一、革蘭氏陽性細菌,轉化過程的幾個階段:
1.細菌感受態的形成
由于分泌一種稱為感受態因子的小蛋白而導致細菌感受態的形成。
2.轉化因子的吸收
雙鏈DNA片段與感受態受體菌的細胞表面特定位點結合,并激活臨近的核酸酶。DNA雙鏈中的一條單鏈逐步降解,同時另一條單鏈逐步進入細胞。
3.整合復合物前體的形成
一種特殊蛋白與單鏈DNA結合,有效保護單鏈DNA免遭核酸酶的降解,并將其引導至受體菌染色體DNA處。
4.單鏈DNA轉化因子的整合
轉化DNA單鏈可以通過同源重組,置換受體細胞染色體DNA的同源區,形成異源雜合雙鏈DNA結構。
5.轉化子的形成
受體菌染色體組進行復制,雜合區段亦半保留復制,當細胞分裂后,此染色體發生分離,于是新形成一個轉化子。
二、影響轉化的因素
1.DNA能否進入細胞;
2.DNA進入細胞后的穩定性;
3.質粒DNA的大小,大質粒的轉化效率低于小質粒,到目前,大于30kb的質粒,轉化效率仍很低;
4.DNA的濃度、純度和形狀;
5.誘導感受態細菌所用的離子的種類和濃度;
6.熱休克時間的長短及平板培養條件等。