麥氏比濁管是McFarland發明的一種用于微生物比濁的不同濁度的標準濁度管。具體的配制方法是根據硫酸和氯化鋇的比例來定的,有表可查,這樣不同比例生成的硫酸鋇沉淀的濃度不同,且都有定值。麥氏比濁管的配比如下:
這是傳統的麥氏比濁管的配制方法,目前也有市售的商品化產品,不需要自己配制,并且還有由乳膠粒子懸浮液制成的麥氏比濁管,與傳統的麥氏比濁管相比,保存時間更長也更穩定。但麥氏比濁管具體應該怎ô使用呢?
操作方法:
1、輕搖標準試管。
2、無菌操作將被測定的肉湯培養物加到與標準管相同直徑(大小)的無菌試管中。
3、以無菌操作向被測定試管加入無菌生理鹽水(NaCl),直到濃度與所要求的標準管的濃度相同。
4、直接用眼睛看(需要經驗,誤差較大)。
5、找張白紙,打上平行直線,然后觀察讀數(如圖示,利用光在不同濃度液體折射不同)。
注意事項:
1、如果測定的肉湯培養物不澄清,由培養物的值減去δ接種培養基的值來校正細菌濃度。4號管(肉湯培養物)-1號管(孵育過的δ接種的肉湯管)=3號管(校正讀數)。
2、如果肉湯顏色很深,把δ接種試管放在標準管的后面讀數即可。
3、測定好的細菌,最好做一下梯度稀釋涂布計數。
4、此濃度是對應的大腸桿菌的濃度,如果是其他細菌,會有一定的差別,但通常差別都在一個數量級之內,適合于普通實驗。
5、此種方法測定的準確性不是很高,如果是對細菌數量要求較精確的,請用紫外分光光度計。
6、麥氏比濁液應放室溫暗處保存,用前混勻,有效期為6個月。應用時為了準確也可以使用比濁儀但一定要防止麥氏濁度標準管δ搖勻或已過期失效。
在微生物學檢驗中,麥氏比濁法常作為細菌鑒定、實驗配制菌液時大致判斷菌液濃度的一種方法,通常認為,如將配菌液濃度配成0.5麥氏比濁管時,相當于1.0×108細菌數/mL,由于方法本身就是一種估計的方法,所以盡管不同細菌大小差異很大,但除了真菌孢子,細菌的差別不大,結果不會有影響。
另附孢子菌懸液制作方法:
菌種活化
將保藏菌接種在PDA斜面培養基試管中,培養7d~14d,使生成大量孢子。δ制備孢子懸液時,不得拔去棉塞。ÿ打開1支只供制備1次懸液,ÿ次制備孢子懸液必須使用新培養的ù菌孢子。
孢子懸液制備
在上述PDA斜面培養基中加入少量無菌蒸餾水,用無菌接種環輕輕刮取表面的新鮮ù菌孢子,將孢子懸液置于250mL錐形瓶內,然后注入40mL洗脫液。
錐形瓶中加入直徑5mm的玻璃珠10粒~15粒與孢子混合,具塞后置水浴振蕩器中不斷振蕩使成團的孢子散開,然后用單層棉紗布過濾以除去菌絲。將其裝入滅菌離心管中,用離心機分離沉淀孢子,去上清液。再加入40mL洗脫液,重復離心操作3次。制成濃度為(0.8~1.2)×106spores/mL的ù菌孢子懸液。若需要精確計數,則可以用改良察氏液體培養基稀釋孢子懸液,用血球計數板計數。孢子懸液應在當天使用,若不在當天使用應在 3℃~7℃保存,并盡量在4d內使用。