食品伙伴網(wǎng)注:本方法源自奶牛乳房炎防治技術(shù)指南(試行)(農(nóng)醫(yī)發(fā)[20l0]29號(hào))
引起臨床型乳房炎或者亞臨床型乳房炎的鏈球菌常見(jiàn)的有無(wú)乳鏈球菌、停乳鏈球菌以及乳房鏈球菌。
1主要試劑和試驗(yàn)方法
CAMP試驗(yàn):在血瓊脂平板上用金黃色葡萄球菌培養(yǎng)物劃一條直線,然后將鏈球菌培養(yǎng)物劃一條線,與金黃色葡萄球菌培養(yǎng)物的劃線相互垂直,但不要接觸,二者相距3-5mm,各鏈球菌分離菌劃線間距l(xiāng)0~20mm。置37℃溫箱內(nèi)培養(yǎng)24h后觀察結(jié)果。在兩劃線交界處出現(xiàn)箭頭樣的溶血區(qū)為陽(yáng)性。
2乳樣的采集
選取出現(xiàn)臨床癥狀(或者懷疑為亞臨床型乳房炎)乳房炎奶牛,先用溫水,再用0.2%新潔爾滅擦洗乳房,最后用70%的酒精擦拭乳頭。采樣者同時(shí)進(jìn)行手指擦拭消毒。每個(gè)乳室先擠去頭2~3把奶,以排除污染的雜菌,每頭奶牛取乳樣5mL于無(wú)菌乳樣杯中,待檢。
3病原菌的分離培養(yǎng)
初步診斷:將少量乳汁涂片、革蘭氏染色、鏡檢。如發(fā)現(xiàn)圓球形革蘭氏陽(yáng)性細(xì)菌可懷疑為鏈球菌。
分離培養(yǎng):將乳樣搖勻,分別取適量接種于營(yíng)養(yǎng)肉湯(10%血清)、鮮血瓊脂、麥康凱瓊脂培養(yǎng)基(平板)后,置于37℃溫箱培養(yǎng)24~48h。觀察每個(gè)平板中細(xì)菌生長(zhǎng)的情況,記錄菌落生長(zhǎng)表現(xiàn)。
普通瓊脂平板上,37℃,24~72h培養(yǎng)后,未見(jiàn)到菌落。
鮮血瓊脂平板上長(zhǎng)有灰白色、半透明表面光滑圓形隆起的小菌落,出現(xiàn)溶血現(xiàn)象,如果是β溶血?jiǎng)t疑為無(wú)乳鏈球菌,如果為α溶血,疑為停乳鏈球菌或者乳房鏈球菌,如為γ溶血,則疑為乳房鏈球菌。
血清肉湯中生長(zhǎng)初呈均勻渾濁,管底出現(xiàn)絮狀沉淀,上清變得透明。
挑取典型菌落涂片、染色、鏡檢,鏡檢如呈球狀,短鏈狀或者長(zhǎng)鏈狀排列,無(wú)芽胞、莢膜,革蘭氏染色陽(yáng)性則疑為鏈球菌。
4生化鑒定
鏡檢形態(tài)符合鏈球菌特性,且觸酶試驗(yàn)陰性細(xì)菌,即鑒定為鏈球菌屬細(xì)菌。若細(xì)菌CAMP試驗(yàn)陽(yáng)性,不水解七葉苷和馬尿酸鈉,即鑒定為無(wú)乳鏈球菌;若細(xì)菌CAMP試驗(yàn)陰性,不水解七葉苷和馬尿酸鈉,即鑒定為停乳鏈球菌;若細(xì)菌CAMP試驗(yàn)陰性,水解七葉苷和馬尿酸鈉,即鑒定為乳房鏈球菌。
5動(dòng)物試驗(yàn)
對(duì)實(shí)驗(yàn)動(dòng)物,只有停乳鏈球菌具有致病性,將其18h血清肉湯培養(yǎng)物0.5mL注入小白鼠腹腔,或給家兔靜脈接種l~2mL,可使動(dòng)物在1周內(nèi)死亡。對(duì)接種后發(fā)病、死亡小鼠(家兔)的肝臟進(jìn)行病原菌重分離。進(jìn)行菌落涂片、革蘭氏染色、顯微鏡檢查,觀察所分離菌株是否為原接種菌。如果是則進(jìn)一步確定病原菌為停乳鏈球菌。其他兩種鏈球菌并不能使試驗(yàn)動(dòng)物致死。