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由酶聯(lián)免疫吸附實驗法可知，酶標儀應(yīng)該用比色法來分析抗原或抗體的含量，即它應(yīng)依照比色原理進行工作。實際上，酶標儀就是一臺變相的光電比色計或分光光度計，其基本工作原理與主要結(jié)構(gòu)和光電比色計幾乎相同。圖1是一種單通道、自動進樣的酶標儀的工作原理圖。
圖1 一種酶標儀光路系統(tǒng)
光源燈發(fā)出的光線經(jīng)過濾光片或單色器后，成為一束單色光束。該單色光束經(jīng)過塑料微孔板中的待測標本，被標本吸收掉一部分后，到達光電檢測器。光電檢測器將投射到其上面的光信號的強弱變成電信號的大小。此電信號經(jīng)前置放大、對數(shù)放大、模數(shù)轉(zhuǎn)換等模擬信號處理后，送入微處理器進行數(shù)據(jù)處理和計算。最后由顯示器和打印機將測試結(jié)果顯示、打印出來。
微處理機還通過控制電路來控制X、Y方向的機械驅(qū)動機構(gòu)的運動。但對于非自動型的酶標儀，它是用手工來移動微孔板的，可以省去X、Y方向的機械驅(qū)動機構(gòu)及其電路，這樣的儀器體積更小，結(jié)構(gòu)也更簡單。
微孔板是一種用來盛裝待測樣本的透明塑料板，板上有多排小孔，如有40孔板、55孔板和96孔板等多種規(guī)格。每個小孔可以盛放零點幾毫升的溶液。根據(jù)儀器的不同，既可以一個孔一個孔地檢測，也可以一排孔一排孔地檢測。
酶標儀既可以使用和分光光度計相同的單色器，也可以使用干涉濾光片來獲得單色光。和光電比色計一樣，使用濾光片作過濾裝置時，將濾光片設(shè)計到微孔板的前面和后面效果是一樣的。
光源燈發(fā)出的光，經(jīng)過聚光鏡、光闌后，到達反射鏡，經(jīng)反射鏡作90°反射后，垂直通過比色液，然后再經(jīng)濾光片到達光電管。
一般酶標儀的光束既可以設(shè)計成從上到下通過比色液，也可以設(shè)計成從下到上通過比色。
酶標儀有單通道和多通道兩種類型，單通道又分為自動型和手動型兩種。其中，自動型的儀器設(shè)有X和Y兩個方向的驅(qū)動機構(gòu)，在機械裝置的驅(qū)動下，微孔板上的小孔一個個依次進入光束下面測試。手動型靠手移動微孔板來進行測量。
在單通道酶標儀的基礎(chǔ)上，又發(fā)展了多通道、全自動型酶標儀。多通道酶標儀一般都是自動型的，它設(shè)有多個光束和多個光電檢測器。如8通道的儀器，設(shè)有8條光束（或8個光源）、8個檢測器和8個放大器。在機械驅(qū)動裝置的作用下，樣品被8個一排、8個一排檢測。多通道酶標儀的檢測速度快，但其結(jié)構(gòu)比較復(fù)雜，價格也較貴，多用于大中型醫(yī)院。
酶標儀的其他部分的結(jié)構(gòu)，與光電比色計和小型生化分析儀基本相同。
酶標儀和普通光電比色計的不同之處在于：
1)盛裝比色液的容器不是使用比色皿，而是使用了塑料微孔板，塑料微孔板常用透明的聚乙烯材料制作，之所以采用塑料微孔板來作固相載體，是利用它對抗原或抗體有較強的吸附這一特點；
2)酶標儀的光束是垂直通過待測液的；
3)酶標儀通常不使用A而是使用光密度OD來表示吸光度。
酶標儀和分光光度計的主要區(qū)別是什么呢？具體差別體現(xiàn)在以下三個方面：
1)盛裝待測溶液的容器：分光光度計用的是比色皿，酶標儀使用的是塑料微孔板(酶標板)。比色皿只能起到盛裝溶液的作用，每個比色皿一次只能盛裝一種溶液。
酶標板常用透明的聚乙烯材料制成，對抗原抗體有較強的吸附作用，因此用它作為固相載體，酶標板通常為48孔或96孔，每個微孔可以盛裝不同的溶液。
2)光路的方向：分光光度計是水平光路，而酶標儀則是垂直光路。由于酶標板盛樣本的塑料微孔板是多排多孔的,光線只能垂直穿過，因此酶標儀的光束都是垂直通過待測溶液和微孔板的,光束既可是從上到下，也可以是從下到上穿過比色液。
垂直光的特點是標本吸光度受液體濃縮或稀釋的影響小，不足之處是受被測樣本液面是否水平、酶標板透光性、孔底是否平整等的影響較大。
3)光路的長度：由于光密度(OD值)與吸光系數(shù)，待測組分的濃度以及光路長度成正比關(guān)系。
分光光度計采用的比色杯的寬度通常是1cm，所以光路長度固定為1cm。因此不同儀器，不同批次測量的數(shù)據(jù)具有同樣的可比性。
酶標儀采用的是垂直光路，所以光路的長度應(yīng)該是液體液面的高度，所以測得的值受到樣品的體積的影響。
