生物指示劑分為三種：芽孢懸液、芽胞菌片、菌片和培養基混合指示管。一般放在滅菌容器的5個點：下層的前、中、后和上層、中層的中央點。滅菌后取指示劑接種到溴甲酚紫-葡萄糖蛋白胨水中，55-60℃培養2-7天，若培養基澄清、顏色沒有變化即說明芽孢被殺死，滅菌器滅菌效果良好；如果培養基黃色渾濁，說明芽孢未被殺滅，滅菌器滅菌效果不合格。芽孢懸液和芽孢菌片的驗證方法均是如此。

目前實驗室還常用商品化的生物指示管，其原理與芽孢懸液和芽胞菌片相同，指示管中有嗜熱脂肪芽孢桿菌芽孢和培養液玻璃小管，將指示管放在滅菌容器內的各個點上，高壓滅菌后，將管中盛培養液的玻璃管擠碎，培養液從內部的小管中被放出，放入56℃培養箱中培養，同時做陽性對照。若是滅菌器滅菌效果不合格，指示管內的芽孢復活后生長會改變肉湯的顏色是肉湯變為黃色；若是滅菌器滅菌效果良好則管內芽孢被滅活不再生長，肉湯仍舊是原來的紫色。

對于滅菌器的效果驗證，目前并沒有相關標準嚴格的要求驗證的頻次，但是實驗室應當自行制定驗證頻次規定，并嚴格按照要求進行。從操作性和驗證結論兩個方面出發，小編推薦使用指示膠帶和生物指示管，因為這兩種方法操作簡單，可以對滅菌效果進行全面的驗證。