色變化。也可用滴管吸取試劑，直接將一滴滴在待測菌菌落上，觀察顏色變化。
結果：陽性者立即呈現粉紅色或紅色，顏色逐漸變深至深紫色。
2. 過氧化氫酶試驗(觸酶試驗)
原理 過氧化氫酶又稱觸酶，可使細菌代謝過程中的過氧化氫分解為水和氧。
方法
(1)試劑：新鮮配制的3％過氧化氫水溶液。
(2)操作：挑取1環固體培養基上的待測菌菌落，放于潔凈玻片上或試管內，滴加3％過氧化氫數滴，觀察結果。實驗時必須用18～24h新鮮培養物。陳舊培養物可能使觸酶失活，出現假陰性結果。此外，不宜挑取血瓊脂上的菌落，因紅細胞內含有觸酶，會導致假陽性結果。
結果 30s內有大量氣泡產生者為陽性，無氣泡產生者為陰性。
3. 硝酸鹽還原試驗
原理 某些革蘭氏陰性桿菌在代謝過程中，能將培養基中的硝酸鹽還原為亞硝酸鹽，亞硝酸鹽與醋酸作用，生成亞硝酸，亞硝酸與試劑中的對氨基苯磺酸反應生成重氮苯磺酸，再與α-萘胺結合，生成紅色的N-α萘胺偶氮苯磺酸。
方法
(1)培養基：硝酸鹽培養基。
(2)試劑：①甲液：對氨基苯磺酸0.8g，5mol/L醋酸100ml；②乙液：α-萘胺0.5g，
5mol/L醋酸100ml。
操作：待測菌株接種到硝酸鹽培養基中，35℃18～24h培養后，加入0.1ml甲、乙液等量混合液于試管內，觀察結果。
結果 出現紅色為陽性，無顏色變化為陰性。
4.過氧化物酶試驗
（1）原理:過氧化物酶的作用是將過氧化氫中的氧轉移給可被氧化的物質。
（2）其反應如下：試驗時，若以聯苯胺(4,4-二氨基聯苯 )作為被氧化的物質，試驗細菌如有過氧化物酶存在時，加入過氧化氫可使苯胺氧化成為藍色的聯苯胺藍。
（3）方法
試劑：鹽酸聯苯胺溶液；3％過氧化氫溶液。
操作：將鹽酸聯苯胺溶液與過氧化氫溶液等量混合后，滴加于菌落上，立即觀察結果。
（4）結果
陽性者于2min內呈現藍色。
5.脫氫酶試驗
（1）原理
細菌的脫氫酶可使相應的作用物脫去氫，但此作用需要一個可還原的化合物作為受氫體。
若用美藍（亞甲藍，Methylene blue）作為受氫體的話，細菌如有脫氫酶存在，可使美藍還原成美白(無色)。但是，美白易被空氣中氧氣所氧化，故此試驗應在隔絕空氣下進行。
染料、醫藥、鑒識血跡
如果用無色TTC（2,3,5-氯化三苯基四氮唑 ）作為受氫體，在有脫氫酶存在的情況下，TTC可以接受氫而成為紅色的Formazan（甲臜zā ) 。后者不再被氧氣所氧化，所以試驗不必在密閉的條件下進行。
（2）方法
試劑：1︰30000美藍水溶液；pH7.4磷酸鹽緩沖液；0.1mol／L的作用物水溶液。
操作：①取試驗菌肉湯培養物10ml，離心后以緩沖液洗2次，再加緩沖液5ml，制成菌液。②取試管3支，每管加美藍水溶液0.5ml，于第1管和第3管各加菌液1ml，第2管加緩沖液1ml，置37℃水浴中15min。③第1管和第2管各加作用物2ml，第3管加緩沖液2ml。④各管加無菌液狀石蠟0.5ml，使覆蓋于液面上。⑤置37℃水浴中，每5min觀察一次，記錄美藍變白時間，共觀察2h。
(3)結果
若第1管變白即為相應作用物的脫氫酶陽性，不變色為陰性。第2管與第3管為對照管，應不變色。
6. 氧化三苯基四氮唑試驗(TTC試驗)
(1)原理
部分細菌可還原無色可溶性的氯化三苯基四氮唑，成為紅色的三苯甲臜(Formazan)。
(2)方法
(i)試劑
貯存液：用無菌蒸餾水配制Na2HPO4飽和液，取氯化三苯基四氮唑(TTC)775mg，溶于100mlNa2HPO4飽和液中混勻后，放置于暗處，可保存2～3個月。
應用液：取貯存液4ml，加Na2HPO4飽和液至100ml，混勻后，置暗處，可用2～4周。
(ii)操作：①以無菌吸管吸取清潔中段尿2ml置于無菌試管中。②加TTC試劑應用液0.5ml。③混勻后，置37℃,8h培養后觀察結果。
(3)結果
出現紅色者為陽性，淡紅色者為弱陽性，不變色者為陰性。
7. 脂酶試驗
(1)原理
某些細菌產生卵磷脂酶，即α-毒素，在有鈣離子存在時，能迅速分解卵磷脂，生成混濁沉淀狀的甘油酯和水溶性的磷酰膽堿。
(2)方法
培養基：卵黃瓊脂培養基。
操作：將待檢菌劃線接種于卵黃瓊脂平皿上，于35℃培養3～6h。
(3)結果
產生卵磷脂酶的細菌，培養3h后，在菌落周圍形成乳白色混濁環，6h后擴散至5～6mm。
8. 磷酸酶試驗
(1)原理
磷酸酶是一種單膦酸酯的水解酶，可使單磷酸酯水解，其反應可根據反應基質的不同而異，如用磷酸酚酞為基質，經磷酸酶水解后可釋放出酚酞，在堿性環境中可呈紅色。
(2)方法
培養基：于1000ml溶化的適宜瓊脂培養基并冷至45℃時，加入過濾除菌的1％磷酸酚酞溶液lml，搖勻后傾注平板。
操作：取被檢菌的純培養物接種上述平板，于35℃培養18～24h，于平板蓋內加l滴濃氨水，熏蒸片刻。
(3)結果
如有酚酞釋出，菌落即變為粉紅色
9. DNA酶試驗
(1)原理
DNA酶可將脫氧核糖核酸(DNA)長鏈水解成由幾個單核苷酸組成的寡核苷酸鏈。
長鏈DNA可被酸沉淀，水解后產生的寡核苷酸則可溶于酸，在DNA瓊脂平皿上加入鹽酸后，在菌落周圍形成透明環。
(2) 方法
培養基：DNA酶試驗培養基。
操作：點狀接種待檢菌于DNA瓊脂平皿上，35℃培養18～24h，用l mol/L鹽酸傾注平皿，觀察結果。
(3)結果
菌落周圍產生透明環為陽性，無透明環為陰性。
10. 血漿凝固酶試驗
(1)原理
金黃色葡萄球菌可產生凝固酶，使血漿中的纖維蛋白原轉變為纖維蛋白，附著于細菌的表面，產生凝固。
凝固酶可分為兩種，一種是與細胞壁結合的凝固酶，可用玻片法測定；另一種是菌體生成后釋放于培養基中的游離凝固酶，可用試管法測出。
(2)方法
(i)玻片法：在玻片上分別滴加新鮮人或兔血漿及生理鹽水各一滴，挑取待檢菌的菌落，
分別與血漿和生理鹽水混合，立即觀察結果，如血漿中有明顯顆粒出現，而生理鹽水中無自凝現象為陽性。
(ii)試管法：小試管3支內各加入l︰4稀釋的新鮮人或兔血漿0.5ml，①其中一支加待檢菌18～24h肉湯培養物0.5ml，②另一支加陽性菌株18～24h肉湯培養物0.5ml，③再一支加肉湯培養基0.5ml為陰性對照，輕振混勻。3支試管放37℃水浴中3～4h，觀察結果。
(3)結果
待檢菌株管和陽性菌株管出現凝固，陰性對照管不出現凝固，為陰性。
