1、樣品的制備和稀釋倍數(shù)的選擇
 

  對于冰凍的樣品，在接種前要放到0~4℃的冰箱中解凍。固體樣品要用滅菌刀或鑷子從不同部位采取試驗材料并混合，在無菌操作下充分研細，混勻，做成均勻稀釋液。樣品制備的整個過程都應(yīng)在無菌狀態(tài)下進行，以防污染。任何樣品在打開包裝前，都要在取樣開口處的周圍表面進行消毒。以上過程的誤操作是：冰凍樣品的解凍時間過長，導(dǎo)致細菌增殖，使實測結(jié)果偏高；固體樣品取樣不均衡，稀釋液未充分混勻，使所測結(jié)果準(zhǔn)確度降低；取樣時未進行外包裝消毒，引起樣品污染。
 

  充氣飲料應(yīng)在無菌條件下進行排氣；酸性樣品用經(jīng)過滅菌的20~30% 碳酸鈉溶液調(diào)整pH 值到中性；含鹽量較高的樣品應(yīng)用滅菌蒸餾水進行稀釋。誤操作是：充氣飲料未經(jīng)排氣，使樣品接種量偏低；酸性樣品未調(diào)pH 值，使不適合酸性狀態(tài)下生長的細菌受抑制；高鹽樣品仍用生理鹽水進行稀釋，使不適于高鹽狀態(tài)下生長的細菌受抑制，結(jié)果均使實測值偏低。
 

  不同的食品其「菌落總數(shù)」的檢出限量也不一致。醬油、奶制品、熟肉制品等細菌含量一般偏高，稀釋度可相應(yīng)選擇較大的，如1:100 和1:1000 等，而飲料、糕點類樣品中細菌量偏低，稀釋度應(yīng)選擇較小的，如液體樣品可選原樣，固體樣品選1:10 等。誤操作是或者選擇的稀釋度過大，使得菌落生長稀少，或者稀釋度過小，菌落生長密度高，難以計數(shù)，導(dǎo)致實測結(jié)果或偏高或偏低。
 

2、接種、培養(yǎng)過程中應(yīng)注意的問題
 

  接種時，用移液管吸取稀釋液不應(yīng)用吸球，而要用管口上部塞有脫脂棉球的經(jīng)過高溫烘烤的移液管，并且用嘴吸取，以防產(chǎn)生交叉污染。稀釋液加入平皿后，應(yīng)在盡可能快的時間內(nèi)傾入瓊脂（傾倒瓊脂時，應(yīng)保證瓊脂溫度在50~60℃，溫度過高，易殺死細菌；溫度過低，則瓊脂提前凝固，導(dǎo)致檢測失敗），并立即在桌面上推旋平皿，使樣液與瓊脂混合均勻，切忌推旋動作過大，將瓊脂濺到平皿蓋上，影響測定結(jié)果。
 

  平皿內(nèi)瓊脂凝固后，不要長久放置后才翻轉(zhuǎn)平皿培養(yǎng)，而應(yīng)在瓊脂凝固后立即將平皿翻轉(zhuǎn)予以培養(yǎng)，這樣可避免菌落蔓延生長，難以計數(shù)。

配制、分裝稀釋液或傾注平板不能在日光直射下進行，以防強烈的日光將細菌殺死。
 

  在培養(yǎng)時，恒溫培養(yǎng)箱的溫度不能過高，以免出現(xiàn)蔓延生菌的趨勢，但也要防止因通風(fēng)和空氣循環(huán)而造成的培養(yǎng)基太干，而影響細菌的正常生長。
 

3、滅菌消毒過程中應(yīng)注意的問題
 

  細菌檢測過程中所用到的一切用具和培養(yǎng)基都需經(jīng)過滅菌程序。接種室要經(jīng)常用消毒液進行地面、墻面和桌面的消毒處理。實驗進行前，還要經(jīng)紫外燈照射殺菌。檢測人員的實驗服也要經(jīng)常用消毒液浸泡消毒。凡是能在高溫下烘烤的玻璃器皿、金屬器械等都應(yīng)用專用紙包好并在170℃烘烤3 小時以上，以徹底滅菌。培養(yǎng)基和液體試劑，則要在高壓鍋內(nèi)進行滅菌。高壓鍋使用時應(yīng)注意在升壓前要放凈鍋內(nèi)殘存的空氣，以保證所需的壓力，達到滅菌效果。滅菌效果的好壞可通過空白試驗確定。空白試驗有空氣空白、稀釋用水空白、器皿空白等，完美的空白試驗平板上應(yīng)該無細菌生長。
 

4、菌落計數(shù)和檢測結(jié)果報告中應(yīng)注意的問題
 

  菌落計數(shù)在完成培養(yǎng)后應(yīng)立即進行，以防細菌繼續(xù)生長蔓延影響實測結(jié)果。由于不小心、視力疲勞或菌落沒有辨認(rèn)好，均可導(dǎo)致錯誤的結(jié)果，因此，檢測人員在計數(shù)時應(yīng)采取多人同時進行計數(shù)的方法，以避免這種情況造成的誤差。
 

  如果所有稀釋度的平板均無細菌生長，則檢測報告應(yīng)以最低稀釋度報出，如最低稀釋度為1，則報為＜1；若最低稀釋度為1:10，則報為＜10，而不能報為「未檢出」。
 
  以上所述，均是在實際檢測「菌落總數(shù)」過程中易發(fā)生誤操作之處。只有檢測人員嚴(yán)格按要求進行實際操作，避免產(chǎn)生上述錯誤，才能保證科學(xué)、準(zhǔn)確地得出符合樣品實際的檢測結(jié)果，體現(xiàn)技術(shù)監(jiān)督檢測工作的科學(xué)性和公正性。